原代细胞标准操作要点

原代细胞标准操作要点
优质的试剂，良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。ELISA中用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的本公司要求使用的纯化水电导率小于1.5μs/cm。
1.标本的采取和保存
大部分ELISA检测均以血清为标本。血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，标本在冰箱中保存时间过长导致血清IgG聚合，使间接法的试剂本底加深。超过一周测定的需－20℃保存。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀并避免产生气泡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存。保存血清自采集时就应注意无菌操作，也可加入适当防腐剂。
抗凝不完全的标本因纤维蛋白原的干扰而造成假阳性，建议尽量不用抗凝血尤其是肝素抗凝剂。
2.加样
加样时应将所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出。
3.保温
在建立ELISA方法作反应动力学研究时，实验表明，两次抗原抗体反应一般在37℃经
1-2小时，产物的生成可达顶峰。为避免蒸发，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔，反应板不宜叠放，以保证各板的温度都能迅速平衡。应注意温育的温度和时间应按规定力求准确。由于公司的试剂盒温育是在空气浴中完成，采用水浴会造成值偏高或花板。另外温育中还有边缘效应，边上的值会偏高，建议为了客观的判断结果，将质控放在非边缘位置。
4.洗涤
洗涤在ELISA过程中虽不是一个反应步骤，但却决定着实验的成败。ELSIA就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，而在洗涤时应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。可以说在ELISA操作中，洗涤是Z主要的关键技术，应引起操作者的高度重视，操作者应严格按要求洗涤，不得马虎。
原代细胞HGSMC人胃平滑肌细胞5x10^5cells/vial
HIMEC人肠微血管内皮细胞5x10^5cells/vial
HISMC人肠平滑肌细胞5x10^5cells/vial
HCoMEC人结肠微血管内皮细胞5x10^5cells/vial
HCSMC人结肠平滑肌细胞5x10^5cells/vial
HRSMC人直肠平滑肌细胞5x10^5cells/vial
HPMEC人肺微血管内皮细胞5x10^5cells/vial
HPMEC-a人肺微血管内皮细胞-成人5x10^5cells/vial
HPAEC人肺动脉内皮细胞5x10^5cells/vial
HPASMC人肺动脉平滑肌细胞5x10^5cells/vial
HPAF人肺动脉成纤维细胞5x10^5cells/vial
HPAEpiC人肺泡上皮细胞1x10^6cells/vial
HBEpiC人支气管上皮细胞5x10^5cells/vial
HTEpiC人气管上皮细胞5x10^5cells/vial
HSAEpiC人小气道上皮细胞5x10^5cells/vial
HPF人肺成纤维细胞5x10^5cells/vial
HPF人肺成纤维细胞1x10^6cells/vial
HBSMC人支气管平滑肌细胞5x10^5cells/vial
HTSMC人气管平滑肌细胞5x10^5cells/vial
HBF人支气管成纤维细胞5x10^5cells/vial
HSkMC人骨骼肌细胞5x10^5cells/vial
HSkMSC人骨骼肌卫星细胞5x10^5cells/vial
HSkMM人骨骼肌成肌细胞5x10^5cells/vial
HACC人肾上腺皮质细胞5x10^5cells/vial
HRGEC人肾小球内皮细胞5x10^5cells/vial
HRPTEpiC人肾小管上皮细胞5x10^5cells/vial原代细胞

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