荧光显微镜原理和构造

荧光显微镜的原理和结构：

荧光显微镜使用具有高发光效率的点光源，该点光源通过滤色镜系统发出一定波长的光（例如3650 in的紫外线或4200 in的紫蓝色）作为激发光，并激发荧光物质在标本中发出各种不同的荧光后，通过物镜和目镜的放大倍数观察。这样，在强对比度背景下，即使荧光非常弱，也易于识别并且具有高灵敏度。它主要用于细胞结构和功能以及化学成分的研究。荧光显微镜的基本结构是由普通的光学显微镜加上一些附件（如荧光光源，激发滤光片，二色分光镜和阻挡滤光片等）组成。荧光灯通常使用超高压汞灯（50-200W），该灯可以发出各种波长的光，但是每种荧光物质的激发光波长都产生的荧光，因此，激发滤光片（通常有紫外，紫色，蓝色和绿色激发滤光片），仅允许一定波长的激发光通过并照射样品，而所有其他光均被吸收。在每种物质被激发光照射后，它会在很短的时间内发出波长比照射波长更长的可见荧光。荧光是特定的，通常比激发光弱。为了观察特定的荧光，在物镜后面需要一个阻挡（或YZ）滤光片。它具有两个功能：一个是吸收并阻止激发光进入目镜，以免打扰荧光并伤害眼睛；另一个是选择并允许特定的荧光通过，从而显示特定的荧光。颜色。必须选择两种过滤器并一起使用。

就其光学路径而言，荧光显微镜有两种类型：

1.透射荧光显微镜：激发光源用于通过聚光器激发穿过样本材料的荧光。常用的暗场聚光器以及普通的聚光器都可以调节反射镜，从而使激发光重定向并侧向反射至样品。这是一台较旧的荧光显微镜。优点是荧光在低放大倍数下很强，但缺点是荧光随着放大倍数的增加而减小。因此，观察较大的标本材料。

2. Epi荧光显微镜这是现代开发的新型荧光显微镜。不同之处在于，激发光从物镜落到样本的表面，也就是说，相同的物镜被用作照明聚光器和用于收集荧光的物镜。必须将双色分束器添加到光路中，其中铀为45。角度，激发光被反射到物镜中并集中在样品上。样品产生的荧光和物镜和盖玻片表面反射的激发光同时进入物镜，并返回到双色分光镜，使激发光与荧光分离，剩余的激发光被阻挡滤光片吸收。如果更改为其他激发滤光片/双色分束器/阻挡滤光片组合插入件，则可以满足不同荧光反应产物的需求。这种荧光显微镜的优点是视野均匀，成像清晰，放大率越大，荧光越强。