通过安捷伦Poroshell 120 EC-C18色谱柱分析偶氮染料显著节省了时间和溶剂

偶氮染料是一大类含偶氮基团-N=N-的合成有机染料，常用于着色纺织品和皮革，但某些偶氮染料释放有致癌风险的芳香胺。因此，欧盟（EU）严格控制对这些有害胺类的暴露水平。欧盟法规14362[1,2]禁止使用释放表1所列22种芳香胺类的偶氮染料，禁止将其用于与人体皮肤或口腔有直接或长期接触的纺织品和皮革制品中。

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我们用安捷伦Poroshell120EC-C18，3.0x150mm，2.7µm色谱柱和安捷伦1290Infinity液相色谱仪，分析了26种芳香胺——包括EU禁止的22种。对EN14362中的方法进行梯度改良，提高了在该柱上的分离度（表2）。标准品混合物用甲醇和流动相A（10:90）溶解，配制成浓度为12µg/mL，于40°C下避光保存。

色谱柱：

Poroshell120EC-C18,3.0×150mm,2.7µm

柱温：

40°C

流速：

0.8mL/min

流动相：

A,0.575gNH4H2PO4,0.7gNa2HPO4溶于900mL水+100mL甲醇，用磷酸调节pH至6.9；B,甲醇

进样量：

1µL

DAD波长：

240nm,280nm,305nm

EU方法采用4.6x250mm，5µm色谱柱进行分析，梯度洗脱70分钟[[1]，但我们使用了Poroshell120EC-C18，3.0×150mm，2.7μm色谱柱，为这些芳香胺类化合物提供了良好的选择性和峰形。2.7µm表面多孔填料提供了与亚2µm全多孔填料相近的性能，150mm色谱柱提供了非常高的峰容量。这类复杂混合物样品需要高峰容量，才能在短分析时间内得到更好的分离度。在这一混合物中，4,4'-亚甲基双苯胺（11）、6-甲氧基-间-甲苯胺（12）、2,6-二甲基苯胺（13）、2,4-二甲基苯胺（14）,3,3'-二甲氧基对二氨基联苯（15）和3,3'-二甲基对二氨基联苯（16）很难分离，因为它们对梯度的略微变化非常敏感。现在我们通过改良梯度，在15分钟内分离了所有26种化合物（图1），比推荐方法几乎快80%。3.0mm较小内径色谱柱比4.6mm内径色谱柱节省溶剂约60%左右。

许多偶氮染料都有自己的ZdaUV吸收，所以用多波长，包括240nm、280nm和305nm进行检测，每个峰都得到Z佳信号（图2）。

2.7µm表面多孔填料的性能与1.8µm填料相似，但反压低40%。即使使用150mm色谱柱，Zda反压也只有580bar，所以，该方法仍可以在600bar压力限的UHPLC柱上运行。

较长的Poroshell120EC-C18色谱柱，与安捷伦1290Infinity液相色谱系统匹配，将在获得更高分离度、更快速度和更可靠结果方面为您提供更大的灵活性。图3中的叠加色谱图表明，该方法具有良好的重现性。这些图谱包括用2个不同批次流动相在2天中得到的色谱图。

用新的Poroshell120EC-C18表面多孔填料柱，在15分钟内基线分离了26种偶氮染料。该方法提供了出色的重现性和可靠的结果，分析时间缩短了近80%，溶剂用量减少了60%。

如需进一步了解Poroshell120色谱柱的多种优点，可下载应用报告5990-7705EN以了解此次分析的详细资料。

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