如何利用流式细胞仪检测细胞周期

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【导读】首先我们这边先来看下这样的问题：新消化获得的细胞直接染色立马上机检测，这一步是不是必须的？RnaseA的作用包不包括去处胞内的双链RNA？是的话，RnaseA能直接穿膜吗？...

首先我们这边先来看下这样的问题：新消化获得的细胞直接染色立马上机检测，这一步是不是必须的？RnaseA的作用包不包括去处胞内的双链RNA？是的话，RnaseA能直接穿膜吗？不是的话，胞内的双链RNA不管了？阴参的设定是不是健康成人外周血的淋巴细胞就可以了？
根据这样的染色方法而定，原理都是先打孔再染色，因为PI没有穿膜作用。所以不同就在打孔的方法上。现在基本有两种方法，一种就是乙醇固定。70-75%浓度效果都差不多，优点是作用比较轻柔，可长时间固定，一般一个月都没问题，更长时间我没试过。适用于不能预计上机时间的朋友，可以先固定好几批细胞然后再一起染色上机。缺点就是打孔时间较长，至少过夜才能保证打孔效果。另一种就是用Triton打孔，这种方法比较激烈。优点是速度快，消化以后可以马上打孔染色上机，而且不使膜蛋白变性，不容易造成粘连。缺点就是不能长时间保存样品，一般Z好半个小时内检测，不然时间越久细胞DNA含量的离散度越高，图像越难看。不过现在很多厂家的试剂盒都是用这种快速打孔的方式。膜通透性改变以后酶可以进去。

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2004-08-07 09:10:55

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