肉制品胭脂红着色剂的测定

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【导读】1、适用范围适用于肉制品中胭脂红着色剂的测定。2、提取步骤试剂的配置：1）硫酸溶液：1+9体积比；2）钨酸钠溶液：C=100g/L；3）无水乙醇+氨水+水=7+2+1；4）柠檬酸溶...

1、适用范围

适用于肉制品中胭脂红着色剂的测定。2、提取步骤

试剂的配置：

1）硫酸溶液：1+9体积比；

2）钨酸钠溶液：C=100g/L；

3）无水乙醇+氨水+水=7+2+1；

4）柠檬酸溶液：C=200g/L；

4）pH=5的水，取100mL的水，用柠檬酸溶液调节至pH值=5.

提取过程：称取试样10g，均质器均质1min，然后加入20mL石油醚提取脂肪，超声5min，静止沉降2min后弃去石油醚，重复3次。吹干后加入10mL提取液（无水乙醇+氨水+水=7+2+1）提取胭脂红，边搅拌边过滤（用30mL带筛板的固相萃取空柱管进行过滤），重复提取3-5次，收集全部的提取液。70oC水浴旋蒸至10mL以下，加入1mL硫酸溶液和1mL钨酸钠溶液，继续70o

注意：1）提取胭脂红需多次提取，确保提取完全；

2）提取胭脂红的过程中不能用滤纸过滤，因为滤纸会极大程度的吸附胭脂红色素；

3）本解决方案创新性的以SPE空柱管作为过滤提取后的肉制品的装置，相比其他的过滤装置更为GX；

4）提取胭脂红后所得的样品溶液，加入硫酸溶液和钨酸钠溶液沉淀蛋白后，需要用纯水洗涤蛋白残渣，这样可以有效的提取吸附在蛋白残渣中的胭脂红；

5）本实验的加标回收率是将肉制品去除脂肪后，再加入胭脂红进行加标回收率实验。

3、聚酰胺SPE柱净化步骤净化：

SPE柱：WelchromPA（1g/6mL）

活化：6mL纯水；

上样：将提取步骤处理好的样品溶液过Welchrom聚酰胺固相萃取柱，弃去上样流出液；

淋洗：6mLpH=5的水，6mL甲醇+加酸（6+4），12mL纯水洗至中性；

洗脱：6mL无水乙醇+氨水+水(7+2+1)，收集洗脱液。

浓缩：将收集的洗脱液旋蒸至近干，加水定容至10ml，过水膜上机测定。

标样配置：1mg./ml胭脂红标准溶液，取50l并用水定容至10mL

注：浓缩后的溶液应用水系滤膜过滤，不能用有机系滤膜，因为有机系滤膜容易吸附胭脂红，从而损失回收率。4、色谱条件：色谱柱：月旭UltimtaeXB-C18,4.6×150,5m；

流动相：甲醇：0.02mM乙酸铵溶液，梯度洗脱；

流速：1.0mL/min；

柱温：30℃

检测波长：254nm；

进样量：20L表1：液相色谱梯度洗脱条件

时间/min

甲醇/%

0.02mM乙酸铵溶液/%

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2004-08-20 09:23:04

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