细胞流式检测准备（直接标记一抗）

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【导读】试剂准备1.准备荧光标记的一抗和同型对照抗体2.细胞洗液：含有2%BSA（牛血清白蛋白）、0.1%叠丹化钠的PBS.3.固定液：1%多聚甲醛PBS液（pH7.2）pH...

试剂准备

1.准备荧光标记的一抗和同型对照抗体

2.细胞洗液：含有2%BSA（牛血清白蛋白）、0.1%叠丹化钠的PBS.

3.固定液：1%多聚甲醛PBS液（pH7.2）pH值一定要准确，否则会影响检测结果。

操作方法

1.每个样品取2支流式检测管，分别注明同型对照和待测，两管分别加入106-7/100μl个待侧细胞（若细胞浓度低或加入的细胞悬液较多，可1200转/每分钟，10分钟低温离心，弃上清，保证100μl被检样品）

2.同型对照管中加入荧光标记同型对照抗体，做阴性对照；待测管中加入荧光标记的一抗，做为实验管，各加3μl(按抗体使用说明书，一抗可做选择几个梯度1：20、50、100倍稀释)混匀即可。

3.4℃度孵育30分钟，加入细胞洗液，1200转/每分钟，10分钟低温离心，反复2次。

4.去除上清，控干，加入固定液0.5ml,混匀。

5.上机检测，先做同型对照，调整电压至阴性区范围，再测实验管即可。

2004-07-13 09:31:27

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