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- 【导读】 试剂准备1.准备荧光标记的一抗和同型对照抗体2.细胞洗液:含有2%BSA(牛血清白蛋白)、0.1%叠丹化钠的PBS.3.固定液:1%多聚甲醛PBS液(pH7.2)pH...
试剂准备
1.准备荧光标记的一抗和同型对照抗体
2.细胞洗液:含有2%BSA(牛血清白蛋白)、0.1%叠丹化钠的PBS.
3.固定液:1%多聚甲醛PBS液(pH7.2)pH值一定要准确,否则会影响检测结果。
操作方法
1.每个样品取2支流式检测管,分别注明同型对照和待测,两管分别加入106-7/100μl个待侧细胞(若细胞浓度低或加入的细胞悬液较多,可1200转/每分钟,10分钟低温离心,弃上清,保证100μl被检样品)
2.同型对照管中加入荧光标记同型对照抗体,做阴性对照;待测管中加入荧光标记的一抗,做为实验管,各加3μl(按抗体使用说明书,一抗可做选择几个梯度1:20、50、100倍稀释)混匀即可。
3.4℃度孵育30分钟,加入细胞洗液,1200转/每分钟,10分钟低温离心,反复2次。
4.去除上清,控干,加入固定液0.5ml,混匀。
5.上机检测,先做同型对照,调整电压至阴性区范围,再测实验管即可。
- 2004-07-13 09:31:27
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