PPA制备与使用的基本技术

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【导读】将初步纯化的SPA与HRP用过碘酸钠氧化法（交联反应时间在22℃下5h）交联。将上述PPA溶液过SephadexG-100柱，条件同前。所收集的第1管至第22管的合并液，是PPA存...

将初步纯化的SPA与HRP用过碘酸钠氧化法（交联反应时间在22℃下5h）交联。将上述PPA溶液过SephadexG-100柱，条件同前。所收集的第1管至第22管的合并液，是PPA存在的主要组分，可用ELISA塑料平板法检测活性。将合并液浓缩，然后加入30%左右甘油，贮于4℃冰箱备用

PPA的使用

PPA-ELISA法。基本上与ELISA法相同，PPA代替了酶标抗抗体。在进行微量反应板测定时，PPA常常加入0.1ml,稀释度一般在1：2至1：100（应按不同情况试验）。PPA与IgG是化学共价结合，反应时间不宜过长，不应超过2h，控制在30min-60min,反应时间过长会使PPA吸附到塑料载体上去。用PPA进行组织内有关抗原的定位。甲醛对PPA有显色影响，因此组织不可用甲醛固定，可用甲醛、乙醇等。PPA对组织内抗原（先与IgG结合）的定位，反应时间可以延长，便于渗透入组织细胞内，且没发现严重的物理吸附现象。在PPA实验中稀释液常用含0.5%（v/v）Tween20的0.02mol/LPh7.4Tris-HC1缓冲液（2.42gTris溶于蒸馏水后用0.1NHC1调pH至7.4，然后加蒸馏水定容至1000ml,Z后加0.5mlTween20）。上海研谨生物公司对外承接RT-PCR技术服务、细胞培养技术服务、原位杂交技术服务、免疫沉淀技术服务、WesternBlotting技术服务、动物模型构建服务、SCI论文服务、PCR实验服务，并为广大科研用户提供各种高品质的试剂和服务，如细胞、血清、Elisa试剂盒、质粒提取试剂盒、DNA产物纯化试剂盒、病毒RNA提取试剂盒、PCR等产品，针对以上各项服务，我们均有具有丰富服务经验和深厚专业背景的人员团队为您提供技术服务和支持。

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2004-08-31 09:23:06

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