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- 【导读】实验材料1.感染性EB病毒通常取自绢猴细胞系B95-8的限制培养基。该细胞系源于EB病毒感染的绢猴外周淋巴细胞,产生高滴度感染病毒。2.全血实验步骤1.混合10ml全血和10mlR...
实验材料
1.感染性EB病毒通常取自绢猴细胞系B95-8的限制培养基。该细胞系源于EB病毒感染的绢猴外周淋巴细胞,产生高滴度感染病毒。
2.全血
实验步骤1.混合10ml全血和10mlRPMI1640生长培养基
生长培养基
RPMI1640800ml
FBS200ml
2mmol/LL-谷氨酰胺
5μg/ml两性霉素
50μg/ml庆大霉素2.取15ml无菌离心管,加3mlHisto-paque1077(Sigma),在其上加4ml稀释血,分离淋巴细胞。
3.室温300g离心30min,弃上层清亮血浆。
4.收集不透明的淋巴细胞层,细胞悬液倒入50ml无菌离心管。
5.20mlRPMI1640生长培养基洗2次,室温300g离心10min。
6.10ml血锋利的细胞悬于1.0ml含EB病毒的上清。含EB病毒上清来自绢猴细胞系B95-8(ATCC提供)的限制培养基,含EB病毒的B95-8限制培养基用前应过滤[(0.22μm无菌滤膜(Corning)],避免污染绢猴细胞。
B95-8绢猴细胞产生高滴度感染性EB病毒,应在P2实验室中作为生物毒剂操作。高密度绢猴细胞不更换或补加培养液温育8天,收集上清,0.22μm无菌滤膜过滤,用于无限增殖的话,含EB病毒限制培养液4℃可贮存4-8周。
7.细胞悬液(1.0ml)放入25cm2组织培养瓶,垂直放置,37℃5%CO2孵育1~3h。
8.孵育后,加入3ml含0.2μg/ml刀豆凝集素A的RPMI1640生长培养基,水平放置,使细胞均匀分布于全生桌面。隔几天观察一次细胞生长状况,集落的形成标志着细胞已无限增殖化。
9.每周加1ml含刀豆凝集素A的新鲜RPMI1640生长培养基,不要吸出原培养基。仪器网-专业分析仪器服务平台,实验室仪器设备交易网,仪器行业专业网络宣传媒体。
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