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1、提取

10 mL 样品与20 mL 乙腈混合，10000rpm 下均质1 min，4000 rpm 下离心5 min，收集上清液。取15 mL 提取液（相当于5 mL 样品），35℃ 下减压蒸馏除去乙腈，向剩余的水相加入20 mL 磷酸盐缓冲液*，并用0.1 mol/L NaOH 溶液调节pH 8.5，混匀，待净化。

注：0.05 mol/L 磷酸氢二钾溶液，pH 8.5

2、净化

a 活化： 将6 mL 甲醇、6 mL 水依次加入ProElut PLS 500 mg/6 mL (Cat.#68005)，流出液弃去；

b 上样： 将待净化的样品液加入柱中*，流出液弃去；

c 淋洗： 依次用3 mL 磷酸盐缓冲液*、3 mL 水淋洗，淋洗液弃去，并将PLS 柱抽干；

d 洗脱： 用6 mL 乙腈洗脱，收集洗脱液；

e 重新溶解：35 oC 下将洗脱液用氮气吹干，然后用0.05 mol/L 磷酸盐缓冲溶液（pH 7.0）定容至1 mL，微孔滤膜过滤后，LC-MS/MS 分析

注：样品体积大于柱容积，需分次上样或在PLS 柱上安装60 mL 储液管 (Cat.#4812)，适配器 (Cat.#4803) ；0.05 mol/L 磷酸氢二钾溶液，pH 8.5。

流动相：缓冲溶液+ 乙腈，梯度

流速：1.0 mL/min

进样量：20 μL

柱温：30 ℃

检测器：串联质谱，ESI+，MRM 模式检测

适用于牛奶中羟氨苄青霉素、邻氯青霉素、双氯青霉素等青霉素类药物的检测。

1. 羟基苄青霉素；2. 氨苄青霉素；3. 甲氧苯青霉素；4. 苄青霉素；5. 苯氧甲基青霉素；6. 苯唑青霉素；7. 苯氧乙基青霉素；8. 邻氯青霉素；9. 乙氧萘青霉素；10. 双氯青霉素