非洲猪瘟检测荧光定量PCR优良试剂的选择
非洲猪瘟检测荧光定量PCR优良试剂的选择:
Real Time PCR试剂的选择是否合适,也是实验成功的关键点,所以在这里有必要对试剂的选择要点加以说明。
1、根据采用的荧光检测方法进行试剂选择。选择探针法专用试剂或SYBR Green I法专用试剂。
2、Real Time PCR反应对反应特异性要求高。好选择应用Hot Start DNA聚合酶的试剂。但有一点需要强调,Hot Start DNA聚合酶有两种类型,即化学修饰型和抗体结合型。使用这两种Hot Start DNA聚合酶的PCR反应条件不同,使用化学修饰型Hot Start DNA聚合酶,需要在PCR条件的初步骤设置10~15分钟的热变性程序,以恢复DNA聚合酶的活性;而抗体结合型Hot Start DNA聚合酶,不需要长时间的热变性步骤,通常的PCR条件即可恢复DNA聚合酶的活性,适合快速PCR反应。
3、所选试剂要与使用的Real Time PCR检测系统相匹配。好选择对各种机型装置都显示良好反应性能的试剂。
4、Real Time RT-PCR要根据实验目的进行试剂选择。mRNA表达量分析选择Two Step RT-PCR试剂,病毒病原菌检测选择One Step RT-PCR试剂。
5、标准曲线的质量直接影响定量的准确性。建议使用标准品专用稀释Buffer稀释标准品。
6、Real Time PCR 反应通常样品数量较多,操作步骤过多易产生错误。好选择PCR反应用Buffer、DNA聚合酶、dNTP等试剂已经预混在一起的2×Premix Type试剂,操作加简单方便。同时,使用的试剂好不需要进行Mg2+浓度的优化等实验。
非洲猪瘟病毒检测主要应用便携式荧光定量PCR仪,莱普特便携式实时荧光定量PCR仪,多可配置3个荧光检测通道,标配16孔的检测通量,可通过内置触屏完成所有实验操作与结果分析。是检测非洲猪瘟病毒的理想选择,小巧的机身设计,可选配外接电池等特点,可充分满足用户对于小通量实验以及外出实验和编写的各方面的各种需求。是当前用于食品加工领域检测的必备设备。
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