cIEF方法测定AAV(腺相关病毒)的等电点
腺相关病毒(AAV)是由结构蛋白与内部核酸物质组成复制缺陷性病毒,由于其具有表达时间长、特异性强、安全性高、免疫原性低等优势,被广泛认为是介导基因ZL的理想载体之一。
病毒颗粒的衣壳表面暴露的氨基酸侧链决定了AAV具有特定的等电点(Isoelectric Point,pI),内部核酸的填充情况会造成AAV等电点的差异。AAV是通过重组表达生产,不同的血清型及病毒构建的不完整性均可影响产品的等电点,因此等电点的特性可用于鉴别和监控AAV的种类和产品质量。
PA 800 Plus药物分析系统与cIEF等电点测定试剂盒(图1)可以直接分析完整病毒颗粒,不存在污染毛细管或堵塞毛细管的情况,是测定AAV等电点的有效方法,检测结果如图2。
图1. PA 800 Plus药物分析系统与cIEF等电点测定试剂盒
相比于其他方法,SCIEX提供的cIEF等电点测定解决方案具有以下优势:
· 分辨率高:使用30 cm毛细管,可以得到更高的分离度,有助于了解AAV完整程度(完整包装核酸、部分填充或者未包装核酸);
· pI信息准确度高:使用3个pI marker计算等电点,具有线性相关性,结果可靠;
· 重现性好:pI的RSD(相对标准偏差)<2%,纯度的RSD<5%(n=6);
· 方法灵活度高:可针对不同血清型AAV调节不同尿素浓度或两性电解质范围,得到更优异的结果;
· 方法简便:使用cIEF试剂盒即可完成检测。
图2. cIEF方法分析AAV的等电点
详细信息请参考SCIEX 技术说明:
高铁,陈泓序,李响;毛细管等电聚焦方法(cIEF)测定腺相关病毒(AAV)的等电点;RUO-MKT-02-11344-ZH-A.
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