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你知道吗?
从18世纪血球计数板首次被应用于分析病人血液样本以来,逐渐发展为实验室细胞计数的标准工具。
但是由于其本身固有设计的简易性和使用过程的复杂性,导致其计数结果会有一个必然的误差。其误差主要来源于人为操作因素:
细胞悬液的混匀
均匀细胞悬液的准备对计数结果的准确性至关重要。对于某些极易聚团或未能均匀打散的细胞悬液,人工计数时,往往不易识别。
细胞悬液的稀释
依据大多数实验室的习惯,通常会采取对四个顶角的大格内的细胞进行统计计数,每个大格的细胞一般落在30-50个之间时,计数结果会更加准确。这就意味着,细胞悬液过浓或者是过稀都不利于获得准确的结果。多数情况下,我们需要对悬液进行有效的稀释。
盖玻片的摆放
据一项研究表明,在计数过程中,盖玻片的位置不准确可造成7.6%的计数差异。
人工计数过程的误差
一项实验表明,不同操作者之间的计数差异能高达52%,而同一个操作者的计数差异为20%。在计数过程中,往往需要同一个人在相同的条件下进行多次计数以消除误差。(即使这样,也可能会产生20%的误差)
人为计算过程的误差
通过计数板获取的数据结果,需要通过一系列的计算,从而转化成实际的细胞浓度数据。再乘以细胞原液的稀释倍数(如台盼蓝的稀释等),方能得到所需样品的细胞浓度。计算过程中的误差也会影响到Z终的实验结果。
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