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小师妹：师姐，我要研究药物与恐惧记忆关系，求指导！

大师姐：通常认为恐惧记忆与杏仁核相关(Gallagher and Chiba, 1996; Swanson and Petrovich, 1998)，如果你想研究药物与恐惧、奖赏等行为关系，你需要先研究药物与杏仁核的关系。在对杏仁核进行脑立体定位注射时，分为单次注射与多次注射，单次注射可直接使用KDS 130配合定位仪进行。如果需要多次反复给药，就需埋置套管。杏仁核可区分为BLA(基底外侧杏仁核)与CE(ZY杏仁核)，通常这两个脑区会有不同研究方向。比如BLA多与奖赏挂钩，CE主要与焦虑、恐惧相关(Kim et al., 2017)。具体坐标你可以参考文献与脑图谱。

图片来源于网络

为什么要采用颅脑给药的方式

       首先，采用颅脑给YF式是为了确保实验结果准确。血脑屏障的存在，会导致大部分物质无法到达颅脑。即便目标物质通过腹腔或者血管注射，经过体液循环进入了颅脑。但在这个过程中，大部分药物会被代谢。也就是说通过这种方式进入颅脑的物质，已经不是我们原先注射的药物，而是该物质的代谢物。这样得到的实验结果并不一定准确，需要对进入颅脑的代谢物进行检测，确定其结构。

       其次，这种给YF式有助于提高药物（特别是高价值药和自提药物）的使用效率。腹腔注射药物量往往比颅脑注射药物量要高几十倍（具体换算比例依照药物而定）。因此，当药品有限时，采用颅脑给药，能极大降低药品损耗。

为什么需要埋植套管

进行颅脑微量给药

这对实验有什么帮助

       导管，又名套管，其主要作用是通过立体定位埋植于小动物的目标脑区，结合注射泵、注射器、PE管、注射内针、锁紧螺帽等仪器，实现在特定脑区进行多次微量给药。套管常常使用在颅脑给药中。

       颅脑属于高精密、脆弱器官，内部虽有足够缓冲余地，但充满了脑脊液。脑组织既被颅骨保护，又被颅骨限制了空间，所以只适合微量缓慢注射给药，以减少对脑组织的损伤，同时保证药液进入目标区域。

       当我们需要短时间内连续颅脑给药时（比如连续7天），若采用立体定位注射，则每次都需要进行抓取、麻醉、立体定位、转孔注射药物操作。这样会给动物带来很强刺激，使得动物长时间处于应激状态，导致动物行为与代谢不正常。对后续行为学、化学、电学检测均有较大影响。而套管给药可以带来以下两个好处：

       1. 仅需一次埋植工作，就可实现长时间反复给药，使用方便GX。并且可避免反复拔插脑组织，保护脑组织不受二次伤害。

       2. 埋植后，可在动物清醒状态下进行给药实验，既适合给药后即刻对动物进行检测（行为学、电生理、光遗传等），也能在给药后较长时间内对动物进行检测（比如给药48h后检测）。

Reference：

1 M. Gallagher, and A. A. Chiba, 'The Amygdala and Emotion', Curr Opin Neurobiol, 6 (1996), 221-7.

2 J. Kim, X. Zhang, S. Muralidhar, S. A. LeBlanc, and S. Tonegawa, 'Basolateral to Central Amygdala Neural Circuits for Appetitive Behaviors', Neuron, 93 (2017), 1464-79 e5.

3 L. W. Swanson, and G. D. Petrovich, 'What Is the Amygdala?', Trends Neurosci, 21 (1998), 323-31.

在脑科学基础研究领域中，颅脑给药已经成为大多数动物实验的重要环节。根据实验设计，常见有三种给YF式：单次注射给药、多次反复给药和持续释放给药。前者通常采用立体定位仪配合微量注射泵给药，第二种通常采用套管给药，第三种通常通过植入式缓释泵给药。

本文主要介绍套管给药，它主要用于给小鼠、大鼠、猴等实验动物的目标脑区进行反复多次给药，也可结合配套光纤使用（光遗传），在给药的同时或者给药后继续对目标脑区进行光刺激。常应用于人类神经性疾病动物模型、高级脑功能、情感、认知等相关研究。

1.仪器设备与配件

脑立体定位仪、显微镜、冷光源、保温垫、手术垫、套管夹持器、手术器械包、酒精棉球、干棉球、颅钻（包括钻头）、异氟烷气体麻醉系统（或注射麻醉药品）、套管给药系统（导管、注射内管、导管帽、PE管、小螺钉）、微量给药系统（微量注射泵、微量注射器）

大小鼠剃毛器（非必须，可手术剪去毛）、快速灭菌器（主要用于手术器械消毒，避免引起小鼠颅内炎症）、颅骨水平校准器（非必须，主要降低实验上手操作难度）、颅钻夹持器（非必须，可手持颅钻钻孔替代）

2.试剂

碘伏、酒精、双氧水、生理盐水、牙科水泥（牙托水和牙托粉）、抗生素、异氟烷（或注射用麻醉药物）

3.操作步骤

3.1  根据脑图谱或文献确定目标脑区的三维坐标：AP 值（Anterior-Posterior，Y 轴，头部到尾部）、ML 值（Medial-Lateral，X 轴，中缝到两侧）和 DV 值（Dorsal Ventral，Z 轴，背侧到腹侧）。

瑞沃德电动全自动脑立体定位仪

3.2  将动物麻醉，头部固定到脑立体定位仪上（小鼠需要黑色适配器，大鼠无需适配器，直接固定即可）。调平颅骨，而后定位至目标脑区利用颅钻钻孔（同时在孔位附近钻 2-3 个小孔，用于旋入颅钉，作为牙科水泥着力点，防止牙科水泥脱落。同时这些小孔直径需要小于颅钉，这样颅钉才能旋紧，起到提供附着力效果），然后用针轻微刺破目标脑区上方孔德硬脑膜，暴露颅脑；颅钉固定位置硬脑膜无需刺破。将颅钉旋入孔内约三圈，然后将准备好的导管，通过夹持器缓慢植入颅内，再用牙科水泥将螺丝和导管包裹固定。

3.3 等待牙科水泥凝固后（约 15 分钟左右），移除夹持器（注意不要带动导管），并且缓慢插入导管帽，旋紧；根据实际情况判断是否需要缝合皮肤。

3.4  动物恢复期，约 2-3 天即可恢复。在此期间，可在皮肤周围涂抹罗红霉素软膏，防止动物发炎感染；同时注意动物状态，适时腹腔注射补充糖盐，使得动物获得足够多能量。

3.5  将注射内管、PE 管、锁紧螺帽、注射器提前组装好。利用注射泵吸取药物，在PE管上标注药液位置（主要用于注射药物过程中观察药物液面是否下降了）。随后取出导管帽，将注射内管缓慢插入导管，利用锁紧螺帽锁紧。

3.6  设置注射泵的注射量、注射速度，开始注射。注射完毕后，静止约 10 分钟，待药物被充分扩散，然后缓慢拔出注射内管，重新插入导管帽，旋紧。

4.注意事项

4.1 除金属导管帽外，建议对非金属导管帽、导管、注射内管、导管帽芯、锁紧螺帽和 PE 管均可以采用高压蒸汽、紫外、环氧乙烷等方式进行消毒灭菌。

4.2 使用 PE 管前，可以用大头针将 PE 管的一端接头撑大一点或者用酒精泡一小会，便于插入注射内管。插入注射内管时，务必注意的是，PE 管必须套在白色层外层（非金属管外层），否则易脱落、松动，导致漏液；

4.3 因 PE 管、注射内管内部存在死体积，因此在将注射内管、PE 管、锁紧螺帽、注射器组装好以后，插入导管前，应将注射液（比如药物）将 PE 管和注射内管充满，勿出现气泡，以保证注射药量的JZ。操作方法：需要先向前推注射器，直至注射内管前端有液体冒出，才可将注射内针插入导管，注射药物。

5.套管选择

（1）单管  

订货时，务必提前确认以下 4 个参数：

1）D-导管的外径，有 0.64、0.56、0.48、0.41 和 0.71 mm 五种规格供选择。

2）C-导管塑料基座 （B） 基座以下金属管的长度，即动物颅骨表面至目标脑区的垂直距离（单位：mm）。

3）G1-注射内管插入导管后突出部分的长度（单位：mm），一般选择 0.5 或者 1.0 mm。

4）G2-导管帽插入导管后突出部分的长度（单位：mm），一般选择 0 、0.5 或者 1.0 mm。 

（2）双管  

订货时，务必提前确认以下 5 个参数：

1）D-导管的外径，有 0.64、0.48 和 0.41 mm 三种规格供选择。

2）C-导管塑料基座 （B） 下金属管的长度，即动物颅骨表面至目标脑区的垂直距离（单位：mm）。

3）G1-注射内管插入导管后突出部分的长度（单位：mm），一般选择 0.5 或者 1.0 mm。

4）G2-导管帽插入导管后突出部分的长度（单位：mm），一般选择 0.5 或者 1.0 mm。

5）C.C-双导管的ZX间距，即两个目标脑区的水平间距（单位：mm）。

欢迎选购

       在脑科学基础研究领域中，颅脑给药已经成为大多数动物实验的重要环节。根据实验设计，常见有三种给YF式：单次注射给药、多次反复给药和持续释放给药。前者通常采用立体定位仪配合微量注射泵给药，第二种通常采用套管给药，第三种通常通过植入式缓释泵给药。

       本文主要介绍套管给药，它主要用于给小鼠、大鼠、猴等实验动物的目标脑区进行反复多次给药，也可结合配套光纤使用（光遗传），在给药的同时或者给药后继续对目标脑区进行光刺激。常应用于人类神经性疾病动物模型、高级脑功能、情感、认知等相关研究。

一、仪器设备与配件

       脑立体定位仪、显微镜、冷光源、保温垫、手术垫、套管夹持器、手术器械包、酒精棉球、干棉球、颅钻（包括钻头）、异氟烷气体麻醉系统（或注射麻醉药品）、套管给药系统（导管、注射内管、导管帽、PE管、小螺钉）、微量给药系统（微量注射泵、微量注射器）

       大小鼠剃毛器（非必须，可手术剪去毛）、快速灭菌器（主要用于手术器械消毒，避免引起小鼠颅内炎症）、颅骨水平校准器（非必须，主要降低实验上手操作难度）、颅钻夹持器（非必须，可手持颅钻钻孔替代）

二、试剂

       碘伏、酒精、双氧水、生理盐水、牙科水泥（牙托水和牙托粉）、抗生素、异氟烷（或注射用麻醉药物）

三、操作步骤

       1.根据脑图谱或文献确定目标脑区的三维坐标：AP 值（Anterior-Posterior，Y 轴，头部到尾部）、ML 值（Medial-Lateral，X 轴，中缝到两侧）和 DV 值（Dorsal Ventral，Z 轴，背侧到腹侧）。

       2.将动物麻醉，头部固定到脑立体定位仪上（小鼠需要黑色适配器，大鼠无需适配器，直接固定即可）。调平颅骨，而后定位至目标脑区利用颅钻钻孔（同时在孔位附近钻 2-3 个小孔，用于旋入颅钉，作为牙科水泥着力点，防止牙科水泥脱落。同时这些小孔直径需要小于颅钉，这样颅钉才能旋紧，起到提供附着力效果），然后用针轻微刺破目标脑区上方孔德硬脑膜，暴露颅脑；颅钉固定位置硬脑膜无需刺破。将颅钉旋入孔内约三圈，然后将准备好的导管，通过夹持器缓慢植入颅内，再用牙科水泥将螺丝和导管包裹固定。

       3.等待牙科水泥凝固后（约 15 分钟左右），移除夹持器（注意不要带动导管），并且缓慢插入导管帽，旋紧；根据实际情况判断是否需要缝合皮肤。

       4.动物恢复期，约 2-3 天即可恢复。在此期间，可在皮肤周围涂抹罗红霉素软膏，防止动物发炎感染；同时注意动物状态，适时腹腔注射补充糖盐，使得动物获得足够多能量。

       5.将注射内管、PE 管、锁紧螺帽、注射器提前组装好。利用注射泵吸取药物，在PE管上标注药液位置（主要用于注射药物过程中观察药物液面是否下降了）。随后取出导管帽，将注射内管缓慢插入导管，利用锁紧螺帽锁紧。

       6.设置注射泵的注射量、注射速度，开始注射。注射完毕后，静止约 10 分钟，待药物被充分扩散，然后缓慢拔出注射内管，重新插入导管帽，旋紧。

四、注意事项

       1.除金属导管帽外，建议对非金属导管帽、导管、注射内管、导管帽芯、锁紧螺帽和 PE 管均可以采用高压蒸汽、紫外、环氧乙烷等方式进行消毒灭菌。

       2.使用 PE 管前，可以用大头针将 PE 管的一端接头撑大一点或者用酒精泡一小会，便于插入注射内管。插入注射内管时，务必注意的是，PE 管必须套在白色层外层（非金属管外层），否则易脱落、松动，导致漏液；

       3.因 PE 管、注射内管内部存在死体积，因此在将注射内管、PE 管、锁紧螺帽、注射器组装好以后，插入导管前，应将注射液（比如药物）将 PE 管和注射内管充满，勿出现气泡，以保证注射药量的jing准。操作方法：需要先向前推注射器，直至注射内管前端有液体冒出，才可将注射内针插入导管，注射药物。

五、套管选择

1.单管  

订货时，务必提前确认以下 4 个参数：

       1）D-导管的外径，有 0.64、0.56、0.48、0.41 和 0.71 mm 五种规格供选择。

       2）C-导管塑料基座 （B） 基座以下金属管的长度，即动物颅骨表面至目标脑区的垂直距离（单位：mm）。

       3）G1-注射内管插入导管后突出部分的长度（单位：mm），一般选择 0.5 或者 1.0 mm。

       4）G2-导管帽插入导管后突出部分的长度（单位：mm），一般选择 0 、0.5 或者 1.0 mm。 

2.双管  

订货时，务必提前确认以下 5 个参数：

       1）D-导管的外径，有 0.64、0.48 和 0.41 mm 三种规格供选择。

       2）C-导管塑料基座 （B） 下金属管的长度，即动物颅骨表面至目标脑区的垂直距离（单位：mm）。

       3）G1-注射内管插入导管后突出部分的长度（单位：mm），一般选择 0.5 或者 1.0 mm。

       4）G2-导管帽插入导管后突出部分的长度（单位：mm），一般选择 0.5 或者 1.0 mm。

       5）C.C-双导管的ZX间距，即两个目标脑区的水平间距（单位：mm）。

详细的颅脑给YF式，请点击查看

2017年 4月 6日，美国LOGAN携手dai理商路易公司在上海中医药大学校内举办“药物溶出及经皮给药测试系统实验技术交流会”。LUKE LEE博士就药物溶出USP 1-7 法规要求及应用、尤其是外用药剂透皮扩散/植入体内药物等体外（In-Vitro）仪器测试系统和中医药大学的教授进行了深入的交流。

人类的悲欢并不相通

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文献方法笼统太粗略

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       通过一根导管，RWD缓释泵可将药物释放入静脉或动脉循环、大脑、器官、内腔或其他组织中。连接导管不会影响缓释泵的泵送率。以下为RWD缓释泵与导管合用时的准备步骤：

       1. 取下流量调节器的硅橡胶调节帽，露出在白色法兰之外的一小段不锈钢管。

       2. 将不锈钢管与PE导管连接起来，在连接好后，导管应能包裹住露出在白色法兰之外的整段不锈钢管（约3mm）。导管的内径（I.D.）为0.65mm-0.75mm。PE管适用于大多数应用领域。

       3. 使用注射器灌充导管和连接在一起的调节器，灌充时应从没有连接不锈钢管的一头灌注。灌注好后，将注射器留在导管上，不取下。

       4. 按照上文中的步骤，灌充RWD泵。

       5. 将流量调节器完全插入泵中，直到白色法兰与缓释泵的表面平齐。这时取下导管另一端的注射器。

       6. 将缓释泵置入37℃温度0.9%的盐水中6-8小时（Z好过夜）。这将使缓释泵在植入前即开始工作，将使导管内出现堵塞或形成凝块的可能性降至Z低。如果使用导管，就必须完做这一步。接下来即可将缓释泵和导管植入动物体内。

皮肤是经皮传递系统中药物必须跨越的生理屏障，研究药物在皮肤中的转运吸收行为，是进行经皮给药系统处方设计、制剂评价以及产品临床安全性和有效性预测的重要步骤。动物皮肤模型目前在经皮给药实验中是最为常用的，研究及应用较多的动物模型涉及小鼠、大鼠、家兔、猴、猪等。但是猴类动物饲养、实验成本较高，一般的实验室条件难以满足要求，限制了其应用。

小鼠皮肤的角质层薄，通透性远大于人皮，但因来源丰富、处理方便且结构与人皮相似，常用于药物透皮吸收研究，尤其多在早期处方筛选中应用。大鼠皮肤也是经皮给药制剂药动学研究中应用较广泛的模型，同样具有使用方便、价格较便宜、与人皮较为相近等优势。家兔皮肤也被用于透皮制剂的药动学评价，但其厚度约为人皮的一半，许多研究表明实验动物中家兔的皮肤渗透性最大，难以作为经皮吸收预测模型。不过，由于家兔皮肤对药物吸收快的性质，常被用来考察药物的皮肤毒性。

猪由于在解剖学、生理学、代谢等方面与人类相似，被广泛应用于生物医学领域。猪皮肤的组成、渗透性及体内代谢与人体较为相似。用于经皮研究的品种有Gottingen 小型猪、Yucatan 小型猪( 墨西哥无毛猪)、Yorkshire 猪、Landrace 猪及巴马香猪等。

梓梦科技的巴马香猪猪皮，1个月左右香猪，猪皮大小跟A4纸差不多，品质可保证，受到了很多实验室人员的喜欢。另外还有裸鼠皮。大鼠皮等。配合梓梦科技的外用制剂粒度仪ZML310，全面为您提供外用制剂服务。

2018年6月1日~3日，美国LOGAN携手dai理商路易公司，参加在上海皮肤病医院举办的“全国首届经皮给药医院制剂研讨会暨“经皮健康工程”启动会”。来自全国各地的专家教授就“全国皮肤病药物ZL学新进展暨外用制剂新技术”进行了学术交流。借此平台，我们现场展出了LOGAN 全自动透皮扩散测试系统，引起与会老师们的极大关注。 

干加热全自动透皮扩散取样系统914-6设计用于自动的将透皮吸收的样品准确地传输到HPLC样品瓶或者样品试管中，从而节省了实验的宝贵时间。本系统包括DHC-6T透皮扩散池控制台、SYP系列注射泵、DSC-800系统控制器和SCR-DL样品收集器。用于测试乳霜、乳液、药膏和外敷药贴等。其模块化设计，方便用户根据需要进行系统扩充。

研讨会上，来自大连理工大学制药科学与技术学院的院长汪晴教授做了“经皮给药系统的临床前研究与一致性评价诊治”的学术报告。LOGAN透皮扩散系统为药物渗透性研究提供解决方案，在体内外相关性（IVIVC）研究模型的构建中发挥了重要的作用。