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文献分享 | Echo Revolve显微镜助力PM2.5诱

艾普拜生物科技(苏州)有限公司 2021-01-11 14:09:27 254  浏览
  • PM2.5是指直径小于等于2.5微米的空气污染颗粒物,2015年暴露于环境中的PM2.5导致420万人死亡和1.031亿人残疾。PM2.5吸入人体后,首先遇到由呼吸道上皮高度特化的分泌细胞和纤毛细胞形成的粘液纤毛屏障。在之前的相关研究中,人们已经确认PM2.5与呼吸系统不良有关,但PM2.5诱导的肺病理生物学机制仍知之甚少,专家猜测PM2.5可能涉及呼吸道上皮的细胞和分子变化。美国研究人员研究报告表明PM2.5刺激可以使呼吸道上皮细胞直接产生相应的转录反应。

    这项发表在《美国呼吸细胞与分子生物学杂志(American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology)》上的研究提取了PM2.5污染样品中的有机和水溶性成分并找出其化学表征。对这些PM2.5提取物的致病物的筛选采用人鼻粘膜纤毛上皮细胞培养物的全转录组反应进行检测(转录组测序)。

    研究者们将提取到的PM2.5中的污染物分为有机(OE)和水溶性成分(WE)以及未单独分离的NIST作为对照。检测发现PM2.5的非水溶性有机提取物(OE)引发了粘膜纤毛上皮细胞的有效剂量依赖性转录反应。当细胞暴露于中等剂量OE中改变了424个基因的表达,包括芳香烃受体信号激活和白细胞介素-1炎症程序。根据这种改变产生了由八个功能富集组定义的运行经验反应基因网络,它通过CYP1A1、IL1A和IL1B表现出高连通性,OE暴露还强有力地激活了粘液分泌表达程序(大于100个基因),其中包括粘液化生的转录驱动因子(SPDEF,FOXA3)。

    当细胞暴露于较高OE剂量中改变了1240个基因的表达,并进一步加剧了中等剂量下观察到的表达反应,包括粘液分泌程序。较高的OE剂量显著增加了MUC5AC/MUC5B凝胶形成粘蛋白的表达比例,并强烈下调了纤毛细胞表达程序,包括关键的纤毛细胞转录因子(FOXJ1,MCIDAS)。慢性OE刺激诱导粘液化生样重塑,其特征为MUC5AC+分泌细胞和MUC5AC粘液分泌增加。

    获得分子和细胞层面的结果后,为了从组织学上证实这些结果,研究人员采用Alcian Blue-Periodic Acid-Schiff (AB-PAS)染色法检测培养物以鉴定粘蛋白阳性细胞,发现慢性OE刺激培养物与模拟刺激培养物中的粘蛋白阳性细胞数量更高。通过Echo Revolve显微镜对荧光免疫组织化学染色检测发现,慢性OE刺激下,MUC5AC荧光标记明显增多,其阳性细胞增加,表明这种粘蛋白是慢性OE刺激下AB-PAS染色增加的主要来源。这些数据表明,慢性OE刺激分别诱导MUC5AC+和MUC5B+粘液分泌细胞同时扩增和减少,导致这些粘蛋白分泌的相应变化。慢性OE刺激诱导粘液化生样上皮重塑可能是与高PM2.5暴露相关不良呼吸疾病的基础。


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文献分享 | Echo Revolve显微镜助力PM2.5诱

PM2.5是指直径小于等于2.5微米的空气污染颗粒物,2015年暴露于环境中的PM2.5导致420万人死亡和1.031亿人残疾。PM2.5吸入人体后,首先遇到由呼吸道上皮高度特化的分泌细胞和纤毛细胞形成的粘液纤毛屏障。在之前的相关研究中,人们已经确认PM2.5与呼吸系统不良有关,但PM2.5诱导的肺病理生物学机制仍知之甚少,专家猜测PM2.5可能涉及呼吸道上皮的细胞和分子变化。美国研究人员研究报告表明PM2.5刺激可以使呼吸道上皮细胞直接产生相应的转录反应。

这项发表在《美国呼吸细胞与分子生物学杂志(American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology)》上的研究提取了PM2.5污染样品中的有机和水溶性成分并找出其化学表征。对这些PM2.5提取物的致病物的筛选采用人鼻粘膜纤毛上皮细胞培养物的全转录组反应进行检测(转录组测序)。

研究者们将提取到的PM2.5中的污染物分为有机(OE)和水溶性成分(WE)以及未单独分离的NIST作为对照。检测发现PM2.5的非水溶性有机提取物(OE)引发了粘膜纤毛上皮细胞的有效剂量依赖性转录反应。当细胞暴露于中等剂量OE中改变了424个基因的表达,包括芳香烃受体信号激活和白细胞介素-1炎症程序。根据这种改变产生了由八个功能富集组定义的运行经验反应基因网络,它通过CYP1A1、IL1A和IL1B表现出高连通性,OE暴露还强有力地激活了粘液分泌表达程序(大于100个基因),其中包括粘液化生的转录驱动因子(SPDEF,FOXA3)。

当细胞暴露于较高OE剂量中改变了1240个基因的表达,并进一步加剧了中等剂量下观察到的表达反应,包括粘液分泌程序。较高的OE剂量显著增加了MUC5AC/MUC5B凝胶形成粘蛋白的表达比例,并强烈下调了纤毛细胞表达程序,包括关键的纤毛细胞转录因子(FOXJ1,MCIDAS)。慢性OE刺激诱导粘液化生样重塑,其特征为MUC5AC+分泌细胞和MUC5AC粘液分泌增加。

获得分子和细胞层面的结果后,为了从组织学上证实这些结果,研究人员采用Alcian Blue-Periodic Acid-Schiff (AB-PAS)染色法检测培养物以鉴定粘蛋白阳性细胞,发现慢性OE刺激培养物与模拟刺激培养物中的粘蛋白阳性细胞数量更高。通过Echo Revolve显微镜对荧光免疫组织化学染色检测发现,慢性OE刺激下,MUC5AC荧光标记明显增多,其阳性细胞增加,表明这种粘蛋白是慢性OE刺激下AB-PAS染色增加的主要来源。这些数据表明,慢性OE刺激分别诱导MUC5AC+和MUC5B+粘液分泌细胞同时扩增和减少,导致这些粘蛋白分泌的相应变化。慢性OE刺激诱导粘液化生样上皮重塑可能是与高PM2.5暴露相关不良呼吸疾病的基础。


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2021-01-11 14:09:27 254 0
文献分享 | Echo Revolve在骨骼肌挫伤修复研究中

近日在《Stem Cells and Development》期刊杂志上发表题为《Bone Marrow Stromal Cell-Derived Exosomes promote muscle healing following contusion through macrophage polarization》的文章。在这项研究中,使用梯度离心从BMSC的上清液中分离和纯化外泌体。纳米粒子跟踪分析,透射电子显微镜和蛋白质印迹被用来鉴定外泌体。使用ECHO正倒置一体荧光显微镜对HE染色,Masson染色和免疫荧光的肌肉样本进行成像。ZH得到的结论:BMSC-Exos通过改变巨噬细胞的极化状态YZ炎症反应,减轻了小鼠的肌肉挫伤损伤并促进了肌肉的愈合。


背景介绍:

骨骼肌挫伤是运动医学和临床最常见的损伤之一。由于挫伤后局部纤维化形成,受伤的肌肉很容易再次受伤,骨骼肌纤维化被证明与损伤初期的过度炎症反应有关,而与炎症浸润密切相关的巨噬细胞被发现在骨骼肌的愈合过程中起着至关重要的作用。如何调节巨噬细胞极化仍然是肌肉愈合的重要问题。

最近的研究表明,骨sui基质细胞源性外泌体(BMSC-Exos)可以影响炎症和组织恢复。因此,作者假设BMSC-Exos可以通过影响巨噬细胞极化来下调炎症反应,从而促进挫伤后骨骼肌的愈合。在这项研究中,作者从BMSC中分离了BMSC-Exos,在体内和体外测试了它们的功能,并研究了BMSC-Exos对巨噬细胞免疫调节和肌肉愈合影响的潜在机制。

实验方法:

通过粒度分析、透射电镜和Western Blot方法鉴定外泌体,为了检查靶蛋白的表达和位置,在TA(胫前肌)切片上进行了免疫荧光染色。使用的一抗是抗CD206,抗α-SMA,抗MyoD和抗Pax7,DAPI用于定位细胞核,通过荧光显微镜(ECHO Revolve,美国)观察图像。

结果:

总体外观,相对重量,形态特征:挫伤损伤后3d,挫伤组的TA肌肉比BMSC-Exos组的肌肉血肿更大(图3A)。两组之间在第三天,TA肌肉的相对肌肉重量也显著不同,挫伤组的TA肌肉较重(图3B)。

对于HE染色,在阴性对照组中,肌肉纤维规则且密集地排列。但是,在挫伤组中,随着时间的流逝,肌肉纤维变得越来越分散,许多增殖的胶原纤维占据了肌肉纤维的空间,这些现象在BMSC-Exos组中得到了改善。Masson染色中,在挫伤组中观察到大量胶原纤维,而BMSC-ExosZL在所有时间点均显著减少了纤维化区域(图3C-D)。


此外,为了进一步检查纤维化状况,作者对平滑肌肌动蛋白α(α-SMA)进行了免疫荧光染色。形态学结果表明,BMSC-ExosZL显著降低了挫伤在不同时间点引起的高蛋白表达和α-SMA的广泛分布(图4)。巨噬细胞耗竭后,BMSC-Exos的抗纤维化作用受到YZ,挫伤和BMSC-ExosZL组在第14天均观察到大的纤维化区域和广泛分布的α-SMA蛋白。


为了确定卫星细胞的不同成肌状态,进行了Pax7和MyoD的共定位。形态上,从受伤后3天开始,总的Pax7 + / MyoD +卫星细胞显著增加。显然,BMSC-ExosZL组的数量多于挫伤组和阴性对照组。在三个不同的组中,相对的Myod蛋白表达也呈现出类似的趋势(图5D)。综上所述,BMSC-Exos注射液可在早期促进肌肉再生。

结论:

研究表明局部使用BMSC-Exos可以减少挫伤后的纤维化组织,增强肌肉再生并改善骨骼肌的生物力学特性。BMSC-Exos通过促进M2巨噬细胞极化,YZ了受伤肌肉的炎性微环境。作者的研究为BMSC-Exos在临床实践中可用于肌肉愈合提供了有力的支持。


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2020-12-25 16:10:49 217 0
显微镜|Echo Revolve显微镜在血脑屏障功能研究中的

血脑屏障 (BBB) 是哺乳动物的一种特殊结构,通过调节血液和血液之间离子、氧气和营养物质的流入和流出,将大脑与血液分开,并维持zhongshu神经系统 (CNS) 的稳态。该屏障主要由脑微血管内皮细胞 (BMEC)、星形胶质细胞和周细胞组成。

转化生长因子β1 (TGFβ1) 是转化生长因子β (TGFβ) 家族成员之一,是一种多效性细胞因子,在多种病理和生理过程中发挥重要作用。

Hedgehog信号通路是重要的信号传导通路,在多个物种中是保守的,并且在生理和病理过程的许多方面发挥着重要作用。典型Hedgehog信号由三种分泌配体Shh、Ihh和Dhh激活,细胞间信号由转录因子Gli1、Gli2和Gli3转导。在zhongshu神经系统中,Hedgehog信号通路决定了神经管的形成和发育。

目前,已有研究表明Hedgehog信号与TGFβ1级联反应在癌症发展和转移中的相互作用。那么Hedgehog信号和TGFβ1级联反应之间的串扰是否会影响血脑屏障的功能呢,目前还尚不清晰。

华中农业大学兽医学院农业微生物学国家重点实验室和湖北省预防兽医学重点实验室联合在Brain Sciences杂志上发表了一篇名为《Astrocyte-Derived TGFβ1 Facilitates Blood–Brain Barrier Function via Non-Canonical Hedgehog Signaling in Brain Microvascular Endothelial Cells》,该文阐明了TGFβ1 介导的星形胶质细胞和大脑内皮细胞之间的细胞间交流,这一发现将拓宽关于血脑屏障内稳态的现有知识,也可能有助于进一步改善血脑屏障功能障碍的治疗策略。

作者通过构建人脑微血管内皮细胞 (hBMECs) 与U251的单培养和共培养模型,证实了星形胶质细胞衍生的TGFβ1增强了BMECs的屏障功能。实时荧光定量PCR、免疫印迹和酶联免疫吸附试验等多种实验表明TGFβ1在BMECs中触发Smad2/3的激活增加了Gli2的表达,Gli2是Hedgehog信号转导的关键转录因子。Gli2与ZO-1启动子结合,增强ZO-1的表达,从而维持血脑屏障。星形胶质细胞来源的TGFβ1触发BMECs中的TGFβ1-TGFBRII-Smad2/3-Gli1/2-ZO-1轴并维持正常的BBB功能。

文中作者通过免疫荧光技术,利用Echo Revolve正倒置一体显微镜进行免疫荧光观察。使用50ng/mL的重组TGFβ1 (rTGFβ1) 来刺激单层hBMECs,BMECs用绿色CD31标记,结果表明与对照组相比,ZO-1表达显著增加。

用4mg/kg的TGFβ/Smads信号抑制剂SD208处理小鼠,图中虚线环表示BMECs中的Gli1或Gli2的表达量,结果表明与对照组相比,ZO-1、 Gli1和Gli2表达量均减少。

内皮屏障功能方面发挥重要作用,提高了对血脑屏障功能的研究。这一发现也可能表明未来有可能使用TGFβ1和Hedgehog信号级联来辅助治疗血脑屏障功能障碍。


参考文献:

Fu J, Li L, Huo D, et al. Astrocyte-Derived TGFβ1 Facilitates Blood-Brain Barrier Function via Non-Canonical Hedgehog Signaling in Brain Microvascular Endothelial Cells. Brain Sci. 2021;11(1):77. Published 2021 Jan 8. doi:10.3390/brainsci11010077


2021-11-25 09:36:17 267 0
Echo Revolve显微镜在上皮性卵巢癌研究中的应用

导读

上皮性卵巢癌是所有妇科恶性肿瘤中死亡率高。转移是卵巢癌患者预后不良的主要原因。表观遗传和蛋白质翻译后修饰在肿瘤转移中起重要作用。作为 IIa 类组蛋白去乙酰化酶的成员,组蛋白去乙酰化酶 9 (HDAC9) 通过使组蛋白和非组蛋白去乙酰化参与许多生物过程。

吉林大学基础医学院病理生理学系病理生物学重点实验室的研究人员在Biomedicines上发表了题为《HDAC9 Contributes to Serous Ovarian Cancer Progression through Regulating Epithelial–Mesenchymal Transition》的文章。文中应用Echo Revolve Generation 2显微镜进行免疫荧光的成像。

研究亮点:

▶   对A2780 和 SKOV3 细胞中FOXO1的免疫荧光染色图像的观察发现, HDAC9的变化对FOXO1易位和核积累的影响,还展示了FOXO1在A2780和SKOV3中的亚细胞定位。

▶  对A2780 和 SKOV3 细胞中 β-连环蛋白的免疫荧光染色的观察发现,HDAC9的变化对β-连环蛋白易位和核积累的影响,还展示了β-连环蛋白在A2780和SKOV3中的亚细胞定位。

▶ 免疫荧光成像清晰准确,底噪干扰小,自动进行多通道结果合成,快速得到共定位的merge图像。

文中所有的免疫荧光结果均是使用Echo Revolve Generation 2显微镜进行的快速清晰的成像,揭示了HDAC9的调整对FOXO1蛋白和β-连环蛋白的亚细胞定位的影响,进而发现HDAC9可能通过上调 TGF-β 信号(HDAC9 可能通过增加 FOXO1 的核积累来促进 TGF-β 的表达)传导促进 SKOV3 细胞中的 EMT以及HDAC9 可通过抑制 β-连环蛋白信号传导抑制 A2780 细胞中的 EMT。

研究成果:

▲ 图1.HDAC9 调节FOXO1蛋白在 SKOV3 细胞中的亚细胞定位。(A)Western blotting测定A2780和SKOV3细胞中FOXO1的表达。( B , C ) 转染24 h后,通过Western blot检测A2780和SKOV3细胞中FOXO1的表达。( D , E ) A2780 和 SKOV3 细胞转染 24 h 后 FOXO1 免疫荧光染色。(bar = 30μm)。( F , G )转染24 h后,分离A2780和SKOV3细胞核,检测FOXO1的表达情况。( H )Western blotting检测HDAC3在A2780和SKOV3细胞中的表达。

在浆液性卵巢癌中,过表达的 HDAC9 可以增加 FOXO1 的核定位并促进 TGF-β 的表达。HDAC9 激活 EMT 并促进细胞迁移,这可能是由于 FOXO1/TGF-β 轴的激活。相反,在非浆液性卵巢癌中,过表达的 HDAC9 可能通过减少 β-catenin 的核积累和 β-catenin 在 Lys-49 处的乙酰化来抑制 EMT。

▲ 图2.HDAC9 可通过抑制 β-catenin 信号传导来抑制 A2780 细胞中的 EMT。用 HDAC9 过表达构建体、HDAC9-shRNA 质粒 (siHDAC9-1/2) 或空载体转染 A2780 和 SKOV3 细胞 24 小时。( A , B ) A2780 和 SKOV3 细胞中 β-连环蛋白的免疫荧光染色 (bar = 30 um)。( C )分离A2780和SKOV3细胞核,研究β-catenin的表达。( D )Western blot检测A2780和SKOV3细胞中β-catenin和ac-β-catenin(Lys-49)的表达。

期刊介绍:

Biomedicines是一份国际、科学、同行评审、开放获取的生物医学期刊,每月由 MDPI 在线出版。主要致力于人类健康和疾病研究的各个方面、新治疗靶点的发现和表征、治疗策略以及自然驱动的生物医学、药物和生物制药产品的研究。影响因子4.757,5年影响因子5.225。


2022-09-30 08:49:00 125 0
Echo Revolve显微镜在结核病的治疗途径与药物学研究

前言

结核病(TB)仍然是单一传染源的首要死亡原因。2017年,估计出现了超过55万例耐多药/利福平结核病(MDR/RR-TB)新病例,强调需要新的治疗策略。利奈唑胺(LZD)是一种治疗耐药革兰氏阳性感染的有效抗生素,也是结核病的有效治疗方法。然而,长期使用LZD可导致LZD相关的宿主毒性,常见的是gusui抑制。LZD毒性可能由IL-1介导,IL-1是结核分枝杆菌感染期间早期免疫的重要炎症途径。然而,IL-1可导致结核病进展后期的病理学和疾病严重性。

由于IL-1可能有助于LZD毒性,并确实影响结核病病理学,因此本实验将这一途径作为潜在的宿主导向治疗(HDT)的靶点。本实验假设LZD的疗效可以通过调节IL-1途径来增强,以减少gusui毒性和结核相关炎症。

本文使用两种结核病动物模型进行研究,一种是结核病易感小鼠模型和临床相关猕猴。在本研究中应用Echo Revolve正倒置一体荧光显微镜首先对小鼠肺组织的病变情况进行观察,以及肺组织病变面积的测量及可视化呈现;其次观察猕猴胸骨gusui组织切片,比较细胞数量和差异性变化。荧光显微镜观察鼠抗CD3e、鼠抗Ly-6G抗体在肺组织中的特异性表达情况。

通过苏木精-伊红(HE)染色对WT或Nos2-/-小鼠的单个肺叶进行组织病理学分析。αIL-1R1治疗降低了肺脏的平均细菌负荷(图1)。αIL-1R1治疗没有加重任何一种小鼠株的疾病。

▲ 图1 苏木精-伊红(HE)染色对WT或Nos2-/-小鼠单个肺叶的组织病理学分析结果

作者使用鼠抗CD3e、鼠抗Ly-6G抗体孵育,在Echo Revolve 4荧光显微镜DAPI FITC和RFP3个通道下分别观察继发性荧光和自发性荧光,将3个通道的图像叠加,可观察到图像中的紫色为抗体在肺组织中特异性表达,见图2。

由于对Mtb感染和LZD治疗产生的IL-1β在很大程度上取决于NLRP3炎症体,本文还研究了一种方案,其中在感染后56天和77天之间施用LZD和小分子NLRP3yizhi剂(MCC950)。如αIL-1R1所观察到的,与LZD单独相比,添加MCC950减少了肺中的PMN数量,并且没有显著改变细菌杀灭(图2)。

▲ 图2 不同治疗组的肺部组织免疫荧光图像

用DAPI染色的细胞核(蓝色)、用鼠抗CD3ε染色的T细胞(绿色)和用鼠抗Ly-6G染色的中性粒细胞(红色)

为了证实我们的观察结果,病理学家评估了猕猴gusui组织切片。结果发现不同治疗组,如TB组、LZD组和LZD+IL-1Rn组在细胞数量(髓系:红系比率)或异常方面没有明显差异(图3)。

▲图3 猕猴尸检时获得的胸骨gusui的代表性HE图像

图片中的左侧图像为20X拍摄结果,右侧图像为40X拍摄结果

研究亮点:

▶  本文使用Echo Revolve正倒置一体荧光显微镜眀场清晰观察到小鼠肺组织的病灶情况,还清晰观察到猕猴胸骨gusui细胞分布状况以及进行不同治疗组间细胞数量比较;眀场可一键快速切换到荧光成像,荧光观察对不同治疗组的肺部组织中的抗体特异性表达进行清晰观察。

▶  阐明了小鼠和猕猴之间gusui抑制的差异突出了在人类实验之前评估多个模型中HDT的重要性;在两种模型中,IL-1Rn给药对宿主的影响,以及对Mtb和LZD功效的反应,可以通过显微镜观察两种模型细胞中的病灶变化,细胞数量以及差异性变化来鉴定IL-1与LZD联合抑制是否对结核病治疗有效。本文研究数据为IL-1Rn作为结核病的潜在治疗提供了临床前数据。


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2022-09-14 16:13:00 141 0
深蓝云网络直播讲座预告 | 遇见ECHO REVOLVE——玩“转”显微镜

您是否有过长时间观察显微镜而眼睛酸涩?您是否有过为观察玻片和培养皿而在两台显微镜之间奔波?您是否有过为观察传统显微镜繁冗操作而愁苦?

不必说明场全视野观察,高清晰显示,极简化操作;也不必说荧光模块自动转换,多通道荧光叠加,图像辅助编辑;单是正倒置一体式观察,就备受科研工作者的青睐。

尊重传统,勇于创新,来自ECHO公司的显微镜REVOLVE采用IPAD替代传统目镜,释放您的双眼;明场/荧光双相机双光源,提高观察效果;APP软件控制,简化显微操作;给您带来不一样的观察体验!

大家知道显微观察中,正置显微镜更适合于玻片观察、油镜观察;倒置显微镜则更适合于培养皿/培养瓶观察、孔板观察,不仅如此,往往还需要明场与荧光观察。因此,一台显微镜满足以上所有需要,就显得弥足珍贵。

直播课



2020-04-13 17:12:41 205 0
Revolve显微镜助力对PDK1代谢重编程和线粒体质量控制

2020年初,吉林大学基础医学院病理生理学系和吉林大学中日联合医院放射肿瘤科联合在《Journal of Cancer 2020; 11(4): 962-973. doi: 10.7150/jca.34330》杂志上发表了文章。

文章研究方向

丙酮酸脱氢酶激酶1(PDK1)是联系糖酵解和三羧酸循环之间的一个关键因素。通过靶向PDK1YZ糖酵解恢复线粒体氧化磷酸化功能已成为肿瘤ZL的热点。然而,代谢变化影响线粒体功能的具体机制尚不清楚。Z近的研究发现,线粒体质量控制,如线粒体蛋白质稳态,在维持线粒体功能方面起着重要作用。本文以PDK1为研究对象,探讨了代谢变化影响线粒体氧化磷酸化功能的具体机制。

研究方法

为了研究PDK1YZ对肝癌的影响,我们首先检测了用PDK1YZ剂DCA处理24小时和48小时后HepG2和HepG3B细胞的活性。结果表明,DCA以剂量依赖的方式降低HepG2和HepG3B细胞的活力。为了进一步检测细胞增殖能力,我们检测了DCA处理后HepG2和HepG3B细胞的细胞周期。如图1C所示,DCA处理组HepG2和HepG3B细胞的细胞周期在24小时后停滞在G2/M期,用annexin/PI染色检测DCA处理24h后细胞凋亡,80mm DCA HepG2和HepG3B细胞组的凋亡率均高于各自对照组。结果表明,DCA可YZHepG2和HepG3B细胞的增殖,诱导细胞周期阻滞和凋亡。

用shPDK1表达载体或空载体转染HepG2细胞48h来显示shPDK1对线粒体质量控制的影响。结果如图A所示用染色和ECHO  Revolve荧光显微镜(400×)观察线粒体网络。量化线粒体微管化、中间化和碎片化的细胞比例(每个样本n=100个细胞)。

为了证实DCA通过体内YZPDK1的潜在作用,作者测试了其在人皮下HepG2异种移植植物中的治LX果。将荷瘤裸鼠随机分为对照组和DCA(100mg/kg)腹腔注射组。24天后,我们测量了HepG2异种移植瘤的体积和重量。与对照组相比,DCAZL的肿瘤明显更小,重量更小(图6A–C)。两组之间的总毒性或体重没有显著差异(图6D)。


结果表明,在不同浓度的DCA和短发夹PDK1作用下,HepG2和HepG3B细胞的葡萄糖代谢由厌氧糖酵解转变为线粒体三羧酸循环。经DCA处理或PDK1基因敲除后,线粒体形态逐渐浓缩,出现较短、较破碎的细丝。此外,线粒体自噬蛋白parkin和PTEN诱导激酶表达下调,生物合成蛋白过氧化物酶体增殖物激活受体γ-辅激活因子1α(PGC1α)及其调控复合物I、III、I V和V蛋白表达下调。这表明PDK1的YZ作用影响了线粒体质量控制水平。线粒体功能分析显示线粒体活性氧含量显著增加,膜电位降低。因此,PDK1YZ的葡萄糖代谢重编程可导致线粒体质量控制紊乱,加重线粒体应激损伤。



Revolve展现了其非凡的灵活性,可以轻松地实现正置和倒置显微镜转换,创新性地把正倒置显微镜合二为一,开启了显微镜Hybrid时代。

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☑  全视野观察---更清晰,更方便。

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2020-07-10 16:18:01 417 0
Echo Revolve显微镜在非小细胞肺癌靶向治疗获得性耐药机制研究中的应用

       在非小细胞肺癌(NSCLC)靶向治疗过程中,有可能会出现获得性耐药的问题。虽然目前已经发现了许多获得性耐药的驱动因素,但在治疗过程中导致肿瘤进化的潜在分子机制还不完全了解,治疗在多大程度上通过促进突变过程积极推动肿瘤的发展尚不明确。因此来自美国马萨诸塞州总医院的Hideko Isozaki和Ammal Abbasi等科学家发表了一篇名为《APOBEC3A drives acquired resistance to targeted therapies in non-small cell lung cancer》的文章,文中作者研究了在NSCLC靶向治疗期间,是否有特定的突变机制驱动肺癌的基因组进化。结果表明靶向治疗诱导胞苷脱氨酶APOBEC3A (A3A)突变可能促进非小细胞肺癌获得性耐药的发展。


       作者在研究中发现,临床常用的肺癌靶向治疗诱导A3A的表达,导致耐药癌细胞持续发生突变。诱导A3A可以促进了药物治疗细胞中双链DNA断裂(DSBs) 的形成,从而导致耐药细胞进化过程中的染色体不稳定性,如拷贝数改变和结构变异。通过基因缺失或RNAi介导来预治疗诱导的A3A突变可以延缓耐药的出现。因此,靶向治疗诱导A3A突变可能促进非小细胞肺癌获得性耐药的发展。A3A的表达或酶活性可能是一种潜在的治疗策略,以预防或延迟获得性耐药的肺癌靶向治疗。因此靶向治疗诱导A3A突变可能促进非小细胞肺癌获得性耐药的发展。 A3A的表达或酶活性可能是一种潜在的治疗策略,以预防或延迟获得性耐药的肺癌靶向治疗。

       在DNA双链损伤形成时,H2AX的Ser139 位点会被迅速磷酸化,从而形成γH2AX,γH2AX可以作为双链修复的标志物。文章中作者通过免疫荧光技术,利用ECHO Revolve正倒置一体荧光显微镜进行免疫荧光观察。在奥希替尼治疗2周后,我们观察到PC9细胞中组蛋白变体H2AX的Ser139磷酸化水平升高(图1),说明TKI诱导的A3A突变导致基因组不稳定,促进耐药克隆的进化。将γH2AX映射到TKI处理的PC9细胞的细胞周期分布上显示,γH2AX最显著地定位于一个恢复细胞分裂并处于G2期的细胞亚群(图2),因此,TKI治疗诱导增殖耐药细胞中A3A催化的基因组损伤。

▲图1:用1 μM奥希替尼处理PC9细胞0或14天,用γH2AX染色以量化DNA损伤。NT,没有处理;比例尺= 70μm。

▲图2:左图是用1 μM奥希替尼处理PC9细胞14天,用EdU/DAPI染色以分辨细胞周期,代表G1、S、G2细胞;比例尺= 10 μm。右图是EdU细胞周期试验的散点图,用γH2AX定量DNA损伤。NT:未处理。

       
      作者的研究结果表明,TKI治疗后APOBEC突变信号的获取可能指示了耐药克隆的进化路径,并提供了一种新的机制,通过该机制,靶向治疗可能在治疗期间无意中增加了癌细胞的适应性突变。因此,阻止A3A的表达或酶活性可能是一种潜在的治疗策略,以预防或延迟获得性耐药的肺癌靶向治疗。

参考文献:H Isozaki, Abbasi A , Nikpour N , et al. APOBEC3A drives acquired resistance to targeted therapies in non-small cell lung cancer. 2021.

DOI:10.1101/2021.01.20.426852

Revolve Gen 2正倒置一体电动荧光显微镜

        新一代Revolve正倒置一体电动荧光显微镜,拥有流行的触屏操控方式,配备智能荧光成像系统,将Z-Stacking全景深成像和DHR数字处理功能有机联合,提升分辨率告别照片模糊,为您打造全新的成像体验。


2022-01-26 15:46:53 199 0
ECHO显微镜助力探索控制皮肤损伤和应激后皮肤修复的细胞途径

导读

表皮屏障是通过角质形成细胞的干细胞的激活、增殖和分化而恢复的,但其在损伤和老化后通过不明确的机制阻碍了这一修复过程。作者在之前发现了老年小鼠表皮代谢功能障碍的基因特征,但表皮修复和年龄相关生长缺陷的精确调控机制尚未建立。所以作者使用衰老小鼠模型以及代谢调节因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ-辅激活物-1α(Pgc-1α)有条件表皮缺失的小鼠,探索控制损伤和应激后皮肤修复的细胞途径。

美国东北大学生物系与加拿大渥太华大学生物化学、微生物学和免疫学系联合研究的研究人员在Molecular Metabolism杂志上发表了题为《Pgc-1α controls epidermal stem cell fate and skin repair by sustaining NAD homeostasis during aging》的文章。文中的H&E染色结果和免疫荧光结果均应用Echo Revolve 显微镜进行显微成像。

研究亮点:

通过ECHO Revolve显微镜对染色的外植体和免疫荧光结果进行成像,得到分辨率高,细节清晰的图像,并结合其他结果的分析发现:

▶   衰老延缓小鼠伤口再上皮化,与Pgc-1α信号转导降低相关。

▶  表皮Pgc-1α的缺失减缓了愈合,并由于NAD稳态的破坏而减少了增殖。

▶ 低水平的表皮NAD会增强p53生长停滞,但在补充NAD后会逆转。

▶ 衰老会破坏表皮NAD稳态,但NAD前体可逆转表皮生长缺陷。

文中所有的H&E染色和免疫荧光结果均是使用Echo Revolve Generation 2显微镜进行的快速清晰的成像。揭示了衰老会损伤伤口愈合过程中的表皮再生长,并导致Pgc-1α的表达降低。表皮Pgc-1α有条件缺失的小鼠表现出更大的炎症和UVB诱导的细胞分化、减少的增殖和较慢的伤口愈合。epiPgc-1αKO小鼠还表现出角质形成细胞NAD水平降低、端粒缩短和多聚ADP核糖化增加,导致应激刺激的p53和p21信号增强。当NAD因Pgc-1α缺失或NAD合成的药理学抑制而减少时,应激诱导的增殖减少,分化增加,并通过表皮脱落增强保护DNA免受损伤。同样,老年小鼠表现出表皮NAD稳态紊乱和p53活化增强,导致损伤后p21生长停滞。NAD前体治疗可恢复老年皮肤到年轻皮肤的表皮生长状态。

研究成果:

▼图1证明了与年龄相关的伤口愈合和表皮生长障碍与Pgc-1α信号传导减少有关。

▲ 图1.衰老导致伤口愈合较慢,表皮干细胞生长受损,与Pgc-1α信号传导减少相关。(A)损伤后9天内的伤口闭合(右侧第9天图像)和(B)年轻(4月龄)和老年(24月龄)C57 / Bl6小鼠的角质形成细胞生长。使用结晶紫对(B)中的细胞生长进行染色以便于观察。(C)表皮层分层及其标志物的图解。(D)伤口损伤后5天,年轻和老年皮肤中角质蛋白-14阳性表皮舌的平均长度。(E)损伤后5天,年轻和老年小鼠愈合伤口基础表皮前缘右侧的EdU细胞。(F)年轻和老年小鼠伤口表皮的代表性图像。(G)年轻和老年小鼠表皮中Pgc-1α和Pgc-1β mRNA的qPCR数据。(H)与对照相比,急性UVB暴露后24和48小时,年轻小鼠的表皮Pgc-1α mRNA的表达量。

▼图2证明了表皮Pgc-1α的缺失可减少应激诱导的增殖,增强分化并导致伤口愈合缓慢。

▲ 图2.表皮Pgc-1α的遗传缺失在生理性皮肤损伤后减少细胞生长并增强分化。(A)角质形成细胞中cre-lox重组以删除Pgc-1α的示意图。(B)7–9 WT和epiPgc-1αKO小鼠的表皮Pgc-1β mRNA(Ppargc1a)。(C)角蛋白14(K14)、角蛋白10(K10)和loricrin(Lor)的代表性图像。(D)UVB诱导WT和epiPgc-1αKO小鼠中EdU表皮细胞和(E)K10层厚度相对于对照皮肤的折叠变化。(F)UVB暴露表皮中γH2AX和胸腺嘧啶二聚体的定量,右侧为5 WT和epiPgc-1αKO小鼠的代表性图像。(G)TPA诱导WT和epiPgc-1αKO小鼠EdU表皮细胞和(H)K10层增厚相对于对照皮肤的折叠变化。(I)7–8 WT和epiPgc-1αKO小鼠9天后的开放伤口面积。

▼图3表明Pgc-1α维持表皮NAD稳态,NAD挽救的药理学抑制促进UVB诱导的分化并防止DNA损伤。

▲ 图3.Pgc-1α缺失的角质形成细胞破坏了NAD代谢,对NAD合成的药物抑制足以减少增殖并增强UVB诱导的分化。(A)7–9 WT和epiPgc-1α KO小鼠表皮NAD代谢相关基因的mRNA相对表达。(B)4–5只WT和epiPgc-1α KO小鼠尾部表皮中NAD的相对水平。(C)72小时后,来自年轻皮肤外植体的体外角质形成细胞生长对Nampt抑制剂FK866的剂量反应。(D)C57 / Bl6小鼠中FK866应用与UVB应激相结合的示意图。(E) 对照手术或UVB暴露48小时后,用局部FK866(100 nM)或载体(Veh;乙醇)处理的每组5–6只小鼠的表皮NAD水平。(F)角蛋白10层级增厚。(G)表皮增殖(EdU)的变化,以及(H)γH2AX阳性表皮细胞的丰度。代表性免疫荧光图像(F–H)显示在量化右侧。

▼图4证明了增加Pgc-1a缺失小鼠的NAD水平挽救异常应激诱导的分化并恢复伤口愈合。

▲ 图4.用NAD前体治疗表皮Pgc-1αKO小鼠可加速皮肤愈合并抑制UVB诱导的分化。(A–B)使用4 WT和epiPgc-1αKO皮肤样品(NAD前体烟酰胺单核苷酸(NMN)、烟酰胺(NAM)或烟酰胺核苷(NR)处理或未处理),角质形成细胞生长为外植体面积的一部分或载体条件的数倍。(C)(A–B)生长出的代表性图像用结晶紫染色,以便于可视化。(D–F)每天注射赋形剂或500 mg/kg NR的4-7 WT和epiPgc-1αKO小鼠的肝脏NAD、尾表皮NAD水平和伤口完全闭合的时间。损伤后第0天(D0)、第11天(D11)和第13天(D13)的代表性图像。(G) UVB暴露和NR剂量示意图。(H–K)用载体或烟酰胺核苷(NR)处理的4只WT和Pgc-1αKO小鼠的UVB暴露表皮中的角蛋白10增厚、γH2AX细胞和胸腺嘧啶二聚体细胞。代表性免疫荧光图像及量化结果。

▼图5证实了Pgc-1α的缺失诱导端粒缩短,增强Parp活性并增强应激诱导的p53信号传导。

▲ 图5.表皮Pgc-1α缺失后的端粒功能障碍以NAD依赖的方式使干细胞对应激诱导的p53活化和核增大敏感。(A)定量6–7 WT和epiPgc-1αKO小鼠表皮裂解物中多聚和单ADP核糖(MAR/PAR)的免疫印迹。(B)4–6 WT和epiPgc-1αKO小鼠的亮染MAR/PAR表皮细胞数量(MAR/PAR+高)。(C)表皮裂解液中泛乙酰赖氨酸的免疫印迹定量。(D)平均表皮端粒长度。(E)5–6 WT和epiPgc-1αKO小鼠的载体和TPA处理皮肤中的核HMGB1细胞和(F)基底层核大小。(G)用载体或烟酰胺核苷(NR,500 mg/kg)处理的WT和epiPgc-1αKO小鼠58小时后,UVB暴露表皮的核HMGB1或(H)p21表皮细胞以及(I)基底层核大小。(J)用局部载体或FK866处理的6只C57Bl/6小鼠中,对照手术和UVB暴露表皮的核HMGB1或(K)p21表皮细胞以及(L)基底层核大小。代表性免疫印迹(A、C)或免疫荧光图像(B、E、G、H、K)显示在量化右侧。

▼图6老年表皮表现出NAD稳态紊乱和p21生长停滞增加。

▲ 图6.衰老破坏表皮NAD稳态并增强p53-p21信号轴。(A)年轻小鼠与老年小鼠表皮NAD的相对水平和NAD代谢相关基因的(B)mRNA表达。年轻和老年表皮中(C)MAR/PAR酰化的免疫印迹。(D)赖氨酸乙酰化和(E)乙酰基p53(K382)的免疫印迹,右侧为定量。(F)年轻(4月龄)和老年(24月龄)小鼠损伤后5天,前缘内的表皮p21细胞。右侧的代表性图像,虚线显示了从箭头开始的前缘的前1000μm。(G)用所示NAD前体处理72小时的年轻和老年小鼠的皮肤角质形成细胞外植体生长。


通过ECHO Revolve正倒置一体显微镜的优质成像,得到了所需的高清图片,不仅用于观察分析,还可使用tiff黑白原图进行定量分析,最终得到整个结论。该项研究确定了表皮Pgc-1α通过调节细胞NAD+和对p53驱动的生长停滞的下游影响,在控制表皮修复中的新作用。另外还发现,衰老表皮中存在明显的平行机制,表明NAD信号传导是生理性皮肤修复的重要控制因素,并且该途径的功能障碍导致了与年龄相关的伤口修复缺陷。


期刊介绍:

《Molecular Metabolism》致力于作为一个报告能量稳态以及代谢紊乱(如肥胖、糖尿病、心血管疾病和癌症)的病因、发展、治疗和相关健康后果方面的突破性发现的平台。该杂志发表了以最高标准生成的假说驱动的研究,为对能量稳态相关行为、生理学和功能障碍等机制的理解铺平了道路。最新影响因子8.568。


Revolve Gen 2正倒置一体电动荧光显微镜



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2022-12-13 14:46:34 138 0
【深蓝云直播课】Echo显微镜使用技巧—Rebel

显微镜是由一个透镜或几个透镜的组合构成的一种光学仪器,是人类进入原子时代的标志。显微镜是人类最伟大的发明物之一,那么该如何使用显微镜呢?长期使用显微镜的小伙伴们,长期观察目镜筒是否会感到眼睛酸涩?想要分享视野中的发现时是否会困扰如何去跟别人描述新发现的位置?想要记录视野图像时是否需要反复的找合适角度拍照?


想要知道上面问题的解决办法吗?那就赶紧快来参加8月25日的深蓝云直播课堂吧!您想知道的答案都在本次课程里,come on!


直播课



2020-08-24 15:00:55 385 0
文献速递 | 肿瘤药物反应检测平台以ECHO荧光显微镜为成像

2020年,我国新发癌症达457万,而因癌症死亡的人数超过300万,因此更有效、更合理的癌症ZL方案开发逐渐被人重视。在之前的癌症ZL中,对可用药物的反应检测,如肿瘤缩小,通常需要几周到几个月的时间,无法代表肿瘤的动态敏感性。新近开发的植入式微型装置(IMD),用于将微量化疗剂局部输送到活肿瘤的狭窄区域;随后可以取出组织并进行分析,以评估药物反应。这种方法有可能快速筛选多种药物,但需要手术切除组织,并且仅在切除组织时的单个时间点评估药物反应。本文研究者开发了一个新的检测平台——“肿瘤实验室”植入式微型设备(LIT-IMD)平台,可直接用于对活肿瘤内的细胞死亡药物反应进行成像,无需切除或处理。

LIT-IMD是将微型成像探针、植入式微型设备、活细胞检测技术结合在一起,将其插入活肿瘤中,IMD将多个药物微剂量输送到空间离散的位置,同时,它局部释放微量的荧光细胞死亡检测剂(碘化丙锭PI,PI结合双链DNA,但只能进入已经破坏细胞膜的细胞;因此,它在失去膜完整性的晚期凋亡和坏死细胞中积累),扩散到暴露于药物的组织中,并在细胞死亡部位积累。集成的小型化荧光成像探针对每个区域成像,以评估药物诱导的细胞死亡。

研发者使用LIT-IMD对鼠肿瘤模型8小时多种药物的反应进行评估,目前评估细胞死亡的金标准方法是荧光成像和荧光组织化学(IHC)分析,研究者将肿瘤成像与金标准荧光显微镜和组织病理学进行对比,使用Echo Revolve荧光显微镜进行标准成像,LIT-IMD成像结果明显与Echo Revolve荧光显微镜图片存在相关性。

(b)将来自活肿瘤组织中的M-2CFM成像的荧光信号与相应的Echo Revolve荧光显微镜(第二列)和免疫组织化学(IHC)(第三列)进行比较,在组织切片和处理后成像。在荧光和IHC图像上,方框表示与活体肿瘤中由M-2CFM探针成像的组织区域相对应的大约400 × 300 µm的感兴趣区域。在IHC图像上,“X”表示药物释放的位置;“V”表示活的肿瘤组织。经过训练的图像分类器能够从染色的IHC图像中定量确定非存活指数(非存活除以存活肿瘤),然后将其与实验荧光图像相关联。


该平台是DY个完全集成的平台,可用于原位评估多种化疗反应。Echo Revolve荧光显微镜在该成像平台研制过程中通过良好的成像效果和参数帮助研发者确定平台拍摄效果和仪器性能,帮助其优化和完善平台。

Revolve正倒置一体显微镜

Revolve显微镜展现了其非凡的灵活性,可以轻松地实现正置和倒置显微镜转换,创新性地把正倒置显微镜合二为一,开启了显微镜Hybrid时代。



☑   视网膜屏显示技术:比拟目镜人眼观察效果。

☑   全视野观察: 更清晰,更方便。

☑   多通道荧光:多达4个EPI荧光通道,无须暗室,就可以轻松快速地完成多色荧光显微分析。

☑   自动化操作:通过iPad Pro点触操控相机及荧光通道之间的切换,实现了完全自动化操作。

☑   App应用软件:基于IOS的Echo App是与Apple团队合作研发的专业显微镜软件。

☑   精湛的工艺尽显高端品质:实现非凡的性能。


2021-04-06 09:55:06 447 0
热烈祝贺ECHO Revolve正倒置一体电动荧光显微镜获得2021缪斯(MUSE)国际设计奖铂金奖

2021缪斯(MUSE)国际设计奖近日揭晓,美国ECHO Revolve正倒置一体电动荧光显微镜凭借出色的设计荣获2021缪斯(MUSE)国际设计奖铂金奖。

ECHO Revolve正倒置一体电动荧光显微镜是一款多功能显微镜,将四台显微镜合二为一,可轻松在正置和倒置之间进行转换。使用户不再因为所拍摄样品的不同而分别购置正置和倒置两类显微设备,一机满足多种样品成像,具备眀场、暗场、相衬、荧光和偏光等功能,是真正的多面手。同时显著降低了设备成本,节省实验空间。

传统显微镜操作繁琐,很难上手。ECHO Revolve正倒置一体电动荧光显微镜打破传统,采用12.9英寸Retina显微屏,触控操作,智能控制,成像更便捷,给您带来前所未有的使用体验。使枯燥的实验变得简单有趣,轻松获得您想要的图片。

美国缪斯设计奖创办于美国纽约,是一项针对来自各设计领域创意专业人士及公司的国际设计竞赛,该奖项由美国国际设计奖项协会(IAA)主办。据官方统计:缪斯设计奖共收到来自100多个国家/地区的近3.8w个参赛作品,是极具国际影响力的奖项。ECHO Revolve正倒置一体电动荧光显微镜获得此奖,说明ECHO Revolve正倒置一体电动荧光显微镜在设计理念,仪器功能上得到大家的认可和肯定,ECHO Revolve正倒置一体电动荧光显微镜必将在自己的领域发挥作用,大放异彩。


2021-10-14 10:02:53 200 0
老年犬猫的麻醉(下)∣文献分享

上篇文章分享了老年犬猫的生理变化,今天我们一起来看老年犬猫的麻醉方法。


1.麻醉前评估

       麻醉前评估是整个麻醉方案的重要组成部分。完整的患者病史调查和体格检查、临床病理评估等对制定麻醉方案很关键。


       考虑到有些药物会与麻醉剂相互作用,老年动物若正在使用ZL关节炎,心脏病,内分泌失调或其他异常的相关药物。建议麻醉前参考最 新的CF或进行全面调查。参考示例:

  • 对于接受ACEYZ剂,钙通道阻滞剂或匹 莫 苯 类药物ZL心脏病的动物,应避免使用乙 酰 丙 嗪 作为术前用药。醋 丙 嗪会增强血管舒张作用,引起严重的低血压。

  • 接受地 高 辛的患者在麻醉下更有可能患心律不齐,需要避免使用任何促进心律不齐的药物,例如赛 拉 嗪,阿 托 品,氟 烷。

  • 对于正在接受用于关节炎的长期非甾体类KY药(NSAIDs)的患者,在手术后不应接受完整的NSAIDs术后剂量。NSAIDs绝不能与类固醇同时使用。

2. 液体疗法

       老年患宠应跟年轻动物一样禁食,但在用药前(麻醉前15-20分钟)才能禁水,因为很多老年动物都有一定程度的多饮多尿,这样有助于防止 脱水。犬猫的血浆尿素升高之前,肾功能已丧失了75%。麻醉期间,请选择适合患宠情况的液体输注-通常是乳酸林格氏液,但如果动物患有心脏病,应使用低钠液体。动物如果没有临床脱水,麻醉和恢复过程中,以5-10 ml / kg /h的速度进行液体输注即可。麻醉后应继续进行液体支持,直到动物进食和饮水充足为止。

3.预吸氧

       老年患宠在麻醉前3-5min内,可通过面罩给氧或“流动”吸氧(将氧气源保持在鼻子/嘴附近)。如果动物可耐受面罩吸氧,优先选择面罩方式。

注意:给动物预充氧前,用氧气冲洗面罩或呼吸系统,以清除麻醉剂。

4.麻醉方法

(1)术前用药和镇静

      术前用药是为了减轻患宠的压力、减少麻醉诱导剂及维持麻醉剂的剂量、超前镇痛及提高苏醒质量。对于老年患宠,应使用低剂量的轻度镇静药物,而不是引起深度的镇静作用。低剂量的乙 酰 丙 嗪(0.01-0.02 mg / kg IM)适合许多没有明显心血管疾病的患宠。苯 二 氮 䓬 类药物(咪 达 唑 仑0.2 mg / kg IM/IV,或地 西 泮 0.2 mg / kg IV)在年轻的动物中镇静效果较差,通常对老年患者具有轻度至良好的镇静作用,且对心血管和呼吸系统的副作用极小。由于存在医源性肝衰竭的风险,猫应避免口服地 西 泮。将醋 丙 嗪 或苯 二 氮 䓬类与阿 片类药物联合使用可增加镇静作用,提供超前镇痛。超前镇痛可以减少交感神经刺激,心率,心肌需氧量和心律不齐的风险,对患宠十分有益。


吗 啡,哌 替 啶,丁 丙 诺 啡和布 托 啡 诺 是犬猫中最常用的阿 片类药物,效果对比见下表。

  • 吗 啡是最 有效的镇痛药,也是一种很好的镇静剂,推荐用于大手术动物。

  • 丁 丙 诺 啡的作用时间最长,也是一种良好的镇静剂,适用于中度缓解疼痛,尤其是在猫中。

  • 布 托 啡 诺是短效药,镇痛作用差,但它是一种出色的ZK药和镇静剂。

  • 哌 替 啶虽然短暂但镇痛作用却很好,与其他药物合用时,镇静作用中等。

        常规术前用药应避免使用阿 托 品和其他抗胆碱能药物,因为大多数老年患者已经具有较高的静息心率。α2-激动剂(例如,赛 拉 嗪和美 托 咪 定)产生一系列心血管效应,包括心动过缓,心律不齐,高血压和低血压以及血管收缩,这些心血管变化对于心血管和/或肾脏储备不良的老年患者而言不易耐受。除非使用非常低的剂量(例如2μg/ kg美 托 咪 定),否则避免使用。

(2)诱导麻醉

       硫 喷 妥 钠和丙 泊 酚可用于诱导麻醉。在老年患者中,丙 泊 酚(1-3 mg / kg IV,已进行术前用药)相对于硫 喷 妥 钠可以缓慢地给予而不会引起患宠兴奋或心律失常,且动物恢复较快。但丙 泊 酚引起的呼吸、心血管YZ与硫喷妥钠一样(因此预吸氧是有益的)。丙 泊 酚最多两分钟完全发挥作用,不要过增量给药。此外,丙 泊 酚可能在某些患者中引起抽搐20-30min,会让外科手术变得困难。

其他诱导方法:

  • 地 西 泮(或咪 达 唑 仑)(0.25 mg / kg IV)和氯 胺 酮(5 mg / kg IV):适合于许多老年动物的诱导麻醉,既往存在心动过速,肥厚型心肌病,头部外伤或进行眼内手术的患宠除外。在注射器中混合等量的两种药物,1ml/10kg IV, 缓慢增加剂量,直到可以插管为止,该组合最 多2分钟完全发挥作用。

  • 咪 达 唑 仑(0.2 mg / kg IV)和芬 太 尼(5-10μg/ kg IV):可用于重症患宠的麻醉诱导,但这种组合通常需要在麻醉诱导后立即进行间歇性正压通气。

        气体麻醉下的面罩诱导对老年患宠有压力,并会加剧环境污染,最 好避免。在老年动物中,应避免赛 拉 嗪(或美 托 咪 定)和氯 胺 酮的肌肉内组合,因为α2-激动剂药物对心血管的严重影响以及诱导时间的延长会导致低氧血症。当在无法进行药物前ZL的情况下,丙 泊 酚和地 西 泮(或咪 达 唑 仑)可以用作联合诱导剂,在患病或年老的患宠中诱导麻醉。具体诱导过程为:

  • 预吸氧3-5min。

  • 缓慢注射丙 泊 酚(1 mg / kg IV)。

  • 等待1分钟。

  • 给予地西 泮 /咪 达 唑 仑(0.2 mg / kg IV)。

  • 等待1分钟。

  • 缓慢注射更多的丙 泊 酚,直至可以插管。

(3)维持麻醉

  • 使用异 氟 烷维持麻醉。异 氟 烷会引起血管舒张,对于体积与心输出量和灌注压力有关的患者,必须提供足够的液体疗法。

  • 七 氟 烷在心脏和呼吸方面的作用与异 氟 烷非常相似,不同之处在于诱导和恢复速更快。

无论选择哪种方法来维持麻醉,补氧都必不可少。

(4)镇痛

  • 疼痛对老年患宠尤其有害,它会增加心率和血压,从而增加心肌需氧量及心律不齐的发生率。阿 片类药物吗 啡ZL这类的心律不齐非常有效,它可减慢心率,从而改善冠状动脉血流量。此外,吗 啡对心肌收缩力的影响极小。高剂量(> 0.4 mg / kg)可能会导致心动过缓,可通过合理使用抗胆碱药物预防。

  • 非甾体KY药是有效的镇痛药,如果没有使用禁忌症,如肾功能或肝功能不良、胃肠疾病或同时使用类固醇,可用于老年犬猫。它对肾脏和/或胃肠道都有潜在的毒性,而且大多数要经历肝脏的代谢。美洛 昔 康和卡 洛 芬对肾脏和胃肠道的副作用更小,用于老年患宠更安全。

  • 多模式镇痛,通过联合使用不同作用模式的药物,作用于不同受体和“疼痛通路”的不同部位来缓解疼痛。例如,阿 片类药物,NSAIDS,局麻药和氯 胺 酮均具有不同的作用方式,可同时用于给剧烈疼痛的患宠提供镇痛作用。

(5)围手术期液体疗法

       所有的老年患宠都应在麻醉期间接受静脉输液ZL,直到能充分进食和饮水(通常是术后几个小时)。一般来说,乳 酸 林 格液是最常用的液体,可按5- 10ml /kg/hr给药,以维持正常血压和足够的排尿量;心脏病患者的液体给药速率应该降低。

(6)维持体温和恢复

      老年患宠发生低体温的风险更大。体温过低会导致心血管和呼吸YZ,并延迟药物的代谢、麻醉后的恢复和伤口愈合。患宠颤抖会增加恢复期的需氧量,如果需氧量不能满足,通常会出现心律不齐。麻醉时间应尽量缩短,同时保持温暖。所有康复的老年患宠均应补充氧气并接受密切监测,直至其保护性咽反射恢复。

5.麻醉预后

     麻醉后,老年患宠出现以下症状的风险更高:

  • 低氧血症和高碳酸血症。

  • 脱水,低血容量,低血压和组织灌注不良。

  • 心律失常。

  • 体温过低。

  • 药物作用延长,麻醉后恢复延迟。

  • 药物不良反应。

  • 压力。

以下建议可减少老年患者并发症的发生率,改善全身麻醉的预后:

  • 进行足够的麻醉前检查和测试,发现潜在疾病。

  • 麻醉前稳定患者体况。

  • 尽量缩短麻醉时间。

  • 减少所有药物的剂量。

  • 使用以下药物:

-导致轻微的心脏YZ,例如苯 二 氮 䓬类药物。

-可被拮抗,例如苯 二 氮 䓬类药物和阿 片类药物。

-作用时间短,例如丙 泊 酚。

  • 避免在老年动物中使用过量的镇静剂。

  • 尽量避免使用α2激动剂,它们对老年患者的心血管影响不太有利。如果不得不用,剂量应尽量低。与阿 片类药物合并使用,可实现快速逆转。

  • 提供足够的静脉输液以维持正常的水合、血压和肾功能。

  • 术前,术中和术后均须补充氧气,因为老年患者发生低氧血症的风险增加。

  • 密切监视患者,保持以下各项生理指标在正常范围内:

-保持平均血压高于70 mmHg或收缩压大于90-100 mmHg。

-血红蛋白饱和度至少应为95%。

-呼气末二氧化碳的正常值为(40±5 mmHg)。

-在高危患者中,监测尿量并保持在1-2 ml / kg / hr。

  • 通过手动通气或机械通风来支持呼吸。

  • 使用足够的镇痛剂,尤其是阿 片类药物。

  • 不要在未检查肾和肝功能的情况下使用NSAIDs,也不要将它们与类固醇同时使用。考虑使用其他止痛技术,例如局部麻醉剂。

  • 维持患宠体温。


6.总结

       年龄本身并不是麻醉的禁忌症,与年龄有关的疾病使麻醉更具挑战性。彻底的术前评估,谨慎选择麻醉和镇痛方案,持续仔细监测和细心护理,将提高老年患者手术成功的可能性。

*文献来源



2021-03-24 11:04:26 380 0
如何选择一台适合自己的显微镜——总有一款ECHO显微镜适合你

导读

经过前面的几期学习,相信大家对显微镜的基础知识已经有了足够的了解,自信心提的满满的吆!接下来就可以根据实际需求来选择对应的显微镜了。

让我们一起走进ECHO显微镜的世界,挑选一台属于你的显微镜吧。

荧光电动显微镜—Revolve

ECHO显微镜颠覆了大家对显微镜的认知,是对传统显微镜设计的重新思考,是真正意义上的设计一体化和操控显示一体化,易学易用,使枯燥的实验变得简单有趣。

高分辨率3D成像,获得最佳成像效果

Revolve显微镜采用实时反卷积(DHR),增加宽场荧光显微镜图像锐度,抑制噪声减少模糊,提高荧光检测分辨率。自动Z轴配合实时反卷积(DHR)功能,在保持高分辨率的同时,对较厚样本进行全景深扫描合成,实现3D高分辨成像。

正倒置一体,一机两用

Revolve显微镜既可以正置观察,也可以倒置观察,在正置和倒置之间自由转换。使用户不再因为样品的不同而分别购置正置和倒置两类显微镜,一机实现切片、培养皿、培养瓶和多孔板等多种样本类型的观察需求。在降低设备成本的同时,也节约了空间。试问:我还需要纠结选择买正置还是倒置吗,当然是都要喽。

智能化操作,高效便捷

Revolve显微镜采用自动荧光的方式,可以快速捕捉荧光信号,避免荧光淬灭。自动双相机系统保证了明场和荧光条件下都可以获得好的观察效果。智能化的软件使操作变得更加简单。

明场显微镜—Rebel

随着Revolve的问世,ECHO显微镜的设计理念深受用户的喜欢,但是对于没有荧光需求的用户,一款正倒置兼备的Rebel足矣。

自动细胞计数软件,无需特殊耗材

Rebel为满足更多的用户需求,特别开发了自动细胞计数软件。区别于市场上的细胞自动计数仪,Rebel兼具显微镜与计数功能于一身。不再需要特殊的观察耗材,可使用玻片、培养皿、培养瓶等耗材进行细胞自动计数。

高效便捷的网络共享方式

Rebel还具有非常高效便捷的网络共享方式,通过WIFI、Internet等多种通讯方式,可以实现实时实验教学、病例分享和多人会诊。

全电动显微镜—Revolution

针对更高级别用户需求,ECHO又推出了Revolve进阶版Revolution,正倒置一体化设计,带来更多应用场景;双相机系统保证了确保效果最优;实时反卷积功能配合高速Z-Stacking功能,提高荧光检测的分辨率。独特的触屏控制XY自动载物台功能,便于观察样品的定位;对于大样品扫描成像,电动载物台和Hyperscan功能结合,使扫描速度提升了一倍。对于活细胞的观察,活细胞工作站和多功能智能化联动,保证了活细胞长时间的观察。

最后,我们一起来看一下ECHO显微镜下的微观世界吧。


看到这样一台成像质量好,操作简单,适用范围广的显微镜,有没有心动呀,想不想体验一下操作极简,体验极佳的显微镜呀,想不想让我们珍贵的实验样本也有一个如此美轮美奂的瞬间,那就赶紧联系我们,申请试用吧,三款产品,总有一个适合你的吆!


2022-03-22 14:23:08 356 0
还敢熬夜吗!Echo显微镜揭秘生物钟变化带来的影响

导读

大家或许听到过这样一首歌:零点睡六点起,ICU里喝小米;一点睡六点起;阎王夸我好身体;两点睡觉六点起,骨灰盒子长方体;三点睡觉六点起,墓碑和我绑一起。熬夜如今已成为现代年轻人不可或缺的一种常态,明知熬夜伤身体,但管不住自己啊!

生物钟是一种进化保守的转录-翻译调控网络,与身体代谢调节密切相关。从多数积累的实验模型和流行病学研究中的证据表明,生物钟调节机制的中断会导致肥胖和胰岛素含量偏高。

匹兹堡大学某研究团队在期刊Molecular And Cellular Endocrinology发表了一篇名为《Chronic circadian shift leads to adipose tissue inflammation and fibrosis》的文章,该团队之前的研究发现,重要的时钟转录激活因子Bmal1是脂肪形成的关键调控因子,在此基础上,该研究团队使用环境光照诱导时钟节律的中断,再用Echo显微镜去观察小鼠长达6个月的慢性时钟失调导致的相关细胞形态变化以及局部组织炎症和纤维化情况,结合转录组学分析,该研究初步确定了慢性时钟节律失调会引起显著的脂肪组织功能障碍,这可能也是昼夜节律失调导致了胰岛素抗性高的基础。

文章相关结果:

在本研究中,我们测试了环境光照移位诱导的时钟干扰是否会影响脂肪组织生长。我们设计了一个轮班计划,如图1A所示。这种轮班方案旨在引起类似于环境昼夜失调的zhongshu和外周昼夜时钟不同步,我们之前证明了类似的5周方案导致β细胞时钟失调。两组分别在正常周期的第二天上午8点(ZT3)和下午5点(ZT12)采集样本,如图所示(图1A)。这些时间点近似对应于ZT3和ZT12时附睾白色脂肪组织(eWAT)和腹股沟皮下白色脂肪组织(iWAT)中Bmal1的蛋白水平峰值。经过6个月治疗后,对照组和轮班组小鼠的体重都增加了50%以上,而且两组之间的体重没有差异(图1B)。令人惊讶的是,对内脏脂肪库的组织学分析显示,轮班组小鼠的脂肪细胞明显增大(图1C)。对eWAT脂肪细胞大小分布的定量分析显示,其大小明显向较大的脂肪细胞转移(图1D)。在iWAT中(图1E),同样可以观察到脂肪细胞肥大,其大小分布明显向较大的脂肪细胞倾斜(图1F)。此外,我们发现典型的冠状结构由凋亡脂肪细胞周围的巨噬细胞组成,在时间移位组的小鼠中都很丰富,而在对照组中很少出现。

▲图1

组织学分析显示,在轮班队列的小鼠脂肪库中存在大量的冠状结构,表明存在巨噬细胞浸润的现象,这是脂肪组织炎症的特征。与这一观察结果相一致的是,RNA-seq分析也发现参与炎症反应的基因表达显著增强。在内脏脂肪中,相关代谢通路在ZT3时表现出正常的低表达,在ZT12时表达升高,表现出日表达谱(图5A)。慢性转移导致该通路在ZT3上的表达显著升高,这与ZT12非常相似,但失去了日表达模式。该通路在轮班组中也被诱导表达(图5B)。对光照时间移位处理的小鼠进行详细的组织学检查,显示其巨噬细胞积累具有丰富的冠状结构特征,而在对照组中检测到最小的冠状结构(图5C)。利用巨噬细胞特异性表面标记物F4/80抗体进行免疫荧光染色,并用Echo显微镜鉴定了凋亡脂肪细胞周围的形成冠状结构的巨噬细胞。

▲图5

现代生活方式中睡眠及活动周期与内源性时钟周期的频繁失调会导致昼夜节律不同步,这就可能导致代谢性疾病的发生,总而言之,昼夜作息节律失调容易导致肥胖和糖尿病。

在文献中我们可以清晰看到脂肪组织炎症情况,同时可以很清楚地观察到巨噬细胞的蛋白表达,那么不得不夸一夸咱们用的显微镜,很显然Echo显微镜在此发挥的作用功不可没。Echo Revolve Gen2正倒置一体电动荧光显微镜独特的正倒置一体设计,既可观看切片,又可观察培养瓶中的活细胞,同时配置了高能LED光立方荧光系统,极大程度降低荧光淬灭的速度,双相机设置既兼顾灵敏度又兼顾色彩还原,DHR功能抑制噪声减少模糊,Z-Stacking可轻松逐层拍摄提高景深,配置iPad系统,实现极简操控,易学易用,心动的话赶紧行动起来!


Revolve Gen 2正倒置一体电动荧光显微镜

新一代Revolve Gen 2正倒置一体电动荧光显微镜,拥有流行的触屏操控方式,配备智能荧光成像系统,将Z-Stacking全景深成像和DHR数字处理功能有机联合,提升分辨率告别照片模糊,为您打造全新的成像体验。


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