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     相信很多开发HPLC方法的实验研发人员都开发出了无法分离混合物重要成分的方法，其方法可以是调整流动相、固定相或柱温,另一种有效的方法是改变色谱柱粒径。粒径较小的液相色谱柱产生较高的塔板数以获得更尖锐的峰，并且能够分离紧密洗脱的峰。一些高分子量化合物在小孔径填料上可能无法分离，但在用大孔径填料填充的色谱柱上很容易分离。

       通常解决紧密或共洗脱峰的有效的方法是改变流动相组成或柱填料颗粒的键合相功能 。众所周知的分辨率方程清楚地确定了影响峰分辨率的三个主要因素：其中Rs是两个靠近洗脱峰的分辨率（间距）；k是代表保留的容量因子；α 是靠近洗脱峰的容量因子的比率；N为代表柱效的柱塔板数。反相 HPLC 是一种非常强大的方法，通常可以毫不费力地实现分离，有时甚至只需要初始操作条件。然而，重叠和叠加的峰通常会产生，因此需要改变操作条件。有几种方法可以提高重叠峰的分辨率或带间距，或者解耦叠加的峰。

一、相对保留的调整：

      有时可以通过调整容量因子k（保留）值来对分离不严重重叠的峰进行微小改进降低流动相的强度。

二、通过提高柱效提高分离度：

      适度重叠的峰通常可以通过提高柱效来解决，通过增加柱塔板数来锐化峰（减少峰体积）。一种有效的方法是使用颗粒较小的色谱柱，因为这会增加塔板数并提高柱效。

三、通过改变流动相有机改性剂增加谱带间距：

      在反相 HPLC 中改善谱带间距的有效方法是改变流动相成分以增加 α 值。如果在初始分离中观察到严重重叠或叠加的峰，则此方法更适合。改变有机改性剂是产生峰间距变化的有效途径。例如，如果初始分离使用乙腈作为有机改性剂并显示出此问题，建议的方法是更换改性剂：先换成甲醇或再换成四氢呋喃。

      根据实际情况，有时可以通过增加柱塔板数、使用更小的颗粒或增加柱长来改善分离。但这些方法的缺点是较高的操作压力和较长柱的分离时间增加。其中有效的方法是改变流动相有机改性剂或色谱柱功能，在这种情况下分离时间不会增加，有时可以缩短以实现更快的分离。对于肽和蛋白质等大分子，使用孔径较大的色谱柱颗粒很重要。

      今天恒谱生分享的知识先到这啦，希望对您的工作有所帮助！

         液相色谱仪除了日常维护保养外，使用高纯度溶剂不仅能保护液相系统，也能增加结果的可靠性。HPLC级表示化学试剂的纯度，是可在GX液相色谱中使用的试剂的纯度，制备色谱法、平行分析或梯度分析需要使用到不同的HPLC级试剂。

         样品在注入液相系统前，必须选择一种合适的HPLC溶剂。在反相GX液相色谱中，当样品溶剂与流动相的洗脱强度有差异,尤其是前者的洗脱强度较强时,就会产生峰的变形及柱效的降低。解决该问题最有效的方法是使用流动相作为溶剂溶解样品,这样既可以避免样品溶剂和流动相之间任何强度或粘度的不匹配，也可以减少样品分析时基线的漂移。溶剂在流动相中起着重要的作用，并有助于将进样品通过分离柱后输送到检测器。为了满足不同的分析要求，可以购买不同纯度等级的溶剂来使用，HPLC分析需要使用高纯度的溶剂，但是同时也要考虑成本和实用性等方面。

         HPLC级溶剂的纯度通常超过99.9％，并且瓶身标签上还会标明其他杂质的含量。但是杂质会导致多余的峰，从而干扰色谱图中的主峰，对我们的分析结果产生干扰。杂质产生的原因有很多，可能溶剂纯度不够，可能是瓶身不干净或者软管不干净，还可能是溶剂吸滤头的过滤杂质效果不好。恒谱生不锈钢流动相进样口过滤器能安全有效地保护泵和止回阀，尺寸小，适用于各种品牌的HPLC系统和多种小瓶口的存储池容器。吸滤阻力较小，几乎没有背压和形成空化，兼容多种流动相管路，无需换吸滤头即可配不同规格的吸管，过滤微粒污染物效果好，无气泡，溶剂利用率高。

        在整个紫外线可见波长范围内，没有溶剂是100％透明的，常用的HPLC溶剂在一定波长范围内显示出透明性。大多数应用中会使用紫外线检测器，因此所选的溶剂应该尽可能具有低的紫外线截止波长，让大多数的样品组分在高于截止值的波长处显示出可测量的吸收度。除此之外，溶剂的粘度越高，填充柱中固定相的阻力将导致背压越高，因此所选溶剂也应具有低粘度才是比较理想的。

        大多数的溶剂在密封瓶中才能维持它的稳定性，但某些溶剂的保存期限有限。使用时要注意查看使用期，注意在有效期内使用，不要购买过多的溶剂避免ZH用不完产生了浪费行为。

      作为ZH的建议，所有溶剂在使用前通过进样口过滤器过滤并脱气，这样的预防措施将提高HPLC系统的使用寿命，也有助于增加分析结果的可靠性。

        gao效液相色谱法在临床实验室中对不同体液中生物标志物的分离和定量起了重要作用。HPLC与其他常规检测器（例如UV，荧光和电化学检测器）相比，更趋向于质量敏感检测。填充材料技术的进步，例如亚微米表面多孔二氧化硅颗粒已经被引入了超高压液相色谱中，在不遇到高背压的情况下提高了分离效率。

        GX液相色谱仪的系统压力较高，色谱柱是产生系统压力的主要部件，高背压会影响很多方面比如反压太高超过流通池的耐受压力，会导致流通池的损坏。恒谱生液相色谱柱均一的粒径保证了流动相稳定的流动，并且确保色谱柱有着较低的柱压。

        恒谱生分析保护柱也具有低背压，不漏液，死体积少等优点，能够减少液相色谱系统内的部分压力。

         除此之外，其他先进技术的引用与结合，在不同程度上优化了液相色谱分析工作方法，例如GX的自动进样器，减少检测器的细胞体积以及数据收集和分析的改进等等。很多实验室每天需要生成数百个样本的多个参数的报告，这些方法都能节约工作时间与提升工作效率。

        临床实验室通常处理数百种生物流体样本，例如血液，尿液和其他体液。需要有效的提取过程与快速分析相结合，才能快速处理如此繁重的工作，但又不影响分析的质量，患者的ZL方法与报告的准确性有很大关系，因此快又准的报告是重中之重。

        本文简要讨论了临床实验室中一些常见的HPLC分析应用。

        生物样品需要事先处理和加工，以消除来自其他成分的干扰，尤其是在血液等液体的情况下。采用溶剂萃取，超滤和固相萃取等方式可防止对检测产生干扰并且可防止色谱柱内部堵塞。预防色谱柱堵塞还可以借助一些液相分析耗材配件的帮助，比如在色谱柱前添加预柱（保护柱）起到过滤颗粒物，化学物，杂质等作用。这些污染物会污染色谱柱、堵塞色谱柱，恒谱生建议在色谱柱前安装分析保护柱可以起保护色谱柱、防止堵塞、延长色谱柱的寿命等作用。

       除了安装保护柱，还可以安装在线过滤器来防止色谱柱堵塞，恒谱生在线过滤器由洁净的高品质不锈钢部件组成，这些过滤器旨在减少色谱柱入口筛板的污染和堵塞问题。

        儿茶酚胺

        儿茶酚胺是一种含有儿茶酚和胺基的神经类物质。儿茶酚胺充当神经递质和肾上腺激素。去甲肾上腺素，肾上腺素和多巴胺是可用于诊断是否患有帕金森氏病，高血压和肌营养不良。以前依靠使用电化学或荧光检测法检测尿液或血浆样品中的儿茶酚胺含量，而使用HPLC检测是一种便捷的新分析方法。

       维他命

         维他命在人体生长、代谢、发育过程中发挥着重要的作用。维他命在体内是微量的，在除去存在于体液（例如血液和脑脊髓液）中的干扰化合物后，HPLC提供了灵敏且可靠的维他命估算技术。虽然这样分析技术的成本十分高昂，但是由于具有超高灵敏度和快速处理繁重工作量的优势，一些大型临床实验室还是会采用这种技术。

           糖尿病监测

          糖尿病是以高血糖为特征的代谢性疾病。高血糖则是由于胰岛素分泌缺陷或其生物作用受损，或两者兼有引起。HPLC能准确定量地评估糖化血红蛋白被证明是有效控制血糖的监测技术。即使在收集样本两周后，也可以通过HPLC分析血红蛋白HbA1c在专用纸上收集并干燥的血斑。该方法为患者长期血糖控制提供了高灵敏度的检测。

       每个实验室的色谱分析工作者都很清楚，HPLC 分析使用液体作为载体，它将注入的样品溶液输送到色谱柱然后输送到检测器。这种载体可以是缓冲液与有机溶剂的水-有机混合物、有机-有机混合物。HPLC 系统的管道和阀门通道非常狭窄，使用未经适当过滤的溶液可能会导致堵塞。通过液相色谱仪运行清洁、无颗粒的 HPLC 级溶剂是一项基本维护方案。

一、对HPLC 系统的影响：

       使用过滤流动相以去除颗粒物质能够防止导致色谱柱堵塞，色谱柱不仅很昂贵而且被颗粒物堵塞会导致背压增加或保留时间发生变化；还能大限度地减少由于 LCMS、UPLC 和 HPLC 等灵敏度高的仪器设备中的精密阀门和管路堵塞而导致的系统停机时间。高级色谱溶剂/超纯水通常通过 0.2 微米过滤器进行预过滤，以满足其在色谱系统中使用的等级。但是，有时您也使用这些溶剂（含或不含化学试剂和添加剂）制备（混合）自己的流动相。当您使用这些试剂级化学品或添加剂制备流动相时，还应该在使用前通过 0.2 微米玻璃或钢过滤器过滤混合物，这可以确保您的流动相储液瓶在使用过程中是没有污垢和灰尘等杂质。

二、溶剂过滤器的重要性：

       过滤和过滤器（又称溶剂吸滤头、流动相吸滤头等）在 LC 系统中是非常重要的，因为流动相流路中如果存在微粒，LC 系统中的许多组件都容易过早失效。例如，从溶剂瓶中抽出的流动相中的灰尘或其他微粒会导致泵止回阀部分失效或完全失效（泵根本不产生流量）。所以在选择流动相溶剂进行任何分析之前检查流动相溶剂的完全混溶性很重要，同样重要的是检查它们在混合时不会相互反应。否则悬浮颗粒物会导致柱内积聚并产生背压，从而影响流速和损坏泵的组件。最坏的情况还可以是接头处可能会出现流动相泄漏并伴随着分析运行停止的情况发生。还有最明显的故障模式涉及进样样品或仪器组件中的微粒积聚在色谱柱入口处，从而导致色谱柱堵塞。

三、选择溶剂过滤器的选择：

       选择合适的过滤器需要了解过滤器/溶剂相容性以及过滤器的化学/物理特性。这些特性包括孔径、孔分布、过滤器厚度、可提取物、疏水/亲水特性、结合特性、热原性、气体和液体流速、爆破强度、高压灭菌性、孔径和标称颗粒保留。选择不正确的过滤器可能会导致可提取材料危及分析结果。对于色谱分析，可萃取材料产生的情况包括样品吸收、共流出和外来峰。在液相色谱的应用中通常选择孔径为 0.45μm的在线过滤器，而对于细菌去除或超高液相色谱应用中则适宜选择 0.2μm 的在线过滤器。

       今天恒谱生分享的知识先到这啦，希望对您的工作有所帮助！