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PCR原理傻傻弄不清楚？

PCR实验步骤看似简单却总是做不好？

不知道不同实验目的该选哪种PCR？

「全线赋能“沃”的实验」之实验方法实战教程

直播第六期为大家讲解

《PCR技术》

从技术原理、步骤详解、类型介绍到应用领域

让你一场直播课吃透PCR

直播时间

7月5日（周二）19：00

报名方式

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主题：PCR技术

• PCR的原理

• 实验步骤

• PCR的分类及实际应用

讲师：方晟

昆明理工大学硕士研究生，已发表SCI论文4篇，在载体构建、药物活性筛选、肿瘤模型构建、单细胞数据分析等方面有着丰富的经验，研究方向主要是抗肿瘤药物的kang癌机理和单细胞测序分析。

上期直播间互动问题

这次我们全部为小伙伴解答

Q1：如何去选择使用全脑缺血还是局部缺血模型呢？

A1：全脑缺血模型——二血管阻断法，模拟临床休克、心功能不全、脑血管严重狭窄或阻塞等血液低灌流引起的脑循环障碍；

全脑缺血模型——四血管阻断法，海马损伤明显，可显示记忆功能减退；

小鼠全脑缺血/再灌注模型——用于筛选脑活性保护成分或缺血性保护剂的研究；

局灶性脑缺血——栓塞法，适用于血栓形成过程研究及溶栓治疗观察，该方法可选材料多样，能较好模拟脑栓塞；

局灶性脑缺血——线栓法，急慢性局灶性缺血模型，模拟人类缺血性脑血管病的永jiu性及暂时性局灶性缺血的各种状态，较适合再灌注作用及相关药物疗效的探究；

局灶性脑缺血——光栓法，适合慢性脑缺血研究，抗血小板、抗血栓等药物及内皮细胞保护等方面的探究，该手术方法创伤小，动物可长时间存活，血栓形成过程与人类相似并且可选择皮层梗死位置；

局灶性脑缺血——开颅法，适用于脑缺血后长期神经功能缺损及介入治疗和康复的研究，此模型以大脑皮层、尾状核缺血最明显。

Q2：小鼠线栓造模选择什么规格的尼龙线？

A2：可以参考如下瑞沃德售卖的尼龙线规格

Q3：光栓造模光束的功率多少合适呢？

A3：

Q4：MCAO模型成功的判定标准有哪些?

A4：可使用激光散斑血流成像系统或激光多普勒血流仪进行生理学检测，血流变化率＞70%即可初步判断模型成功，同步配合神经行为评分及TTC染色综合判定。

Q5：如何提高模型的存活率呢，有什么建议呢？

A5：（1）麻醉对死亡率影响较大，推荐使用吸入麻醉；

（2）控制缺血时间，缺血时间过长将导致死亡率的上升；

（3）维持术中及术后体温，可维持正常生理体征，推荐使用体温维持仪；

（4）可使用抗生素抗感染。

Q6：大鼠内皮素脑内注射诱导的局灶性脑缺血模型的操作及坐标点位置？

A6：（1）剪去动物颅顶的毛发，正中线向左旁开 0.2 cm行纵向切口，长约 1.5 cm。剪开皮肤，分离皮下筋膜，暴露颅骨表面，将颅骨骨膜刮除，骨膜处理的好处在于能够更清楚的观察骨缝，便于定位和固定，并有助于止血；

（2）将假电极移至 Bregma 点上，然后移动假电极至所需位置，并作好标记；

（3）移开假电极，在标记处用牙科钻钻一直径 1 mm 左右的小孔，以钻透硬脑膜为度；

（4）在颅骨其他部位钻两颗眼镜螺丝，深度不能超过颅骨厚度。将假电极换成 26-gauge（6.5 号注射针）的套管，按上述定位方法，将套管通过小孔下至硬脑膜，并以此位置为起始，向腹侧深入到脑的梨状皮质内 MCA 背侧 1～2 mm。该位点的参数为 Bregma 前 0.2 mm，外侧 5.2 mm，硬脑膜下 6.1 mm，或 Bregma 后 0.3 mm，外侧 5.6 mm，硬脑膜下 7.0 mm、

（5）用牙科水泥将套管固定于螺丝和颅骨上，5%聚维酮碘消毒创面。

Q7：在实验过程中分离了颈总动脉之后发现颈外动脉和颈内动脉是一上一下的，如何分辨这两个呢？

A7：颈内动脉看似在外，它从血管分叉处延伸出一小段就有向下走的趋势，基本没有侧枝；颈外动脉看似在内，相比颈内动脉表浅，侧枝较多。

Q8：脑缺血造模之后一般可以做什么行为学呢？

A8：

Q9：TTC染色不成功有哪些原因呢？

A9：可能性较多，包括了手术、试剂、染色注意事项、反面、PBS配置等等。如遇到TTC染色不成功，可以从以上各个方面去依次排除原因。

Q10：激光散斑血流成像系统的成像范围有多大，时间大概需要多久呢？

A10：成像范围是5.7mm*7.5mm-22.5cm*30cm，成像时间为0.01s/帧，全分辨率采样速度100FPS。

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单细胞样本制备老失败？

流式实验得到数据不可靠？

流式图不知道怎么分析？

「全线赋能“沃”的实验」之实验方法实战教程

直播第四期将带来

《流式细胞术》

从单细胞制备到流式细胞术，理论+实例

带你快速get到其中的难点要点

直播时间

5月31日（周二）19：00

报名方式

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主题：单细胞悬液样本的分类及制备

• 单细胞悬液样本类型

• 制备注意事项

• 制备方法实例

讲师：冯启峥

瑞沃德高级产品方案经理，专注动物传染病学和细胞与分子免疫学研究多年，在动物疫苗研发、CRISPR的原核细胞应用方面有着较为丰富的经验，致力于为客户提供专业的细胞与分子生物研究方案。

主题：流式细胞术的原理及应用

• 仪器基本结构解析

• 实验方法实操讲解

• 技术应用介绍

讲师：方晟

昆明理工大学硕士研究生，已发表SCI论文4篇，在载体构建、药物活性筛选、肿瘤模型构建、单细胞数据分析等方面有着丰富的经验，研究方向主要是抗肿瘤药物的抗 癌机理和单细胞测序分析。

上期直播间互动问题

这次我们全部为小伙伴解答

1、做外周神经损伤的小鼠能活多久？如何饲养？

外周神经损伤一般不会造成动物的死亡，但一些特殊情况会影响动物的存活率，比如为了避免在手术部位引起不良组织炎症，我们应该尽量缩短手术时间，如果手术部位意外出血，要用棉签适当按压。如果出血没有停止，就不要对这只动物进行进一步的实验。术后动物应该放进干净的鼠笼并分笼饲养，注意保温。

2、脊髓损伤造模后，动物出现功能障碍不能自主排尿该如何护理？

每日按压排尿3次，以防泌尿系统感染；连续3天，每天两次向腹腔注射相同剂量青霉素预防感染。

3、使用纤维蛋白胶修复的是外周神经损伤的哪个类型或者说等级呢?

纤维蛋白胶可以应用于横断的神经，帮助受伤神经的近端和远端残端紧密对齐，是神经缝合技术的一种替代方式。

4、坐骨神经挤压的结扎力度如何把控？

有一些文献上会使用带有力值的工具进行挤压神经，如果我们没有这类的工具，可以使用血管夹对神经进行夹持，保证力度的一致性。

5、有专门评估大小鼠前肢抓取能力的行为学实验吗?

针对于前肢的抓取能力，爪抓力测试仪可以测动物前肢，后肢的抓力，另外如果是判断动物前肢抓取食物的精细运动，可以用楼梯式抓取测试仪来进行。

6、目前好像2D步态分析居多，慢慢也看到了3D步态分析，两者相比各自有什么优缺点呢?

步态没有2D、3D的区别，国内使用较多的步态有2种：第一种是依靠压力感应可以生成动物脚掌受力的情况，判断动物的损伤情况；第二种是通过视频记录动物足部在运动时的轨迹，通过足部的运动过程计算生成动物活动过程中四肢运动的各项指标来判断动物的损伤情况。这两种方法从2个不同的方面完善了步态的分析数据，但实际上无法互相替代。一般来说大鼠步态用第一种压力感应测试的会多一些，小鼠步态则用视频记录的多一些。所谓的3D步态是通过从侧面拍摄动物运动时的腿部活动，对动物的步态运动进行更为细致的评估，与传统步态记录的是2个维度的信息，无法进行替代。由于需要识别动物腿部的关节，目前无法与足底步态很好的融合结果。

7、这种转棒实验是可以大小鼠通用的吗？如何检测到掉落？

转棒大小鼠主机通用，但是跑道是需要替换的。设备通过红外感应，电子感应等自动检测动物掉落情况，停止计时。

8、外周神经损伤会导致疼痛致敏，在模型检测中可以用什么疼痛检测方法呢？

主要看测痛的部位，机械痛一般可以用vonfery针或电子测痛仪来进行测试，针对不同部位也有面部疼痛测试仪（三叉神经），压感测痛仪（背部，较大的关节），钳式测痛仪（整个脚，细小的关节），热痛一般测试动物足底或尾部，使用红外测痛仪或者甩尾测痛仪。

9、怎么手动排尿？

按摩膀胱。

10、每天需要按摩多久？

术后需轻轻按摩挤压膀胱进行排尿，每次按摩到排空，每天至少三次。

11、不规则梯和错步分析仪是不是指一个东西啊？

是一种类型的仪器，不同厂家的名称，测试方法，输出的指标会略有不同。

12、转棒实验一直做不出差异怎么办？

可能有2种原因：

①测试时动物已经恢复到与正常鼠一致的水平，所以做不出差异。

解决方法：将转棒测试时间提前。

②测试难度过于简单或者过于困难，导致差异很小，从而统计分析结果无差异。

解决方法：调整实验难度，直到可以做出差异的结果。新型转棒仪除了原先的匀速和匀加速以外还增加了阶段加速等测试方法，实验难度有了更大的调整空间。

13、两爪及四爪攀爬实验有合适的实验设备吗？

不规则梯结合自制实验设备。

14、脊髓损伤后有哪些评估手段？

脊髓损伤后可通过行为学对运动及感觉进行评估。BBB法：一般用于观察大鼠后肢行走及肢体活动，评分分为三个部分，0-7分评判动物后肢关节活动情况，8-13分评判后肢步态及协调功能，14-21分评判运动中爪的精细活动；BMS评分是在BBB评分基础上针对小鼠的运动特点做出了完善和修改，是专门用于小鼠后肢功能的评分方法。其他运动相关行为学：步态分析系统用于评估步态动力学、协调性分析、平衡性分析等；转棒仪可评估动物的运动协调性；行走障碍分析仪可分析简单步态及运动协调性等。感觉功能相关行为学：Vonfrey测痛针用于评估对触碰的敏感性；冷热盘用来测试动物对冷热刺激的敏感度。

15、平衡木也可以做小鼠吗 ？

有小鼠平衡木可以进行小鼠实验。

16、请问外周神经损伤后有哪些手段可以评价感觉功能的损失？

感觉功能相关行为学：机械痛一般可以用vonfery针或电子测痛仪来进行测试，评估对触碰的敏感性，针对不同部位也有面部疼痛测试仪（三叉神经），压感测痛仪（背部，较大的关节），钳式测痛仪（整个脚，细小的关节），热痛一般测试动物足底或尾部，使用红外测痛仪（用于量化对小鼠和大鼠后爪辐射或红外热刺激的热阈值的方法）或者甩尾测痛仪（一种基于对啮齿动物中热刺激回避反应的潜伏期测量的疼痛实验）。

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如何才能通过实验动物福利伦理审查？

吸入式麻醉有哪些需要注意的要点？

投稿被拒，竟是麻醉不符合动物福利？

动物麻醉气管插管不好操作？

「全线赋能“沃”的实验」之实验方法实战教程

第一季收官直播第八期带你聚焦

《动物呼麻及气管插管实验全解》

两位老师详解实验动物福利

吸入式麻醉、机械通气等专业知识

并手把手带你走进气管插管实操

原理+实操，助你提高投稿通过率

8月9日（周二）19：00

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课程1：科学认识实验动物福利

• 定义及反对者的声音

• 动物福利和伦理

• 伦理审查

讲师：饶秀茸

拓普生物副总经理，毕业于广东医科大学，拥有十五年动物实验和动物房管理从业经验，专注研发与专利撰写，曾主持参与深圳市科创委、广东省重大科技专项项目等课题。

课程2：动物呼吸麻醉原理全解

• 吸入式麻醉

• 机械通气

• 应用案例

讲师：王晓雨

瑞沃德资深解决方案专家，毕业于深圳大学，在动物呼吸麻醉方面深耕多年，目前已服务全 球超500家单位，致力于在全 球推广更符合动物福利的呼吸麻醉方案。

课程3：气管插管实操

• 气管切开插管法

• 经口插管法

• 吸入式麻醉实操

上期直播间互动问题

这次我们全部为小伙伴解答

1. 如果我只想激活一种类型的神经元应该怎么办？

答：研究的目标脑区内有多种类型的神经元，只激活其中一种类型表明需要实现细胞类型特异性刺激，几类刺激脑方法中只有光遗传刺激能够满足，通过特异性病毒载体，将光敏蛋白转染到某一类型细胞上，从而实现细胞类型特异性刺激。

2. 我埋的刺激电极总是会掉该怎么弄？

答：可以在埋植电极的同时，在颅骨附近先埋植两颗颅钉起固定作用。

3. 使用经颅电刺激能只激活一种类型的细胞吗？

答：经颅电刺激作用于一片刺激范围内的所有细胞，不能只激活一种细胞。

4. 感觉刺激中，为什么要选择40Hz的频率？

答：PPT解析的文献里研究的是AD小鼠，与认知相关。认知损伤的小鼠其Gamma频段的神经振荡也发生改变，40Hz属于典型Gamma频段，因此使用40Hz刺激诱发小鼠大脑Gamm频段的振荡。

5. 光遗传为什么给光就能激活或抑制神经元？

答：光遗传技术利用分子生物学、病毒生物学等手段，将外源光敏感蛋白基因导入活细胞中，在细胞膜结构上表达了光敏感通道蛋白；然后通过特定波长光的照射，控制细胞膜结构上的光敏感通道蛋白的激活与关闭；光敏感蛋白的激活和关闭可控制细胞膜上离子通道的打开与关闭，进而改变细胞膜电压的变化，如膜的去极化与超极化。当膜电压去极化超过一定阈值时就会诱发神经元产生可传导的电信号，即神经元的激活；相反，当膜电压超极化到一定水平时，就会抑制神经元动作电位的产生，即神经元的抑制。

6. 在脑刺激的过程中，能够同时进行脑电采集吗?

答：这需要看是哪种脑刺激方法。经颅电刺激和深部脑刺激不建议同时记录电信号，会存在干扰。光遗传刺激能够同时进行脑刺激和脑电采集，光遗传通过光进行刺激，而不是电刺激，因此不存在干扰。

7. 光遗传的刺激参数如何选择呢？

答：光遗传实验的参数有频率，脉宽，功率等。光遗传刺激的频率根据不同的实验需求而有所不同，具体情况可参考已发表的文献进行选择。刺激时不要超过通道蛋白的响应频率，不然容易出现脱敏效应。脉宽与占空比相关，在频率固定的情况下，可通过提高脉冲宽度从而提高占空比。光功率强度的选择与对应的通道蛋白有关，激活不同的光敏蛋白有不同的光功率要求。

8. 脑机接口读取到写入的闭环时间限度要少于多少呢？

答：依据任务而异，不同的任务类型对时间的要求不同。例如在常见的字符输入任务中，对时间要求不严格，延迟也没关系。

9. 无创脑机接口的外部噪音影响会不会很大？

答：无创式脑机接口容易收到外界噪音的影响，针对实验过程涉及到的外部环境、采集硬件及软件算法都需要特别注意，需要做一定程度的降噪处理。使用的电极也会对信号的噪音有一定影响，一般湿电极信号质量优于干式电极装置记录的信号质量。实验被试人员也需要注意采集期间尽量不要产生任务需求之外的移动。

10. 全植入式的电极深度在动物模型上有没有限制？

答：一般来说没有限制，但是在实际操作过程中需要考虑具体的实验对象。植入的区域多是皮层，处于脑部相对靠外的位置，不会特别深，植入过程中注意避开血管的位置。植入区域的深度多和使用的电极类型相关，例如犹他阵列电极只适合于进行大脑皮层记录。意识活动产生的脑区（NCC）很多位于丘脑等深部脑区，目前技术无法达到。

11. 全植入式电极植入获取有效数据的时间大概多久，信号衰减的主要原因有哪些呢？

答：一般良好的手术植入操作能维持半年以上的信号采集，也有一年以上还能继续采集信号的。信号衰减的原因多是植入的电极随着时间的延长，逐渐被类似“疤痕组织”的细胞所包裹而失效，或者是电极老化脱落。

12. 无创式、半植入式以及全植入式这3种不同方法对于完成闭环任务是否有时间上的差异呢？

答：没有显著的差异。延迟时间的差异主要取决于信号的传输、处理、外部设备的响应等各个方面。一般来说，植入式的会比无创的信号时间精度更好，可以完成更多复杂精确的任务。

13. 非侵入式远程收集脑电用什么技术呢？

答：一般是将普通有线的方式更换为蓝牙或者WiFi都可以。

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在日常膜片钳实验时，你是否也被这些问题困扰？

操作十分复杂，一不小心就出错

注意事项多，包括如何排除噪音、提高封接成功率等等

想要借鉴该领域专家经验，一直苦寻不到……

8月23日（周二）19：00，「大成学堂」特邀南京大学张洋浔博士做客直播间，为大家带来“膜片钳技术解析与经验分享”。通过本次直播课程，你可以收获膜片钳技术的详细解析、多年实验操作经验、日常操作注意事项等方面的专业知识，还可在线提问获得详细解答。 

张洋浔 博士

南京大学博士，致力于研究内源性神经递质/调质系统及外源性药物对前庭代偿的影响及神经机制，擅长应用全细胞膜片钳记录、环路示踪、光/化学遗传学操控方法、光纤记录等实验技术。相关研究成果发表在Journal of Neuroscience, Biomedicine & Pharmacotherapy, Neuroscience Bulletin等学术期刊。

8月23日（周二）19：00

相约直播间，轻松掌握膜片钳技术

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实验动物该怎么选择？

不同脑缺血模型，弄不清对应构建方法？

常用的血流监测技术，你都掌握了吗？

「全线赋能·“沃”的实验」之实验方法实战教程

直播第五期为大家聚焦

《脑缺血模型构建及检测》

从实验动物的选择、不同模型的分类

各个模型的构建方法到血流监测技术

两位老师将进行综合详细的讲解

全面助力你的科研实验研究

直播时间

6月21日（周二）19：00

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主题：脑缺血模型构建

• 脑缺血研究背景

• 脑缺血动物模型构建

• 脑缺血模型构建实验仪器

讲师：孙绍强

瑞沃德行业解决方案专家，在膜片钳/钙成像/干细胞诱导方面有着丰富的实验经验，曾参与多项重大研发及自然科学基金项目，曾在Cell Stem Cell 上发表论文，专注于神经疾病，脑缺血及神经退行性疾病模型制备和机制研究，已为上百家客户提供专业的神经疾病整体解决方案。

主题：脑卒中研究中的血流监测技术

• 激光多普勒

• 激光散斑

• 超声多普勒

• 核磁共振成像

• 双光子显微镜

讲师：殷维君

瑞沃德微循环监测解决方案专家，在生理信号监测和血流血氧成像领域拥有丰富的经验，主导动物活体成像解决方案的设计及优化，专注于临床及临床前微循环监测解决方案的构建。

上期直播间互动问题

这次我们全部为小伙伴解答

Q1：组织剪切的大小有没有具体要求，肿瘤组织一般2-4mm可以吗？

A1：这要根据组织类型去判断，一般会预处理成10mm左右的组织块，太大可能会导致处理不完全，太小可能导致细胞死亡增加，甚至导致样本变稠等。

Q2：细胞活率80%就可以了吗，看到一些资料写的都要90%以上。

A2：这个需要根据下游实验的需求灵活调整，如果样本存活率不能达到要求的话，除了优化实验条件以外，还可以通过一些死细胞去除的试剂来优化已获得的样本。

Q3：低温解离细胞与常规的37度制备单细胞优势分别是什么？区别是什么？

A3：37℃条件下进行组织解离，由于细胞转录活跃，因此解离过程中基因表达可能会发生改变，可能会干扰应激反应相关基因表达，所以在进行snRNA-seq时可以通过使用冷活性酶释放细胞核，同时一些热敏感或者脆弱的细胞更适合采用低温解离的分离方式，但是低温条件对一些质密难解离的组织的处理效率可能会降低。

另外，温度对不同细胞种类也有一定影响，比如在进行脑组织解离时，热解离可能会影响神经元和星形胶质细胞的获取，但是会大量富集小胶质细胞，所以在进行组织解离时，根据获得目的细胞的需求要灵活调整解离方案。

Q4：裂红处理有什么注意事项吗？

A4：如果直径6-8μm的细胞占比较高，且有核率偏低，这表明红细胞含量可能较多，需要进行红细胞裂解，如果红细胞裂解依然不干净，不建议增大裂解体系，建议适当延长裂红时间，或适当增加裂红次数。

Q5：流式染色时间及温度如何选择？

A5：染色本身取决于抗体抗原之间的结合能力，染色时间和温度，受限于抗体浓度，一般根据选择抗体的说明书推荐的浓度和孵育时间、温度选择。我的实践经验：当不清楚说明书的情况，我会选择室温染色12-15min（取决于抗体浓度微调），或4度冰上30min。注意染色时间尽量不要让细胞破损，否则死细胞碎片会影响流式结果。此外细胞消化完毕后应该尽快染色处理，特别是一些凋亡染色、胞内酶染色为保持细胞物质活性，应尽快染色。

Q6：请问流式细胞实验中单抗进行荧光需要什么样的对照？

A6：关于对照设置，这个比较复杂，一般我们是选择同型对照作为阴性对照组，得到的结果往往是比较好的。所谓的同型对照就是同种属同亚型、相同荧光标记物、使用剂量和浓度相同，且属于非特异性结合的抗体为同型对照组。通常用来消除抗体与抗原的非特异性结合造成的背景染色。 

还有一类就是最常见的纯阴性对照，检测细胞群不进行任何抗体处理，直接进行流式检测，这就是简单消除细胞和溶剂本身的影响，这种方法的好处是节约抗体，毕竟抗体很贵。

Q7：如何减少补偿的干扰？

A7：补偿干扰往往是多激光的流式仪器才会发生一定干扰情况，此时，可以根据抗体公司提供的染料搭配方案选择比较好，也就是发射光谱的波长峰尽量不重叠的染料，这样补偿干扰会尽量消除。因此，往往需要查看染料的波长范围，此外，对于4色以上的多色标记情况，一般不常见，此时往往染料的波长范围难以避免的重叠，这时候，推荐使用抗体公司推荐的配色方案，尽量避免发射光谱的重叠。此外很多流式仪器配套软件都带一定算法对补偿进行修正，可以适当修正这个影响。

Q8：细胞自发荧光如何解决？

A8：细胞自发荧光往往是细胞内物质带有荧光，植物细胞因为叶绿素原因会自带一定荧光，然后一些药物处理下，药物本身带有发色基团，也可能自荧光，此时，纯阴性对照的设置可以补偿一定的情况。然后就是染料的选择情况，染料荧光波长范围避免与细胞自发荧光的波长的重叠，这样会比较好一些。我之前做药物的细胞凋亡实验时候，考虑到药物的情况，就没有使用常见的凋亡检测的Annexin V染料，而改用Annexin V-APC 。尽量设置纯阴性对照、有条件做下同型对照，往往可以在数据处理时候适当减少部分因素的影响。这样流式的结果会更好。

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多重PCR概述

多重PCR(multiplex PCR)，又称多重引物PCR或复合PCR，它是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物，同时扩增出多个核酸片段的PCR反应，其基本原理与常规PCR相同，区别在于多重PCR反应体系加入一对以上引物，各对引物分别结合在模板相对应部位，最终扩增出一条以上目的DNA片段。

多重PCR的特点

•高效性：在同一PCR反应管内同时检出多种基因，或对有多个型别的目的基因进行分型，特别是微量样本的多基因检测。

•系统性：多重PCR适宜于成组病原体的检测，如肝炎病毒，肠道致病性细菌，性病，无芽胞厌氧菌，战伤感染细菌及细菌战剂的同时侦检。

•经济简便性：多种病原体在同一反应管内同时检出，将大大的节省时间，节省试剂，节约经费开支。

多重PCR应用

•基因诊断、肿瘤诊断、病原微生物的检测。

•基因分型、连锁分析。

•植物分子育种、基因表达检测、病虫害检测。

•病原菌污染检测。

•区域捕获测序。

多重PCR之难

多重PCR并不是单纯的将多对特异性引物混合成一个体系。多重PCR之所以难，在于多个靶点之间扩增条件不兼容，每个靶点都需要旁边其他的引物配合。

就像是三人两足游戏一样，每个靶点成功扩增都是需要绑在一起的两个人（一对引物）默契配合。而多重PCR就需要所有的选手同时起跑又同时到达，并且所有的选手都达到发挥。

多重PCR优化

为了达到更好的扩增效果，一般可以通过以下几个方面进行优化。

◆引物的优化：

◆反应体系：

◆反应条件：

◆常见问题解决办法：

多重PCR要求在同一反应体系内对多个位点进行特异性扩增。因而引物间的配对与竞争性扩增均会影响扩增效果。如果能选择合适的反应体系、反应条件以及更合适的PCR仪，则有望提高多重PCR的扩增效果。所以在进行多重PCR的时候，不应墨守成规，要根据自身实验情况对实验条件进行不断优化，达到扩增效果。

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“沃”的实验线上学习平台将陆续上线，包含常见疾病动物模型、实验动物手术操作、实验动物行为评估、神经信号研究、细胞与分子研究……陪你走过整个学期，一站式助你提升科研技能

新冠肺炎疫情的爆发引爆了药企对于疫苗研发赛道的热情，国内外科研机构、制药企业和药品监管机构均以“破纪录”的速度推进新冠疫苗的研究、生产和批准。目前，大多数人都已经了解疫苗免疫的基本原理，但却鲜有人关注到，在许多疫苗的组成中，还有一位必不可少的无名英雄：佐剂。

在本次网络研讨会中，马尔文帕纳科的技术专家将介绍目前疫苗佐剂的研究进展，并介绍经典铝佐剂的分类和特性，以及从铝佐剂颗粒属性角度出发，研讨与其质量研究密切相关的粒径、电荷、吸附率和沉降系数等表征技术。

直播时间：2021-10-27 10:30

主题：疫苗佐剂颗粒表征和质量研究

入口：https://zyt.ouryao.com/plugin.php?id=yaoshi&a=live&liveid=774&referid=668326 

大纲：

一、疫苗佐剂的研究进展

二、铝佐剂的分类与特性

三、铝佐剂与抗原的相互作用

四、铝佐剂颗粒表征：

   1、粒径大小与分布

   2、表面电荷

   3、吸附率

   4、沉降率

嘉宾介绍：

文胜，马尔文帕纳科高级制药业务发展专家

2009年硕士毕业于上海交通大学生命科学技术学院，2010 – 2013于杜邦工业生物技术事业部担任助理研究员，2013 – 2016于格雷斯中国有限公司担任应用技术工程师，并于2016年7月加入马尔文仪器公司，负责激光衍射和图像分析技术在制药行业的技术推广和业务拓展。

各位小伙伴们，好久不见呀~~

春节长假在我们恋恋不舍的目光中绝尘而去！！

当时的“节后再说”有多爽

现在的开工就有多吐血

面对那一茬接一茬的实验

和一脸呆萌的自己，是不是很崩溃？

别担心~~

贴心的小沃已经准备好复工礼包

本次小沃为你准备了5本动物手术造模手册，无论你是想找神经系统、还是心血管疾病、亦或是肿瘤疾病造模实验方案，这里统统都有，一次性全面系统帮你解答手术实验疑难点。

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01

神经系统研究

神经系统研究手术与造模大全囊括了神经科学领域最常使用的动物实验操作技术以及动物模型构建的方法，具体内容包括相关疾病的研究背景、模型构建的操作和评估方法以及参考文献，为您提供规范的实验操作流程和更多的模型选择，提高实验的成功率和可重复性，助您实验顺利开展。

02

心脑血管疾病研究

本手册详细介绍四大疾病模型，包括高血压、脑卒中、动脉粥样硬化、下肢缺血动物疾病模型，构建方法多达17种，助你开拓科研新思路！

03

肿瘤类疾病研究

这本手册涵盖7大肿瘤疾病模型和15种构建方法，概述了不同模型应用场景、优缺点、使用时应考虑的因素等内容，为您提供更多的动物模型参考和更适合的模型选择。

04

代谢类疾病研究

该手册涵盖常见的脂肪肝模型、1型和2型糖尿病模型、肥胖疾病模型的构建与评估方法；详细介绍了不同模型的应用场景、优缺点、使用时应考虑的因素等内容，助你快速找到合适的代谢类实验模型！

05

呼吸系统疾病研究

此手册涵盖哮喘、慢阻肺、急性肺损伤、肺动脉高压、肺纤维化等五大呼吸系统常见疾病的造模及评估方法；以及详实的实验步骤如材料和试剂、设备、操作流程等，为您提供规范完整的实验操作方法。

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到信号采集这步，突然发现小鼠的电极掉了，数据采集不到，去网上又找不到完整的资料

迷宫类行为学实验种类太多，找资料花了好长时间，要是所有的迷宫实验的资料在一起就好了......

查找科研资源如大海捞针，耗时耗力

效率提不上去，科研工作都耽误了

自从“沃”的实验 | 实验方法实战教程

直播课开播后

小沃也收到全国各地科研人

为助力科研，解决大家找资料难的困境

01实用性强

涵盖科研基础知识、实验技能、经验总结

02形式多样

囊括视频课程、实验手册、SOP流程图……

03内容丰富，持续更新

“沃”的实验线上学习平台将陆续上线，包含常见疾病动物模型、实验动物手术操作、实验动物行为评估、神经信号研究、细胞与分子研究……陪你走过整个学期，一站式助你提升科研技能

04操作便捷观看操作方便，可以随时观看学习

在这里你可以持续获取

最实用的生命科学研究资料

戳链接进入平台：https://mp.weixin.qq.com/s/gImD4GcLCVqQjJ74xjtWXg

“沃”的实验科研资源分享平台首批内容上线，我们为大家分享常见疾病动物模型——构建方法的视频课程+3大实验手册+2大实验解决方案流程图（SOP），涵盖8大动物模型构建课程，4位老师全面讲解每个造模的背景、方法等内容，全面汇总造模技术，助力大家系统性提升科研能力。

• 第一课：阿尔茨海默症模型

• 第二课：帕金森病模型

• 第三课：脑缺血模型

• 第四课：抑郁模型

• 第五课：焦虑模型

• 第六课：创伤后应激障碍模型

• 第七课：自闭症谱系障碍模型

• 第八课：成瘾模型

• 代谢类疾病研究手术与造模手册大全

• 呼吸系统疾病研究手术与造模手册大全

• 神经系统研究手术与造模手册大全

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• 给药手术解决方案

第一期干货内容已上线 →  https://mp.weixin.qq.com/s/gImD4GcLCVqQjJ74xjtWXg

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后续内容将持续更新

下期内容预告：

常见疾病动物模型——构建方法系列2

作为神经研究领域的科研人员，你是否想要了解：

◆ 触觉、听觉等感觉生成的分子细胞和神经环路基础；

◆ 机械门控离子通道的类型，及其在耳聋等疾病ZL中的临床实用价值；

◆ 基础科研的一般历程和应用前景。

当你正在探索关于发生脑损伤和神经退行性疾病后如何促进神经元的有效新生及如何重塑受损神经功能时，你是否也正在思考：

◆ 星形胶质细胞如何转化为神经元？

◆ 哪些信号通路参与这一转化过程？

◆ 我们能不能对这一过程进行干预从而成为ZL脑损伤的新策略？

如果你正在为以上问题寻找答案，欢迎参加2021年7月1日“沃”在前沿·神经科学菁英论坛，康利军教授将与你分享神经生物学前沿知识；李汶潞博士将和你探讨神经元再生热点研究。两位学者将共同为你的科研探索增添灵感。

1、会议信息

时间：2021年7月1日星期四 ｜19：00-21：00

分享主题一：触、听觉生成的神经生物学机制 （康利军教授）

分享主题二：The Neurogenic Potential of Astrocytes: a story of transformation and renewal （李汶潞博士）

（▲识别二维码报名参会）

2、分享嘉宾一

分享主题：触、听觉生成的神经生物学机制

课程大纲

◆ 听觉、触觉等感觉生成过程的分子细胞与神经环路机制

◆ 机械门控离子的类型及其生理作用

◆ PIEZO、TMC等机械门控离子通道的筛选、鉴定、生物物理特性和药理特性

主讲嘉宾

研究方向

感觉生成的分子细胞和神经环路机制，及慢性痛、听力丧失等神经精神疾病的病理和药理，为临床诊断、ZL和药物开发提供潜在的分子靶标。

主要成就

近三年代表性成果有：揭示了神经胶质细胞在理化信息感受编码中的重要作用（Neuron 2020）；揭示了耳聋基因 TMC 通道在神经肌肉兴奋性调控中的新机制（Neuron 2018）；揭示了浓度依赖性化学信息编码的神经环路机制（Nature Communications 2018）。作为课题负责人研究课题有国家重大科学研究计划项目、国家高技术研究发展计划（863计划）项目、国家自然科学基金面上项目、浙江省杰出青年基金项目等。

（▲识别二维码报名参会）

3、分享嘉宾二

分享主题：The Neurogenic Potential of Astrocytes : a story of transformation and renewal

课程大纲

◆ 脑损伤后产生新神经元

◆ 星形胶质细胞和脑损伤

◆ 星形胶质细胞——新神经元的一个有希望靶点

主讲嘉宾

研究方向

专注于研究脑损伤以及神经退行性疾病中神经血管单元细胞间的信号传导机制、生物节律对脑卒中等中 枢神经系统疾病的临床转化研究的影响，衰老后大脑神经干细胞对神经修复的作用以及机制。

主要成就

近年来发表通讯作者或第 一作者SCI论文三十余篇。现任Frontiers in Neurology, Plos One、International Journal of Clinical and Experimental Medical Sciences等杂志编委会编辑；国际脑血流与代谢功能协会（ISCBFM）委员，国际神经化学学会（ISN）委员，ZG药理学学会（CNPHAS）委员。

4、会议流程

19：00-19：10 会议开始

19：10-19：35 The Neurogenic Potential of Astrocytes : a story of transformation and renewal

19：35-19：45 有奖互动及新品发布

19：45-20：15 触、听觉生成的神经生物学机制

20：15-20：20 有奖互动

20：25-21：00 专家在线答疑

（*具体流程以实际直播为准）

（▲识别二维码报名参会）

5、参与方式

7月1日，19：00

准时参加，即可听学术大咖前沿分享

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还在为光纤记录实验而忧心？

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直播课首期就为大家带来

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从技术原理，实验操作到数据采集、分析

讲透光纤记录技术

直播时间

4月19日（周二）19:00

报名方式

识别上方二维码，立即入群免费报名

直播全程免费，群内免费答疑

4月19日，19：00

我们直播间见

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