仪器网（yiqi.com）欢迎您！

各位小伙伴们，好久不见呀~~

春节长假在我们恋恋不舍的目光中绝尘而去！！

当时的“节后再说”有多爽

现在的开工就有多吐血

面对那一茬接一茬的实验

和一脸呆萌的自己，是不是很崩溃？

别担心~~

贴心的小沃已经准备好复工礼包

本次小沃为你准备了5本动物手术造模手册，无论你是想找神经系统、还是心血管疾病、亦或是肿瘤疾病造模实验方案，这里统统都有，一次性全面系统帮你解答手术实验疑难点。

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（悄悄告诉你，一次可以领取5本噢！）

01

神经系统研究

神经系统研究手术与造模大全囊括了神经科学领域最常使用的动物实验操作技术以及动物模型构建的方法，具体内容包括相关疾病的研究背景、模型构建的操作和评估方法以及参考文献，为您提供规范的实验操作流程和更多的模型选择，提高实验的成功率和可重复性，助您实验顺利开展。

02

心脑血管疾病研究

本手册详细介绍四大疾病模型，包括高血压、脑卒中、动脉粥样硬化、下肢缺血动物疾病模型，构建方法多达17种，助你开拓科研新思路！

03

肿瘤类疾病研究

这本手册涵盖7大肿瘤疾病模型和15种构建方法，概述了不同模型应用场景、优缺点、使用时应考虑的因素等内容，为您提供更多的动物模型参考和更适合的模型选择。

04

代谢类疾病研究

该手册涵盖常见的脂肪肝模型、1型和2型糖尿病模型、肥胖疾病模型的构建与评估方法；详细介绍了不同模型的应用场景、优缺点、使用时应考虑的因素等内容，助你快速找到合适的代谢类实验模型！

05

呼吸系统疾病研究

此手册涵盖哮喘、慢阻肺、急性肺损伤、肺动脉高压、肺纤维化等五大呼吸系统常见疾病的造模及评估方法；以及详实的实验步骤如材料和试剂、设备、操作流程等，为您提供规范完整的实验操作方法。

手册在手，造模我有

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实验进展如何？

实验数据有了吗？

动物模型构建没人教？

换课题之后对动物模型构建不了解？

辛辛苦苦建立的动物模型

剔除掉了三分之一甚至一大半？

动物模型构建后该如何评估？

别着急，我们帮你准备了

助你开启实验第 一步

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这本手册大全包含什么？

01.神经环路相关研究常用的手术操作

你想要的脑立体定位病毒注射实验、套管埋植实验、光遗传光纤埋植实验、微透析探针埋植实验、在体电生理电极埋植实验等统统都有。实验步骤如材料和试剂、设备、操作流程全都包含。
 

02.神经系统疾病动物造模和评估方法

AD、PD、PTSD、抑郁症、自闭症、颅脑损伤、脊髓损伤、视神经损伤、疼痛等疾病造模与评估方法全部都有。

该动物手术造模大全囊括了神经科学领域最常使用的动物实验操作技术以及动物模型构建的方法，具体内容包括相关疾病的研究背景、模型构建的操作和评估方法以及参考文献，为您提供规范的实验操作流程和更多的模型选择，提高实验的成功率和可重复性，助您实验顺利开展。

不要998，也不要98

统统都不要！！

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上一期《神经系统研究手术造模手册大全》发布以来广受一线科研工作者的好评，现在“沃”的实验第二弹《呼吸系统研究手术造模手册大全》终于新鲜出炉啦！

不知不觉

「“沃”的实验」之安全高效

动物手术造模全攻略栏目

已到尾声啦！

五大动物手术与造模解决方案

数十种动物造模实验SOP

都已悉数亮相

第一期麻醉定位造模实验

与精彩答题PK中奖活动

第二期创伤性颅脑损伤造模实验

与疑难点揭示

第三期动物麻醉造模实验

与动物福利之间博弈思考

第四期动物给药造模实验中

不同动物给药实验分类展示

第五期线栓法

构建局灶性脑缺血模型实验详解

五期满满详细内容干货

是宝们顺利推进实验的有效利器

五期步步流程清晰讲解

是小沃与宝们的珍贵实操经历

小沃由衷希望我的科研宝们

能够在山重水复疑无路的时候

轻而易举地寻找到

柳暗花明又一村的灯塔

在衣带渐宽终不悔的奋斗中

最终收获

那人就在灯火阑珊处的

释然与宽慰

忙于实验的科研宝们

可能还来不及

将过往5期干货一一收藏

贴心的小沃

今天就为你们全部打包

满满实验干货尽数奉上

让宝们动物造模实验再也不犯难

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虽然我们的

安全高效

动物手术造模全攻略栏目结束啦

但是我们「“沃”的实验」

一直在线，接下来

大动物神经系统疾病手术造模protocol

将重磅推出，敬请期待

科研宝们可以随时

关注我们，实时获取

专业的科研实验基础知识和技能

科研实验经验总结

系统丰富的实验学习资料

如果还想获得更多其他实验信息

可在公众号后台留言

小沃将会收取宝们的问题和意见

适时为大家答疑解惑

我们不见不散

下次再见将更精彩

光纤记录系统作为常用的研究动物神经元活动与行为关系的重要工具，对于研究特定神经环路在不同行为范式中的功能具有重要意义。本文将着重介绍光纤记录实验手术所需器材，手术步骤以及注意事项，助力实验数据准确性的提升。

实验设备和材料

异氟烷麻醉系统、立体定位仪、数码显微镜、电极拉制仪、微量注射泵、剃毛工具、手术刀、眼科镊、眼科剪、棉签、碘伏、3%双氧水，AAV病毒、陶瓷插针、颅骨钻、钻头（0.8mm）、颅钉（M1.0xL2.0mm）、螺丝刀（45*1mm）、生理盐水、牙托粉水（义齿基托聚合物，自凝型）、红霉素眼膏、抗生素等。

术前准备

01

确定目标脑区坐标

确定目标脑区位点通常有两种策略：

• 通过使用立体定位图谱，寻找目标脑区具体位置，读取目标脑区深度，矢状、冠状坐标，最终确定目标脑区的三维坐标。

• 通过阅读参考文献，获取方法中涉及目标脑区的坐标。文献中坐标常用标注：AP：anteroposterior，前囟前后；ML：mediolateral，中缝左右；DV：dorsoventral，颅骨（硬脑膜）平面向下。

*需要注意：文献中坐标选取的Z轴参考点：包括Bregma点、脑膜表面、颅骨表面的Z轴读值

02

器具消毒、仪器检查

实验前使用酒精擦拭手术器械，检查各种实验耗材是否准备完整。检查立体定位仪，确保定位仪刻度置零，可以正常工作。

03

实验动物准备

选取实验动物检查其健康状况。

（▲小鼠颅骨表面示意图）

动物手术

01

动物麻醉及固定

1. 小鼠称重。

2. 在异氟烷诱导盒中麻醉小鼠（4％，1 L / min）。

3. 将小鼠嘴部放在麻醉面罩中。

4. 将小鼠门齿扣在适配器齿棒上，并使用适配器将小鼠固定于立体定位仪上，异氟烷浓度调整为0.5-1%。

5. 麻醉深度可通过对脚趾捏合无反应（监测脚趾捏合反应）来确认，手术期间每20min一次。

6. 剃掉从眼睛到耳朵后面的毛发。

7. 用棉签蘸少量碘伏清洁头部。

8. 在头皮表面下注入0.1 ml利多卡因，以提供局部镇痛作用。

9. 保护眼睛避光：涂抹红霉素眼膏。

（▲手术前小鼠）

02

暴露颅骨

1. 从前到后（眼睛之间到颅骨后部）做切口。

2. 用蘸有生理盐水的棉签擦拭切口。

3. 找到并标记Bregma（前囟点）位置。

4. 确保头骨干净（没有血液，毛皮或组织）并且干燥（使用干燥的棉签吸生理盐水或血液）。

5. 将连接好玻璃电极的微量注射泵夹持到定位仪上。

6. 调节颅骨水平：玻璃电极针尖接触Bregma点，将该点设定为原点，而后测量Bregma点左右两侧旁开2.3mm处颅骨的高度差，小于0.03mm则认为左右颅骨水平，大于0.03mm则需要调节耳杆的高度来调整水平，前后方向测量Bregma点和Lambda点的高度差，也需小于0.03mm，若大于0.03mm则上下调整鼻夹的高度（注意：移动颅骨后需要重新定Bregma点）。

7. 标记目标位置。

8. 在目标标记点处用颅钻进行开颅并挑开硬脑膜。此外还需钻两个预留孔，用于埋植颅钉。如果钻孔过程发生出血，使用棉签清洁血液，然后使用一块可吸收的海绵来止血。

9. 用盐水浸湿的海绵覆盖开颅部位。

03

病毒注射

1. 从冰箱中取出病毒。

2. 设置微量注射泵参数（例如吸取体积400nL，速度为800nL/min，模式调为吸入Withdraw）吸取病毒，使其尖端接触Bregma点并设定原点。

3. 取走开颅部位湿海绵。

4. 将玻璃电极针移动至目标位点上方，然后下针至目标位点（下针过程保持匀速缓慢），设置注射泵参数（体积400nL，速度40nL/min，模式调为泵出Infuse）,开始注射病毒。

5. 注射完成后静置10min，10min后将微量注射器抬起。

6. 瑞沃德R480玻璃微电极注射泵搭配立体定位仪，对脑部可精准进行病毒或示踪剂注射。

04

埋植颅钉

颅钉（小螺丝）植入深度约0.5mm左右，避免过深压迫大脑，过浅固定不牢固。固定颅钉的预留孔需离光纤埋植的位置远一些，防止颅钉埋好之后留下的空间太小，导致光纤不好埋植。颅骨钻孔完成后，还需清理颅骨表面的颅骨碎屑，并用生理盐水清洗，保证颅骨表面清晰干净。

（▲颅钉植入）

05

陶瓷插针植入

1. 在病毒注射后，从脑立体定位仪上取下注射泵。

2. 将光纤插针用夹持器固定到脑立体定位仪上。

3. 固定光纤之后需要用光纤尖部接触Bregma点，重新移动至目标位点上方（光纤插针应位于钻头产生的窗口上方）。

4. 将光纤插针下降到适当的DV坐标，高于病毒注射位置200-300μm。

5. 用牙科水泥固定光纤。注意：牙科水泥轻轻涂抹在光纤纤维的底部周围。

6. 待水泥完全凝固后，小鼠转移至饲养笼中单独饲养，术后监测健康情况。

光纤记录实验

待2-3周钙荧光病毒表达后，将光纤与小鼠头部陶瓷插针连接，使用光纤记录系统采集动物在行为学实验中大脑的钙荧光信号，通过分析软件处理钙荧光信号数据，并结合行为学视频对动物的行为进行分析。

（▲光纤记录实验）

光纤记录实验手术中所需器材、手术步骤和注意事项已全部讲解，后续我们还有更多光纤记录干货，请持续关注哦~

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年末，科研人破防瞬间

在实验室待到天荒地老

做起造模实验还是手忙脚乱

即使查阅文献了也不知道怎么入手

年终科研成果总结，实在拿不出手呀

别担心，我们精心为您带来了

代谢类疾病研究手术与造模手册大全

3大疾病模型&超20种模型构建方法

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手册主要内容都有什么？

01

脂肪肝疾病模型

最常见的脂肪肝模型这里都有介绍，包括对饮食诱导模型、化学诱导模型、转基因模型都有详细讲解。

02

糖尿病疾病模型

随着可用的动物模型数量增加，自己跟不上前沿研究怎么办？本节阐明当下热门的1型和2型糖尿病实验动物模型以及优缺点，并详细说明了在使用时应考虑的因素。

03

肥胖疾病模型

带你聚焦高脂膳食型肥胖大鼠模型、下丘脑内侧核损伤（VMH）型动物肥胖模型、双侧卵巢切除(去势术)肥胖模型、大量维生素 D 致动物肥胖模型、转基因法构建肥胖动物模型等5大模型，助你开拓科研新思路，顺利完成科研成果！

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人类的悲欢并不相通

实验小白的“忧桑”无人能懂

辛苦找文献，查文献，看文献

众里寻它千百度

埋头查知网，翻教材，做攻略

实验一来两眼空

文献方法笼统太粗略

求助导师不敢开口

动物给药手术实验还没开始就 BE？

4大应用场景分类展示

清晰展示不同动物给药手术实验的每一个流程

手把手教你，一步步进行规范标准化实验操作

轻松种草动物给药手术成功秘籍！

抑郁动物模型的造模方法找不对？

实验动物不会选择？

不知道有哪些常用的行为学检测方法？

「全线赋能“沃”的实验」之实验方法实战教程

直播第二期将为大家带来

《抑郁动物模型研究方法》

两位老师为大家详细讲解

造模方法、实验动物选择、行为学检测方法

涵盖常用模型和高频技巧，更有互动答疑

快速帮你摸清抑郁动物模型的构建

直播时间

4月26日（周二）19：00

报名方式

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直播全程免费，群内专业答疑

上期不少小伙伴在直播间

提出互动问题，这次我们全部讲解

一、实验操作类

1.注射针进入目标脑区后，可以直接进行注射吗？

“确定针头到达目标脑区后，建议停针1min，平衡气压，然后就可以开启注射程序了。”

2.颅钉植入的位置如何选择？

“颅钉的植入位置应该尽量避免血管集中的区域及注射位点。”

3.颅骨调平的标准要求是？

“前囟和后囟高度差，Bregma左右高度差均在±0.03mm以内，即可认为与颅骨水平。”

4.小鼠脑部病毒注射实验需要挑开硬脑膜吗？

“使用较细的玻璃电极注射的时候需要挑开硬脑膜，因为电极尖端较为脆弱，而硬脑膜具有弹性阻力，可能会把尖端弄断。同样道理，在植入多通道电极的时，也需要挑开硬脑膜，防止电极尖端受损。”

5.脑部病毒注射实验中，进针速度需要控制在？

“进针应保持匀速缓慢，推荐将全自动脑立体定位仪的速度设置在0.2-0.5mm/s。”

6.使用脑立体定位仪固定小鼠，耳杆固定位置是？

“一侧耳杆移至适当位置旋紧固定，用手轻柔拖住老鼠头部，将头部同侧枕骨大孔位置对准耳杆尖端，缓慢推动另一侧耳杆至枕骨大孔处。”

7.如何判断病毒正常注射，没有产生针头堵塞等现象？

“在使用注射针连接玻璃电极进行病毒注射时，可以先用空针吸取足够的矿物油起到密封作用，再吸取一定体积的病毒，矿物油的重力作用可以保证病毒注射更为流畅。另外矿物油与病毒之间因为密度不同会出现明显的液面分界线，我们可以用记号笔标记分界线的位置，就可以很直观观察到注射过程中是否存在针头阻塞现象了。”

二、实验耗材类

1.脑立体定位手术中，如何保护小鼠眼睛不受光源伤害？

“固定小鼠之后，可以在小鼠眼周涂抹红霉素眼膏，起到一定的闭光和防感染作用。”

2.光遗传与光纤记录使用的陶瓷插针有区别吗？

“目前常见的陶瓷插针都是使用的石英材质，自发荧光较低，所以可用于光遗传和光纤记录实验。但是光纤记录实验更推荐使用黑色陶瓷插针，可以更好的避免环境光对于信号的干扰。”

3.固定的颅钉需要使用多大尺寸？什么材质？

“小鼠用M1.0，大鼠用M1.4，M1.2介于两者之间，成年小鼠与幼大鼠可用，一般是不锈钢材质。”

4.颅钉的作用是？

“如同盖房子使用的钢筋一样，和牙科水泥一起可以让植入的陶瓷插针等更加牢固。”

三、实验技巧类

1.左右颅骨调平需要旁开多少距离？

“依据个人习惯而定，一般推荐旁开2mm左右（2-2.5mm均可）。”

2.使用牙科水泥固定，是否还需要缝合头皮组织？

“如果备皮环节直接将注射位点上方的头皮直接剪掉，那么直接通过牙科水泥就可以覆盖头部整体创面，不需要在缝合头皮。如果是剪开头皮进行的注射，或者牙科水泥固定的范围较小，可以将周边的头皮进行缝合。”

3．病毒注射完成后，植入陶瓷插针需要重新进行颅骨调平吗？

“在实验中一般不需要二次调平，使用前囟点作为参考0点，那么整体操作过程中就始终保持同一个参考点即可。如果发现更换夹持器或者更换实验器材，导致坐标有较大差别，可能是动物固定不够牢固，需要重新检查固定。”

4.光纤记录实验过程中需要全程避光吗？

“当然不建议强光下进行实验，使用黑色陶瓷插针及黑色陶瓷套管，将动物头部的牙科水泥涂黑即可很好的避免环境光对于实验信号的干扰。同时实验环境前后需要保持一致，避免环境变化导致的数据对比问题。”

5.怎样才能让数据结果更加平滑？

“数据处理过程中可以选择平滑处理功能，同时在数据采集过程中，可以改变相应的参数（如帧率，曝光等）可以让数据呈现的更加好看。”

6.光纤记录中进行光纤漂白的目的是？

“光纤具有一定的自发荧光，这种内部的自发荧光会掩盖一部分微弱的信号。常用光纤根据材质分为普通光纤和低自发荧光光纤，普通光纤进行光纤记录实验前必须进行漂白。”

7.本底信号波动的产生原因？

“实验环境的不稳定（温度，光线等），动物状态都有可能导致本底信号波动。使用黑色陶瓷插针及黑色陶瓷套管，将动物头部的牙科水泥涂黑可以很好的避免环境光对于实验信号的干扰。”

8.神经递质探针信号与钙信号有什么差别？

“常见钙信号会呈现出快速上升和缓慢下降的特征峰形，而递质类信号因为信号周期较长，上升或下降都可能需要较长的时间，所以信号较为平缓。但是不同脑区及种类细胞的钙信号差别较大，具体实验会有不同。（参考下面图片——经典钙信号状态）。”

四、实验仪器类

1.光纤记录数据分析软件需要单独安装吗？

“不需要，R820光纤记录软件包含数据采集功能和数据分析功能，通过一个软件即可实现采集和分析，简化实验步骤，提高实验效率。”

2.夹持玻璃电极的注射仪器是？

“R480玻璃微电极注射泵，可用于细胞、胚胎、颅脑等纳升级显微注射。”

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安全高效动物手术造模全攻略

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下一期“沃的实验”之

“安全高效动物手术造模全攻略”

将给大家带来

颅脑损伤实验相关流程SOP

敬请期待！！！

教育部印发的《高等学校实验室安全规范》明确，高校实验室要建立健全安全分级分类管理体系，实验人员使用实验室要签订安全责任书或承诺书，使用重要危险源要先开展风险评估。

《规范》提出，进入高校实验室学习、工作前，师生应先进行安全知识、安全技能和操作规范培训，掌握设备设施、防护用品正确使用的技能，考核合格并签订安全责任书或承诺书后，才能进入实验室操作实验。实验室应对进入人员进行操作工艺、设备使用、试剂或气体管理等标准操作规程培训和评估，并记录存档。实验室的物资和设施也要配置充足。此外，高校实验室应配备必要的安全防护设施和器材，建立能够保障实验人员安全与健康的工作环境。配备合适的消防设施，并定期开展使用训练。存在受到化学和生物伤害可能的区域，要配置应急喷淋和洗眼装置。重 点场所安装门禁和监控设施，并有专人管理。

《规范》还为高校使用重要危险源划定了“红线”。凡涉及重要危险源，即有毒有害化学品、危险气体、动物及病原微生物、辐射源及射线装置等的教学、科研项目，应经过风险评估后再开展实验活动。对存在重大安全隐患的项目，在未切实落实安全保障前，不得开展实验活动。同时，还要对重要危险源进行采购、运输、储存、使用、处置等全流程全周期管理，实验后产生的废物应统一收储并依法依规科学处置。涉及重要危险源的高校应设置有学分的实验室安全课程，将安全准入教育培训纳入培养环节。

出现实验室安全事故后，高校应立即启动应急预案，采取措施控制事态发展，同时在1小时内如实向所在地党委、政府及其相关部门和高校主管部门报告情况，并抄报教育部，不得迟报、谎报、瞒报和漏报，并根据事态发展变化及时续报。

实验室安全

从此刻做起

请仔细阅读

实验室防火安全

1. 实验室内必须存放一定数量的消防器材，消防器材必须放置在便于取用的明显位置，全体人员要爱护消防器材，学会使用，并且按要求定期检查更换。 

2. 实验室内存放的一切易燃、易爆物品（如，氢气、氮气、氧气等）必须与火源、电源保持一定距离，不要随意堆放。使用和储存易燃、易爆物品的实验室，严禁烟火。

3. 严禁在楼内走廊上堆放物品，保证消防通畅通。

实验室用电安全

1. 不乱接乱拉电线，不超负荷用电，不使用大功率电器；

2. 实验室内不应有裸露的电线头，严禁用金属丝代替保险丝；电源开关箱内不要堆放物品。

3. 电器设备和线路、插头插座应经常检查，保持完好状态，发现可能引起火花、短路、发热和绝缘破损、老化等情况必须通知电工进行修理。

实验室网络安全

1. 实验室要重视网络、信息安全工作，保护好自己的科研成果。 

2. 对所承担的保密科研项目或实验技术项目的分析测试数据和大型精密仪器设备图纸等信息、资料，最 好按保密等级存放，设专人管理，防止外泄。

3. 不浏览不安全网站，注意网络异常情况，及时向相关负责老师汇报。

实验室管理安全

1. 实验操作人员应严格落实实验操作规程；指导教师要切实加强对学生实验的指导，对具有危险性的实验要及时告知学生并采取相应的措施确保安全；

2. 校内各实验室要严格落实学校实验室危化品管理制度，各类易燃易爆气瓶要严格按照等相关规定进行管理，落实安全责任；

3. 实验室要做好劳动保护工作，针对高温、低温、辐射、病菌、噪声、毒性、激光、粉尘、超净等对人体有害的环境，要切实加强实验室环境的监管和劳动保护工作。

4. 冬季是火灾事故的高发期，要及时对自己所在实验室及办公区域开展实验室安全自查，重 点对各类实验用电热器具进行逐一排查。实验室及办公区域内严禁使用任何形式的电加热取暖设备。

近年来，国内高校实验室危险事故频发，安全状况不容忽视。尤其是校园实验室中存放各类化学药剂，是学校防火重 点场所，化学实验的火灾危险性相对较大。警钟敲响，我们必须将实验室安全重视起来！

下面这些都是每一个实验人员必须具备的素质，戳图了解↓↓↓

做实验要记住这九条！

进行实验必须严格依照规程操作，实验前一定要了解安全规程。

爆炸事故后如何自救？

爆炸事故，危害巨大。突遇爆炸发生时，大家如何正确自救与逃生？

各实验室一旦发生安全事故，

大家一定要保持镇定。

以下实验室安全事故应急处理注意事项：

发生事故时，要确定发生事故类型，及时拨打相应的报警电话，并立即向学校保卫处和实验室设备管理处报告： 

1.致电求助时应说明：

①事故地点；

②事故性质和严重程度；

③你的姓名、位置及联系电话。 

2.发生紧急事故时，应以下列优先次序处置：

①保护人身安全，即本人安全及他人安全；

②保护公共财产；

③保存学术资料。 

3.重要电话号码： 

①火警电话：119；

②匪警电话：110；

③医疗急救：120。

免责声明：所载内容、图片来源互联网，微信公众号等公开渠道，我们对文中观点保持中立，仅供参考，交流之目的。转载的稿件版权归原作者和机构所有，如有侵权，请联系我们删除。

以上原文转载自：应急管理部宣传教育中心

PCR原理傻傻弄不清楚？

PCR实验步骤看似简单却总是做不好？

不知道不同实验目的该选哪种PCR？

「全线赋能“沃”的实验」之实验方法实战教程

直播第六期为大家讲解

《PCR技术》

从技术原理、步骤详解、类型介绍到应用领域

让你一场直播课吃透PCR

直播时间

7月5日（周二）19：00

报名方式

识别上方二维码，立即免费报名

主题：PCR技术

• PCR的原理

• 实验步骤

• PCR的分类及实际应用

讲师：方晟

昆明理工大学硕士研究生，已发表SCI论文4篇，在载体构建、药物活性筛选、肿瘤模型构建、单细胞数据分析等方面有着丰富的经验，研究方向主要是抗肿瘤药物的kang癌机理和单细胞测序分析。

上期直播间互动问题

这次我们全部为小伙伴解答

Q1：如何去选择使用全脑缺血还是局部缺血模型呢？

A1：全脑缺血模型——二血管阻断法，模拟临床休克、心功能不全、脑血管严重狭窄或阻塞等血液低灌流引起的脑循环障碍；

全脑缺血模型——四血管阻断法，海马损伤明显，可显示记忆功能减退；

小鼠全脑缺血/再灌注模型——用于筛选脑活性保护成分或缺血性保护剂的研究；

局灶性脑缺血——栓塞法，适用于血栓形成过程研究及溶栓治疗观察，该方法可选材料多样，能较好模拟脑栓塞；

局灶性脑缺血——线栓法，急慢性局灶性缺血模型，模拟人类缺血性脑血管病的永jiu性及暂时性局灶性缺血的各种状态，较适合再灌注作用及相关药物疗效的探究；

局灶性脑缺血——光栓法，适合慢性脑缺血研究，抗血小板、抗血栓等药物及内皮细胞保护等方面的探究，该手术方法创伤小，动物可长时间存活，血栓形成过程与人类相似并且可选择皮层梗死位置；

局灶性脑缺血——开颅法，适用于脑缺血后长期神经功能缺损及介入治疗和康复的研究，此模型以大脑皮层、尾状核缺血最明显。

Q2：小鼠线栓造模选择什么规格的尼龙线？

A2：可以参考如下瑞沃德售卖的尼龙线规格

Q3：光栓造模光束的功率多少合适呢？

A3：

Q4：MCAO模型成功的判定标准有哪些?

A4：可使用激光散斑血流成像系统或激光多普勒血流仪进行生理学检测，血流变化率＞70%即可初步判断模型成功，同步配合神经行为评分及TTC染色综合判定。

Q5：如何提高模型的存活率呢，有什么建议呢？

A5：（1）麻醉对死亡率影响较大，推荐使用吸入麻醉；

（2）控制缺血时间，缺血时间过长将导致死亡率的上升；

（3）维持术中及术后体温，可维持正常生理体征，推荐使用体温维持仪；

（4）可使用抗生素抗感染。

Q6：大鼠内皮素脑内注射诱导的局灶性脑缺血模型的操作及坐标点位置？

A6：（1）剪去动物颅顶的毛发，正中线向左旁开 0.2 cm行纵向切口，长约 1.5 cm。剪开皮肤，分离皮下筋膜，暴露颅骨表面，将颅骨骨膜刮除，骨膜处理的好处在于能够更清楚的观察骨缝，便于定位和固定，并有助于止血；

（2）将假电极移至 Bregma 点上，然后移动假电极至所需位置，并作好标记；

（3）移开假电极，在标记处用牙科钻钻一直径 1 mm 左右的小孔，以钻透硬脑膜为度；

（4）在颅骨其他部位钻两颗眼镜螺丝，深度不能超过颅骨厚度。将假电极换成 26-gauge（6.5 号注射针）的套管，按上述定位方法，将套管通过小孔下至硬脑膜，并以此位置为起始，向腹侧深入到脑的梨状皮质内 MCA 背侧 1～2 mm。该位点的参数为 Bregma 前 0.2 mm，外侧 5.2 mm，硬脑膜下 6.1 mm，或 Bregma 后 0.3 mm，外侧 5.6 mm，硬脑膜下 7.0 mm、

（5）用牙科水泥将套管固定于螺丝和颅骨上，5%聚维酮碘消毒创面。

Q7：在实验过程中分离了颈总动脉之后发现颈外动脉和颈内动脉是一上一下的，如何分辨这两个呢？

A7：颈内动脉看似在外，它从血管分叉处延伸出一小段就有向下走的趋势，基本没有侧枝；颈外动脉看似在内，相比颈内动脉表浅，侧枝较多。

Q8：脑缺血造模之后一般可以做什么行为学呢？

A8：

Q9：TTC染色不成功有哪些原因呢？

A9：可能性较多，包括了手术、试剂、染色注意事项、反面、PBS配置等等。如遇到TTC染色不成功，可以从以上各个方面去依次排除原因。

Q10：激光散斑血流成像系统的成像范围有多大，时间大概需要多久呢？

A10：成像范围是5.7mm*7.5mm-22.5cm*30cm，成像时间为0.01s/帧，全分辨率采样速度100FPS。

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活动时间：2021年4月15日-4月30日

如何才能通过实验动物福利伦理审查？

吸入式麻醉有哪些需要注意的要点？

投稿被拒，竟是麻醉不符合动物福利？

动物麻醉气管插管不好操作？

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课程1：科学认识实验动物福利

• 定义及反对者的声音

• 动物福利和伦理

• 伦理审查

讲师：饶秀茸

拓普生物副总经理，毕业于广东医科大学，拥有十五年动物实验和动物房管理从业经验，专注研发与专利撰写，曾主持参与深圳市科创委、广东省重大科技专项项目等课题。

课程2：动物呼吸麻醉原理全解

• 吸入式麻醉

• 机械通气

• 应用案例

讲师：王晓雨

瑞沃德资深解决方案专家，毕业于深圳大学，在动物呼吸麻醉方面深耕多年，目前已服务全 球超500家单位，致力于在全 球推广更符合动物福利的呼吸麻醉方案。

课程3：气管插管实操

• 气管切开插管法

• 经口插管法

• 吸入式麻醉实操

上期直播间互动问题

这次我们全部为小伙伴解答

1. 如果我只想激活一种类型的神经元应该怎么办？

答：研究的目标脑区内有多种类型的神经元，只激活其中一种类型表明需要实现细胞类型特异性刺激，几类刺激脑方法中只有光遗传刺激能够满足，通过特异性病毒载体，将光敏蛋白转染到某一类型细胞上，从而实现细胞类型特异性刺激。

2. 我埋的刺激电极总是会掉该怎么弄？

答：可以在埋植电极的同时，在颅骨附近先埋植两颗颅钉起固定作用。

3. 使用经颅电刺激能只激活一种类型的细胞吗？

答：经颅电刺激作用于一片刺激范围内的所有细胞，不能只激活一种细胞。

4. 感觉刺激中，为什么要选择40Hz的频率？

答：PPT解析的文献里研究的是AD小鼠，与认知相关。认知损伤的小鼠其Gamma频段的神经振荡也发生改变，40Hz属于典型Gamma频段，因此使用40Hz刺激诱发小鼠大脑Gamm频段的振荡。

5. 光遗传为什么给光就能激活或抑制神经元？

答：光遗传技术利用分子生物学、病毒生物学等手段，将外源光敏感蛋白基因导入活细胞中，在细胞膜结构上表达了光敏感通道蛋白；然后通过特定波长光的照射，控制细胞膜结构上的光敏感通道蛋白的激活与关闭；光敏感蛋白的激活和关闭可控制细胞膜上离子通道的打开与关闭，进而改变细胞膜电压的变化，如膜的去极化与超极化。当膜电压去极化超过一定阈值时就会诱发神经元产生可传导的电信号，即神经元的激活；相反，当膜电压超极化到一定水平时，就会抑制神经元动作电位的产生，即神经元的抑制。

6. 在脑刺激的过程中，能够同时进行脑电采集吗?

答：这需要看是哪种脑刺激方法。经颅电刺激和深部脑刺激不建议同时记录电信号，会存在干扰。光遗传刺激能够同时进行脑刺激和脑电采集，光遗传通过光进行刺激，而不是电刺激，因此不存在干扰。

7. 光遗传的刺激参数如何选择呢？

答：光遗传实验的参数有频率，脉宽，功率等。光遗传刺激的频率根据不同的实验需求而有所不同，具体情况可参考已发表的文献进行选择。刺激时不要超过通道蛋白的响应频率，不然容易出现脱敏效应。脉宽与占空比相关，在频率固定的情况下，可通过提高脉冲宽度从而提高占空比。光功率强度的选择与对应的通道蛋白有关，激活不同的光敏蛋白有不同的光功率要求。

8. 脑机接口读取到写入的闭环时间限度要少于多少呢？

答：依据任务而异，不同的任务类型对时间的要求不同。例如在常见的字符输入任务中，对时间要求不严格，延迟也没关系。

9. 无创脑机接口的外部噪音影响会不会很大？

答：无创式脑机接口容易收到外界噪音的影响，针对实验过程涉及到的外部环境、采集硬件及软件算法都需要特别注意，需要做一定程度的降噪处理。使用的电极也会对信号的噪音有一定影响，一般湿电极信号质量优于干式电极装置记录的信号质量。实验被试人员也需要注意采集期间尽量不要产生任务需求之外的移动。

10. 全植入式的电极深度在动物模型上有没有限制？

答：一般来说没有限制，但是在实际操作过程中需要考虑具体的实验对象。植入的区域多是皮层，处于脑部相对靠外的位置，不会特别深，植入过程中注意避开血管的位置。植入区域的深度多和使用的电极类型相关，例如犹他阵列电极只适合于进行大脑皮层记录。意识活动产生的脑区（NCC）很多位于丘脑等深部脑区，目前技术无法达到。

11. 全植入式电极植入获取有效数据的时间大概多久，信号衰减的主要原因有哪些呢？

答：一般良好的手术植入操作能维持半年以上的信号采集，也有一年以上还能继续采集信号的。信号衰减的原因多是植入的电极随着时间的延长，逐渐被类似“疤痕组织”的细胞所包裹而失效，或者是电极老化脱落。

12. 无创式、半植入式以及全植入式这3种不同方法对于完成闭环任务是否有时间上的差异呢？

答：没有显著的差异。延迟时间的差异主要取决于信号的传输、处理、外部设备的响应等各个方面。一般来说，植入式的会比无创的信号时间精度更好，可以完成更多复杂精确的任务。

13. 非侵入式远程收集脑电用什么技术呢？

答：一般是将普通有线的方式更换为蓝牙或者WiFi都可以。

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全共线多功能超快光谱仪BIGFOOT

MONSTR Sense Technologies是由密歇根大学研究人员成立的科研设备制造公司。该公司致力于研发为半导体研究应用而优化的超快光谱仪和显微镜，突破性的技术可将光学器件和射频电子器件耦合在一起，以稳健的方式测量具有干涉精度的光学信号，真正实现一套设备、一束激光、多种功能。

图1. 全共线多功能超快光谱仪BIGFOOT

全共线多功能超快光谱仪BIGFOOT不仅兼具共振和非共振超快光谱探测，还可以兼容瞬态吸收光谱（Transient absorption (TAS)）、相干拉曼光谱(Coherent Raman Spectroscopy (CRS))、多维相干光谱探测(Multidimensional Coherent Spectroscopy (MDCS))。开创性的全共线光路设计，使其可以与该公司研发的高精度激光扫描显微镜（NESSIE）联用，实现超高分辨超快光谱显微成像。全共线多功能超快光谱仪的开发也充分考虑了用户的使用体验，系统软件可自动调控参数，光路自动对齐、无需校正等特点都使得它简单易用。

全共线多功能超快光谱仪BIGFOOT主要技术参数：

若您对设备有任何问题，欢迎扫码咨询！

高精度激光扫描显微镜NESSIE

MONSTR Sense Technologies的高精度激光扫描显微镜NESSIE可用入射激光快速扫描样品，在几秒钟内就能获得高光谱图像。该设备可适配不同高度的样品台和低温光学恒温器，物镜高度最多可变化5英寸，大样品尺寸同样适用。NESSIE显微镜是具有独立功能，可以与几乎任何基于激光测量与高分辨率成像的设备集成在一起，也非常适合与该公司研发的全共线多功能超快光谱仪集成。

图2. 高精度激光扫描显微镜NESSIE

高精度激光扫描显微镜-NESSIE的输入信号为单个激光光束，输出信号为样品探测点收集的单个反向传播光束，这样的光路设计确保了反传播信号在扫描图像时不会相对于输入光束漂移，因而非常适用于激光的实验中的成像显微镜系统。

图3. 使用NESSIE在室温下测量的GaAs量子阱的图像。a） 用相机测量的白光图像。b） 用调谐到GaAs带隙的80MHz激光器（5mW激光输出）进行激光扫描线性反射率测量。c） 同时测量的激光扫描四波混频图像揭示了影响GaAs层的亚表面缺陷

若您对设备有任何问题，欢迎扫码咨询！

BIGFOOT+NESSIE应用案例：

01高精度激光扫描显微镜用于材料表征

美国密歇根大学课题组通过使用基于非线性四波混频（FWM）技术的多维相干光谱MDCS测量先进材料的非线性响应，利用激子退相和激子寿命来评估先进材料的质量。课题组使用通过化学气相沉积生长的WSe2单分子层作为一个典型的例子来证明这些功能。研究表明，提取材料参数，如FWM强度、去相时间、激发态寿命和暗/局部态分布，比目前普遍的技术，包括白光显微镜和线性微反射光谱学，可以更准确地评估样品的质量。在室温下实时使用超快非线性成像具有对先进材料和其他材料的快速原位样品表征的潜力。

图4.  (a)通过拟合时域单指数衰减得到的样本的去相时间图，在图(a)中用三角形标记的选定样本点处的FWM振幅去相曲线

【参考】Eric Martin, et al; Rapid multiplex ultrafast nonlinear microscopy for material characterization. Optics Express 30, 45008 (2022).

02二维材料中激子相互作用和耦合的成像研究

过渡金属二卤代化合物（TMDs）是量子信息科学和相关器件领域非常有潜力的材料。在TMD单分子层中，去相时间和非均匀性是任何量子信息应用的关键参数。在TMD异质结构中，耦合强度和层间激子寿命也是值得关注的参数。通常，TMD材料研究中的许多演示只能在样本上的特定点实现，这对应用的可拓展性提出了挑战。美国密歇根大学课题组使用了多维相干成像光谱（Multi-dimensional coherent spectroscopy, 简称MDCS），阐明了MoSe2单分子层的基础物理性质——包括去相、不均匀性和应变，并确定了量子信息的应用前景。此外，课题组将同样的技术应用于MoSe2/WSe2异质结构研究。尽管存在显著的应变和电介质环境变化，但相干和非相干耦合和层间激子寿命在整个样品中大多是稳健的。

图5. （a）hBN封装的MoSe2/WSe2异质结构的白光图像。（b）MoSe2/WSe2异质结构在图（a）中的标记的三个不同样本点处的低功率低温MDCS光谱。（c）图（b）中所示的四个峰值的FWM(Four-Wave Mixing)四波混频积分图。（d）MoSe2/WSe2异质结构上的MoSe2共振能量图。（e）MoSe2/WSe2异质结构的WSe2共振能量图。（f）所有采样点的MoSe2共振能量与WSe2共振能量

【参考】Eric Martin, et al; Imaging dynamic exciton interactions and coupling in transition metal dichalcogenides, J. Chem. Phys. 156, 214704 (2022)

03掺杂MoSe2单层中吸引和排斥极化子的量子动力学研究

当可移动的杂质被引入并耦合到费米海时，就形成了被称为费米极化子的新准粒子。费米极化子问题有两个有趣但截然不同的机制：(i)吸引极化子（AP）分支与配对现象有关，跨越从BCS超流到分子的玻色-爱因斯坦凝聚；（ii）排斥分支（RP），这是斯通纳流动铁磁性的物理基础。二维系统中的费米极化子的研究中，许多关于其性质的问题和争论仍然存在。美国德克萨斯大学奥斯汀分校李晓勤教授课题组使用了Monstr Sense公司的全共线多功能超快光谱仪BIGFOOT研究了掺杂的MoSe2单分子层。课题组发现观测到的AP-RP能量分裂和吸引极化子的量子动力学与极化子理论的预测一致。随着掺杂密度的增加，吸引极化子的量子退相保持不变，表明准粒子稳定，而排斥极化子的退相率几乎呈二次增长。费米极化子的动力学研究对于理解导致其形成的配对和磁不稳定性至关重要。

图6. 单层MoSe2在不同栅极电压下的单量子重相位振幅谱

【参考】Di HUANG, et al; Quantum Dynamics of Attractive and Repulsive Polarons in a Doped MoSe2 Monolayer, PHYSICAL REVIEW X 13, 011029 (2023)

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作为一线的科研人，往往都要做动物实验，有时高分科研paper也离不开动物实验的支撑。你是否还在为动物实验手术操作而犯愁：

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