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涵盖实验基础知识和必备经验总结的

“沃的实验”栏目

全新策划

安全高效动物手术造模全攻略

正式推出啦！！！

全系列内容涵盖5大实验流程图解

数十个动物手术实验流程（SOP）

多角度全方位帮大家解决

各类动物实验操作过程中的细节问题

第一期就在今天

为大家奉上【麻醉定位手术全攻略】

涵盖麻醉定位手术流程图解

及完整版《麻醉定位手术标准操作流程指引》

快来点击下载吧！

您还可以打印贴在墙上以便随时查看

下次做麻醉定位手术不要再走弯路咯~~

∨

下一期“沃的实验”之

“安全高效动物手术造模全攻略”

将给大家带来

颅脑损伤实验相关流程SOP

敬请期待！！！

上一期《神经系统研究手术造模手册大全》发布以来广受一线科研工作者的好评，现在“沃”的实验第二弹《呼吸系统研究手术造模手册大全》终于新鲜出炉啦！

实验进展如何？

实验数据有了吗？

动物模型构建没人教？

换课题之后对动物模型构建不了解？

辛辛苦苦建立的动物模型

剔除掉了三分之一甚至一大半？

动物模型构建后该如何评估？

别着急，我们帮你准备了

助你开启实验第 一步

识别下方二维码立刻免 费 领取↓↓

这本手册大全包含什么？

01.神经环路相关研究常用的手术操作

你想要的脑立体定位病毒注射实验、套管埋植实验、光遗传光纤埋植实验、微透析探针埋植实验、在体电生理电极埋植实验等统统都有。实验步骤如材料和试剂、设备、操作流程全都包含。
 

02.神经系统疾病动物造模和评估方法

AD、PD、PTSD、抑郁症、自闭症、颅脑损伤、脊髓损伤、视神经损伤、疼痛等疾病造模与评估方法全部都有。

该动物手术造模大全囊括了神经科学领域最常使用的动物实验操作技术以及动物模型构建的方法，具体内容包括相关疾病的研究背景、模型构建的操作和评估方法以及参考文献，为您提供规范的实验操作流程和更多的模型选择，提高实验的成功率和可重复性，助您实验顺利开展。

不要998，也不要98

统统都不要！！

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HELLO 

2022

时光翻阅着四季的往事

转眼间，2021即将走向终章

在这辞旧迎新的月份里

我们为你准备了一份礼物

要知道，一本有温度的台历

可以让你，与时间坦然相处

也可以让你在忙碌之余

不至于忘记了重要的日子

和2021道一声再见

和2022说一句你好

不如，就从这本台历开始

内页展示

翻开内页，每个月份都是精心配置的图文，诚意满满，伴你走过春夏秋冬。重要的日子做了特殊标记，同时在底部设置留白，可以根据你的需要做记录，暖心又实用。

领取方式

有意向的小伙伴，请关注公众号并扫描下方二维码进入申领表，按照提示填写个人信息，即可免 费领取，数量有限，发完即止~

【温馨提示】

请务必详细填写您的收件地址

台历将于12月中旬陆续发出

各位小伙伴们，好久不见呀~~

春节长假在我们恋恋不舍的目光中绝尘而去！！

当时的“节后再说”有多爽

现在的开工就有多吐血

面对那一茬接一茬的实验

和一脸呆萌的自己，是不是很崩溃？

别担心~~

贴心的小沃已经准备好复工礼包

本次小沃为你准备了5本动物手术造模手册，无论你是想找神经系统、还是心血管疾病、亦或是肿瘤疾病造模实验方案，这里统统都有，一次性全面系统帮你解答手术实验疑难点。

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（悄悄告诉你，一次可以领取5本噢！）

01

神经系统研究

神经系统研究手术与造模大全囊括了神经科学领域最常使用的动物实验操作技术以及动物模型构建的方法，具体内容包括相关疾病的研究背景、模型构建的操作和评估方法以及参考文献，为您提供规范的实验操作流程和更多的模型选择，提高实验的成功率和可重复性，助您实验顺利开展。

02

心脑血管疾病研究

本手册详细介绍四大疾病模型，包括高血压、脑卒中、动脉粥样硬化、下肢缺血动物疾病模型，构建方法多达17种，助你开拓科研新思路！

03

肿瘤类疾病研究

这本手册涵盖7大肿瘤疾病模型和15种构建方法，概述了不同模型应用场景、优缺点、使用时应考虑的因素等内容，为您提供更多的动物模型参考和更适合的模型选择。

04

代谢类疾病研究

该手册涵盖常见的脂肪肝模型、1型和2型糖尿病模型、肥胖疾病模型的构建与评估方法；详细介绍了不同模型的应用场景、优缺点、使用时应考虑的因素等内容，助你快速找到合适的代谢类实验模型！

05

呼吸系统疾病研究

此手册涵盖哮喘、慢阻肺、急性肺损伤、肺动脉高压、肺纤维化等五大呼吸系统常见疾病的造模及评估方法；以及详实的实验步骤如材料和试剂、设备、操作流程等，为您提供规范完整的实验操作方法。

手册在手，造模我有

赶紧扫描上方二维码免fei领~

不知不觉

「“沃”的实验」之安全高效

动物手术造模全攻略栏目

已到尾声啦！

五大动物手术与造模解决方案

数十种动物造模实验SOP

都已悉数亮相

第一期麻醉定位造模实验

与精彩答题PK中奖活动

第二期创伤性颅脑损伤造模实验

与疑难点揭示

第三期动物麻醉造模实验

与动物福利之间博弈思考

第四期动物给药造模实验中

不同动物给药实验分类展示

第五期线栓法

构建局灶性脑缺血模型实验详解

五期满满详细内容干货

是宝们顺利推进实验的有效利器

五期步步流程清晰讲解

是小沃与宝们的珍贵实操经历

小沃由衷希望我的科研宝们

能够在山重水复疑无路的时候

轻而易举地寻找到

柳暗花明又一村的灯塔

在衣带渐宽终不悔的奋斗中

最终收获

那人就在灯火阑珊处的

释然与宽慰

忙于实验的科研宝们

可能还来不及

将过往5期干货一一收藏

贴心的小沃

今天就为你们全部打包

满满实验干货尽数奉上

让宝们动物造模实验再也不犯难

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虽然我们的

安全高效

动物手术造模全攻略栏目结束啦

但是我们「“沃”的实验」

一直在线，接下来

大动物神经系统疾病手术造模protocol

将重磅推出，敬请期待

科研宝们可以随时

关注我们，实时获取

专业的科研实验基础知识和技能

科研实验经验总结

系统丰富的实验学习资料

如果还想获得更多其他实验信息

可在公众号后台留言

小沃将会收取宝们的问题和意见

适时为大家答疑解惑

我们不见不散

下次再见将更精彩

光纤记录系统作为常用的研究动物神经元活动与行为关系的重要工具，对于研究特定神经环路在不同行为范式中的功能具有重要意义。本文将着重介绍光纤记录实验手术所需器材，手术步骤以及注意事项，助力实验数据准确性的提升。

实验设备和材料

异氟烷麻醉系统、立体定位仪、数码显微镜、电极拉制仪、微量注射泵、剃毛工具、手术刀、眼科镊、眼科剪、棉签、碘伏、3%双氧水，AAV病毒、陶瓷插针、颅骨钻、钻头（0.8mm）、颅钉（M1.0xL2.0mm）、螺丝刀（45*1mm）、生理盐水、牙托粉水（义齿基托聚合物，自凝型）、红霉素眼膏、抗生素等。

术前准备

01

确定目标脑区坐标

确定目标脑区位点通常有两种策略：

• 通过使用立体定位图谱，寻找目标脑区具体位置，读取目标脑区深度，矢状、冠状坐标，最终确定目标脑区的三维坐标。

• 通过阅读参考文献，获取方法中涉及目标脑区的坐标。文献中坐标常用标注：AP：anteroposterior，前囟前后；ML：mediolateral，中缝左右；DV：dorsoventral，颅骨（硬脑膜）平面向下。

*需要注意：文献中坐标选取的Z轴参考点：包括Bregma点、脑膜表面、颅骨表面的Z轴读值

02

器具消毒、仪器检查

实验前使用酒精擦拭手术器械，检查各种实验耗材是否准备完整。检查立体定位仪，确保定位仪刻度置零，可以正常工作。

03

实验动物准备

选取实验动物检查其健康状况。

（▲小鼠颅骨表面示意图）

动物手术

01

动物麻醉及固定

1. 小鼠称重。

2. 在异氟烷诱导盒中麻醉小鼠（4％，1 L / min）。

3. 将小鼠嘴部放在麻醉面罩中。

4. 将小鼠门齿扣在适配器齿棒上，并使用适配器将小鼠固定于立体定位仪上，异氟烷浓度调整为0.5-1%。

5. 麻醉深度可通过对脚趾捏合无反应（监测脚趾捏合反应）来确认，手术期间每20min一次。

6. 剃掉从眼睛到耳朵后面的毛发。

7. 用棉签蘸少量碘伏清洁头部。

8. 在头皮表面下注入0.1 ml利多卡因，以提供局部镇痛作用。

9. 保护眼睛避光：涂抹红霉素眼膏。

（▲手术前小鼠）

02

暴露颅骨

1. 从前到后（眼睛之间到颅骨后部）做切口。

2. 用蘸有生理盐水的棉签擦拭切口。

3. 找到并标记Bregma（前囟点）位置。

4. 确保头骨干净（没有血液，毛皮或组织）并且干燥（使用干燥的棉签吸生理盐水或血液）。

5. 将连接好玻璃电极的微量注射泵夹持到定位仪上。

6. 调节颅骨水平：玻璃电极针尖接触Bregma点，将该点设定为原点，而后测量Bregma点左右两侧旁开2.3mm处颅骨的高度差，小于0.03mm则认为左右颅骨水平，大于0.03mm则需要调节耳杆的高度来调整水平，前后方向测量Bregma点和Lambda点的高度差，也需小于0.03mm，若大于0.03mm则上下调整鼻夹的高度（注意：移动颅骨后需要重新定Bregma点）。

7. 标记目标位置。

8. 在目标标记点处用颅钻进行开颅并挑开硬脑膜。此外还需钻两个预留孔，用于埋植颅钉。如果钻孔过程发生出血，使用棉签清洁血液，然后使用一块可吸收的海绵来止血。

9. 用盐水浸湿的海绵覆盖开颅部位。

03

病毒注射

1. 从冰箱中取出病毒。

2. 设置微量注射泵参数（例如吸取体积400nL，速度为800nL/min，模式调为吸入Withdraw）吸取病毒，使其尖端接触Bregma点并设定原点。

3. 取走开颅部位湿海绵。

4. 将玻璃电极针移动至目标位点上方，然后下针至目标位点（下针过程保持匀速缓慢），设置注射泵参数（体积400nL，速度40nL/min，模式调为泵出Infuse）,开始注射病毒。

5. 注射完成后静置10min，10min后将微量注射器抬起。

6. 瑞沃德R480玻璃微电极注射泵搭配立体定位仪，对脑部可精准进行病毒或示踪剂注射。

04

埋植颅钉

颅钉（小螺丝）植入深度约0.5mm左右，避免过深压迫大脑，过浅固定不牢固。固定颅钉的预留孔需离光纤埋植的位置远一些，防止颅钉埋好之后留下的空间太小，导致光纤不好埋植。颅骨钻孔完成后，还需清理颅骨表面的颅骨碎屑，并用生理盐水清洗，保证颅骨表面清晰干净。

（▲颅钉植入）

05

陶瓷插针植入

1. 在病毒注射后，从脑立体定位仪上取下注射泵。

2. 将光纤插针用夹持器固定到脑立体定位仪上。

3. 固定光纤之后需要用光纤尖部接触Bregma点，重新移动至目标位点上方（光纤插针应位于钻头产生的窗口上方）。

4. 将光纤插针下降到适当的DV坐标，高于病毒注射位置200-300μm。

5. 用牙科水泥固定光纤。注意：牙科水泥轻轻涂抹在光纤纤维的底部周围。

6. 待水泥完全凝固后，小鼠转移至饲养笼中单独饲养，术后监测健康情况。

光纤记录实验

待2-3周钙荧光病毒表达后，将光纤与小鼠头部陶瓷插针连接，使用光纤记录系统采集动物在行为学实验中大脑的钙荧光信号，通过分析软件处理钙荧光信号数据，并结合行为学视频对动物的行为进行分析。

（▲光纤记录实验）

光纤记录实验手术中所需器材、手术步骤和注意事项已全部讲解，后续我们还有更多光纤记录干货，请持续关注哦~

R820三色多通道光纤记录系统

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全自动氮吹仪操作流程
1）打开全自动氮气吹扫仪气钢瓶气阀开关，打开分压表开关，调节分压至0.30~0.40mpa之间，使气体进入浓缩仪内部；
2）打开全自动氮气吹扫仪电源，进入待机状态，按任意键跳出待机状态。这时听到急促的蜂鸣声（约1秒/次），此为水浴箱中水浴不足报警提示，打开仪器上盖，从大理石操作台的样品瓶插入口处加水至缓慢的蜂鸣（约2秒/次），缓慢蜂鸣为仪器上盖开关检测器的报警音，在盖好仪器上盖后即停止蜂鸣；控制
3）通过控制模式切换键模式选择控制模式，浓缩仪可提供三种控制模式：定时模式、定容/定时模式、手动模式：
A.定时模式：指示灯定时 将亮起，当工作时间达到预设的工作时间时，所有通道的吹起都将停止 定容
B.定容/定时模式：指示灯定时 将同时亮起；这相当于带有定时功能的“定容”模式------除有“定容”模式的功能外，浓缩仪还将会在达到预设工作时长时停止工作（此模式下，仪器默认预设工作时间2000S，用户可根据需要在0~9999范围内任意设定），这一模式适合不同样品的浓缩工作；在此模式下，不同工作通道到达定容终点时均会独自蜂鸣报警提示;
C.手动模式：指示灯“定容”和“定时”都将熄灭，这一模式下，需手动停止每一通道的工作；
4）设定压力，温度和时间等参数：
设定A.按下设定/工作切换键工作指示灯设置 将亮起，即进入参数设置状态；若5秒内没有任何按键操作即自动记忆实时参数并退出参数设置状态；用户也可再按一次切换键保存设置的参数并退出参数设置状态；
B.按参数显示键设置选择数码窗口中显示的参数类型，如显示的数值为压力值，指示等压力将亮起，其他同理；
C.按上下键 ▲ ▼ 修改参数值；
D.注意各种数值的单位和上限；
压力：001~010档，Z高压力0.10mpa，每档压力增量为0.10mps
温度：室温~95±0.5℃；
时间：0~9999s
5）档控制模式和参数都设置好后，再次确认气源阀门已打开，气体已进入浓缩仪内部；
6）在大理石操作台上插入样品瓶，注意确保样品瓶已插入到位（样品瓶底部被掏住的手感），没有悬空；
7）若需处理的样品数少于12个，请用仪器配件中的密封盖把大理石操作台上闲置的样品瓶插入口封好；若使用50ml的瓶子，需要在大理石操作台的样品瓶插入口上套上过渡套，以降低排风系统的压力，并更好地固定瓶子；
8）闭合独立控制全自动氮气吹扫仪上盖，这时缓慢蜂鸣停止，仪器进入工作状态。打开样品瓶对应的通道开关（见图2.6，数字1~12的按键即为通道开关按键）浓缩仪即开始工作；
9）如果工作状态为非手动模式，浓缩仪在所设定的工作完成后，会有蜂鸣报警提示；
●定时模式下，结束时，蜂鸣报警提示；
●定容/定时模式下，各工作通道浓缩至终点体积时，蜂鸣报警提示；当Z后仪一路工作通道浓缩至终点体积时，仪器长鸣（无间隔蜂鸣3分钟）；
10）全自动氮气吹扫仪工作完毕后，按待机键，重新进入待机状态。注意：考虑到用户刚做完你试验后，有部分水蒸气和有机溶剂残留，排风系统任然处于运作状态。

随着现在科技和产业的发展，以色谱仪为代表的个中复杂的仪器，也开始在仪器界迅速的发展着，那么今天我们所说的就是液相色谱仪，液相色谱仪也是人们在生活中会经常用到的，我们赶紧来看看液相色谱仪的操作流程吧！
在操作的时候我们首先要对流动相进行过滤，然后我们根据不同的需要来进行滤膜的选择，一般为有机系和水系，通常我们用的孔径是0.20um和0.45um；然后我们要对抽滤后的流动相进行超声脱气，时间大概控制在10-20分钟为比较合适的；在正常的情况下我们会的液相色谱仪首先要用甲醇来进行清洁，大概在10-20分钟，然后再进入测试，要是流动相为缓冲试剂，那么我们需要进行第二次蒸水清洗10-20分钟，直到色谱柱中的有机相冲锋为止；流动相在冲洗20-30分钟之后，仪器就可以稳定，最重要的就是仪器基线走后，就可以进行测试了；同样的两针指标，把他们的结果相比较，比值在0.98-1.02之间以后，我们就可以正式进行样品的测试了；在样品测试结束之后，就要进行色谱仪以及色谱柱的清洗和维护，要是流动相为缓冲试剂的话，那么一样也要用重蒸水清洗10-20分钟，然后才可以进行有机相的保护，不然的话会损伤色谱柱；在关机的时候，应该先关闭计算机，在关闭液相色谱仪；ZH我们需要填写登记本，然后由负责人进行签字。

1.准备待喷雾的物料需要经过均质机乳化均质并过80目筛网（以免堵塞雾化器及管道），置于不锈钢桶中备用。另外接一桶自来水用于清洗雾化器及喷雾腔体。安装好蠕动泵的料管，夹牢，进料口前头用8个大小的螺母套牢（防止飘起来吸入空气），放入料桶中备用。
2.检查连接除湿机和集料桶的管道上面的蝶阀是否都处于打开状态，喷雾塔上的风门应处于全开状态，喷雾舱门应关牢，各连接管道的快装卡箍应安装正确，空气压缩机的出气阀应打开，排空阀关掉，空压管连接良好。
3.开机工作程序按下除湿机的开关，闭合喷雾干燥机的空继开关，调整空压机出气压力为0.25Mpa（拔出黑色按钮调整好后按下即可）， 顺时针旋转红色急停按钮，打开液晶操作画面，等待15S自动进入操作界面，设置工艺参数：设定温度180℃，下限温度为180℃，上限温度192℃，温度介于设定和下限之间，加热打开时间10s，加热关闭时间3s，振击器设置振动2S，停止2-10S（参考物料在壁上的堆积情况），若喷水等固形物含量很低的物质时应该把设定温度调整至185-190℃，下限改为185℃。
开机先打开引风机、除湿机、电加热开关（电加热开自动按钮，否则温度到了设定温度不会跳掉还会继续加热），对系统进行预热，照明灯可以常开，待监测进风温度到达设定温度，出风温度达到80-90度之间并且温度比较稳定时，打开雾化器30S，然后再打开界面中的蠕动泵开关，调整转速至12-18之间（根据物料调节），前期蠕动泵开慢点，切忌不要料管露空引入空气（雾化器温度高，缺乏新料冷却会使少量料液迅速干燥，堵塞雾化器），雾化器上方向箭头指向“→”，在雾化器上按下Start键，开始蠕动上料。待物料进入雾化器开始喷雾时，打开振击器（双气锤），观察雾化情况以及出风温度，若出风温度高于90度，则可以缓慢调节蠕动泵转速（每次0.5-2），继续观察出风温度，看是否稳定，出风温度下降至86-88度稳定住既是正常喷雾流速（取决于物料粘稠度、固形物含量等因素），始终观察出风温度，调节物料流速（经验值喷水在17-18，辣椒水在32，鸡膏用1：2的水溶解后是28左右）。
4.关机程序 所有物料吸尽后立即把进料管头投入清洗水桶中，用水喷雾来清洗雾化器，调整蠕动泵转速至15左右（水无固形物，比较难喷干），5min后观察上料管路是否被自来水清洗干净，再运转2-3分钟直至雾化器清洗干净为止。关掉蠕动泵，打开泵上的夹子使得里面的水倒流回桶内。等3-5分钟，待雾化器喷完残余的水后，即可关闭雾化器，无雾出现的时候可以关闭电加热及振击器，等待自然冷却下来。进风温度到达150℃以下时可以打开舱门，用空压枪头对准里面有料堆积的地方吹下，注意各个死角，对准底部管道弯头处喷气使料通过旋风分离器得以回收，吹干净粉料后关掉舱门吹料1分钟后关掉引风机及除湿机。 关掉出料口蝶阀，取下集料器，倒出粉料装袋防潮。
5.清洗喷雾塔 拧松集料器右边官道上的快装卡箍，再拆掉喷雾塔底部的卡箍，即可把这节料管旋转至一边，喷雾塔底部放一大盆接水。开启雾化器及蠕动泵，进料软管放入清洗桶中吸水，按下Start键开始蠕动吸水，等开始喷雾后迅速调节转速至100，喷水清洗雾化器及内部舱壁3-5min。按操作流程，先关掉蠕动泵放掉料管中的水，2分钟后关闭雾化器，再按下急停键关机并关掉控制柜里的空继开关。打开舱门，接一水管冲洗内部舱壁不干净的地方，注意不要把水冲到顶部雾化器边上的孔内（防止水倒灌入加热器中），把内壁冲洗干净。
6.清洗周围配件 拆下旋风分离器连接的2截料管，出料口蝶阀、集料器、卡箍、硅胶垫片，全部清洗干净后控干水。清洗旋风分离器时，先拆除周边连接配件，然后yi定要关掉除湿机的出口蝶阀（以免水倒灌至除湿机内），用水管对准分离器入口处冲水，出料口用水盆接住水以免溅入除湿机中烧坏电机，多角度重复冲洗几次，直至流出的废水无色澄清为止，全部配件控干水干掉后装上管道。
注意事项：
1.拔掉空压机的出气管时应朝里压住接头上的蓝色垫片以松开卡子，然后拔出管子即可，安装时直接插入，卡子会自动缩回并卡牢。
2.蠕动泵上料管后端是食品级的无毒塑料，前端是硅胶材料，切不可使用空压管或其他有毒塑料管代替此上料管。
3.可以在无油空压机（出气量＞0.6m?/min，不可长时间运转）出气空压管上安装一个三通，或者直接另接一个空压管，装上枪头用于吹掉腔内壁上、雾化器上及底部回收管道里面的物料，检查各个死角。不可使用有油空压机，以免漏油至喷雾器中污染仪器及干燥物料。
4.含糖量高于1.5%的物料不适合喷雾（糖在腔内粘壁融化不干燥），淀粉、奶粉、麦芽糊精比较好喷雾，味精含量高的也不好喷雾。
5.每次更换喷雾物料时yi定要清洗管道、旋风分离机、雾化器、收集器并烘干后才能更换物料，确保物料不要串味。
6.操作界面上蠕动泵显示按钮右边的50HZ频率不要调动，它对应的不是蠕动泵而是其他类型的泵。
7.产品含水量高是因为排风温度太低、进料量太快，需要适当减少进料量，以提高排风温度。
8.塔顶有积粉，是因为热风分配器没调整好，可以调整直形导风板的位置和角度。
9.干燥室内壁有粘着湿粉现象，可能由于开始喷雾时进料量调节过大，不能充分蒸发，喷雾前干燥室加热不足，料液供给不稳定，可以适当减少进料量、提高进风温度、保证物料有较好的流动性，去除原液中的泡沫。
10.蒸发量降低，是因为整个系统的空气量减少、热风进口温度偏低、设备漏风，可以检查风机转速是否正常、检查风机蝶阀位置是否正确、检查空气过滤器和加热器管道是否堵塞、检查电压是否正常、检查电加热器是否正常、检查联接部位的密封性、检查蒸汽压力是否降低。
11.产品杂质过多，是因为空气过滤效果差、积粉混入成品中、料液纯度不高、设备清洗不够，可以更换或清洗过滤器、喷雾前过滤料液、清洗设备。
12.产品粉粒太细，是因为料液含固量太低、喷雾盘转速太快、进料量太小，可以提高料液含固量、如喷头电机可以调速，则降低雾化盘速度，提高进料量，相应提高进风温度，保持排风温度不变。
13.产品得率太低，是因为旋风分离器效率低，粉末粒度小，根据需要增加二级除尘，可以检查旋风分离器是否由于敲击碰撞而变形、提高旋风分离器出料口的气密性，检查内壁及出料口是否积料堵塞现象、增加二级除尘。
14.离心喷头运转时有振动，是因为喷雾盘有残存物质、轴产生变形，可以拆下雾化盘清洗，或者调换变形轴。
小型喷雾干燥机可分低温喷雾干燥机，实验室小型喷雾干燥机
自动清洗清扫功能喷雾干燥机，高浓度有机溶剂喷雾干燥机，大功率喷雾干燥机，中
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