仪器网（yiqi.com）欢迎您！

实验进展如何？

实验数据有了吗？

动物模型构建没人教？

换课题之后对动物模型构建不了解？

辛辛苦苦建立的动物模型

剔除掉了三分之一甚至一大半？

动物模型构建后该如何评估？

别着急，我们帮你准备了

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这本手册大全包含什么？

01.神经环路相关研究常用的手术操作

你想要的脑立体定位病毒注射实验、套管埋植实验、光遗传光纤埋植实验、微透析探针埋植实验、在体电生理电极埋植实验等统统都有。实验步骤如材料和试剂、设备、操作流程全都包含。
 

02.神经系统疾病动物造模和评估方法

AD、PD、PTSD、抑郁症、自闭症、颅脑损伤、脊髓损伤、视神经损伤、疼痛等疾病造模与评估方法全部都有。

该动物手术造模大全囊括了神经科学领域最常使用的动物实验操作技术以及动物模型构建的方法，具体内容包括相关疾病的研究背景、模型构建的操作和评估方法以及参考文献，为您提供规范的实验操作流程和更多的模型选择，提高实验的成功率和可重复性，助您实验顺利开展。

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年末，科研人破防瞬间

在实验室待到天荒地老

做起造模实验还是手忙脚乱

即使查阅文献了也不知道怎么入手

年终科研成果总结，实在拿不出手呀

别担心，我们精心为您带来了

代谢类疾病研究手术与造模手册大全

3大疾病模型&超20种模型构建方法

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手册主要内容都有什么？

01

脂肪肝疾病模型

最常见的脂肪肝模型这里都有介绍，包括对饮食诱导模型、化学诱导模型、转基因模型都有详细讲解。

02

糖尿病疾病模型

随着可用的动物模型数量增加，自己跟不上前沿研究怎么办？本节阐明当下热门的1型和2型糖尿病实验动物模型以及优缺点，并详细说明了在使用时应考虑的因素。

03

肥胖疾病模型

带你聚焦高脂膳食型肥胖大鼠模型、下丘脑内侧核损伤（VMH）型动物肥胖模型、双侧卵巢切除(去势术)肥胖模型、大量维生素 D 致动物肥胖模型、转基因法构建肥胖动物模型等5大模型，助你开拓科研新思路，顺利完成科研成果！

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上一期《神经系统研究手术造模手册大全》发布以来广受一线科研工作者的好评，现在“沃”的实验第二弹《呼吸系统研究手术造模手册大全》终于新鲜出炉啦！

各位小伙伴们，好久不见呀~~

春节长假在我们恋恋不舍的目光中绝尘而去！！

当时的“节后再说”有多爽

现在的开工就有多吐血

面对那一茬接一茬的实验

和一脸呆萌的自己，是不是很崩溃？

别担心~~

贴心的小沃已经准备好复工礼包

本次小沃为你准备了5本动物手术造模手册，无论你是想找神经系统、还是心血管疾病、亦或是肿瘤疾病造模实验方案，这里统统都有，一次性全面系统帮你解答手术实验疑难点。

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（悄悄告诉你，一次可以领取5本噢！）

01

神经系统研究

神经系统研究手术与造模大全囊括了神经科学领域最常使用的动物实验操作技术以及动物模型构建的方法，具体内容包括相关疾病的研究背景、模型构建的操作和评估方法以及参考文献，为您提供规范的实验操作流程和更多的模型选择，提高实验的成功率和可重复性，助您实验顺利开展。

02

心脑血管疾病研究

本手册详细介绍四大疾病模型，包括高血压、脑卒中、动脉粥样硬化、下肢缺血动物疾病模型，构建方法多达17种，助你开拓科研新思路！

03

肿瘤类疾病研究

这本手册涵盖7大肿瘤疾病模型和15种构建方法，概述了不同模型应用场景、优缺点、使用时应考虑的因素等内容，为您提供更多的动物模型参考和更适合的模型选择。

04

代谢类疾病研究

该手册涵盖常见的脂肪肝模型、1型和2型糖尿病模型、肥胖疾病模型的构建与评估方法；详细介绍了不同模型的应用场景、优缺点、使用时应考虑的因素等内容，助你快速找到合适的代谢类实验模型！

05

呼吸系统疾病研究

此手册涵盖哮喘、慢阻肺、急性肺损伤、肺动脉高压、肺纤维化等五大呼吸系统常见疾病的造模及评估方法；以及详实的实验步骤如材料和试剂、设备、操作流程等，为您提供规范完整的实验操作方法。

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涵盖实验基础知识和必备经验总结的

“沃的实验”栏目

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安全高效动物手术造模全攻略

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全系列内容涵盖5大实验流程图解

数十个动物手术实验流程（SOP）

多角度全方位帮大家解决

各类动物实验操作过程中的细节问题

第一期就在今天

为大家奉上【麻醉定位手术全攻略】

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下次做麻醉定位手术不要再走弯路咯~~

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下一期“沃的实验”之

“安全高效动物手术造模全攻略”

将给大家带来

颅脑损伤实验相关流程SOP

敬请期待！！！

不知不觉

「“沃”的实验」之安全高效

动物手术造模全攻略栏目

已到尾声啦！

五大动物手术与造模解决方案

数十种动物造模实验SOP

都已悉数亮相

第一期麻醉定位造模实验

与精彩答题PK中奖活动

第二期创伤性颅脑损伤造模实验

与疑难点揭示

第三期动物麻醉造模实验

与动物福利之间博弈思考

第四期动物给药造模实验中

不同动物给药实验分类展示

第五期线栓法

构建局灶性脑缺血模型实验详解

五期满满详细内容干货

是宝们顺利推进实验的有效利器

五期步步流程清晰讲解

是小沃与宝们的珍贵实操经历

小沃由衷希望我的科研宝们

能够在山重水复疑无路的时候

轻而易举地寻找到

柳暗花明又一村的灯塔

在衣带渐宽终不悔的奋斗中

最终收获

那人就在灯火阑珊处的

释然与宽慰

忙于实验的科研宝们

可能还来不及

将过往5期干货一一收藏

贴心的小沃

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满满实验干货尽数奉上

让宝们动物造模实验再也不犯难

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虽然我们的

安全高效

动物手术造模全攻略栏目结束啦

但是我们「“沃”的实验」

一直在线，接下来

大动物神经系统疾病手术造模protocol

将重磅推出，敬请期待

科研宝们可以随时

关注我们，实时获取

专业的科研实验基础知识和技能

科研实验经验总结

系统丰富的实验学习资料

如果还想获得更多其他实验信息

可在公众号后台留言

小沃将会收取宝们的问题和意见

适时为大家答疑解惑

我们不见不散

下次再见将更精彩

抑郁动物模型的造模方法找不对？

实验动物不会选择？

不知道有哪些常用的行为学检测方法？

「全线赋能“沃”的实验」之实验方法实战教程

直播第二期将为大家带来

《抑郁动物模型研究方法》

两位老师为大家详细讲解

造模方法、实验动物选择、行为学检测方法

涵盖常用模型和高频技巧，更有互动答疑

快速帮你摸清抑郁动物模型的构建

直播时间

4月26日（周二）19：00

报名方式

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直播全程免费，群内专业答疑

上期不少小伙伴在直播间

提出互动问题，这次我们全部讲解

一、实验操作类

1.注射针进入目标脑区后，可以直接进行注射吗？

“确定针头到达目标脑区后，建议停针1min，平衡气压，然后就可以开启注射程序了。”

2.颅钉植入的位置如何选择？

“颅钉的植入位置应该尽量避免血管集中的区域及注射位点。”

3.颅骨调平的标准要求是？

“前囟和后囟高度差，Bregma左右高度差均在±0.03mm以内，即可认为与颅骨水平。”

4.小鼠脑部病毒注射实验需要挑开硬脑膜吗？

“使用较细的玻璃电极注射的时候需要挑开硬脑膜，因为电极尖端较为脆弱，而硬脑膜具有弹性阻力，可能会把尖端弄断。同样道理，在植入多通道电极的时，也需要挑开硬脑膜，防止电极尖端受损。”

5.脑部病毒注射实验中，进针速度需要控制在？

“进针应保持匀速缓慢，推荐将全自动脑立体定位仪的速度设置在0.2-0.5mm/s。”

6.使用脑立体定位仪固定小鼠，耳杆固定位置是？

“一侧耳杆移至适当位置旋紧固定，用手轻柔拖住老鼠头部，将头部同侧枕骨大孔位置对准耳杆尖端，缓慢推动另一侧耳杆至枕骨大孔处。”

7.如何判断病毒正常注射，没有产生针头堵塞等现象？

“在使用注射针连接玻璃电极进行病毒注射时，可以先用空针吸取足够的矿物油起到密封作用，再吸取一定体积的病毒，矿物油的重力作用可以保证病毒注射更为流畅。另外矿物油与病毒之间因为密度不同会出现明显的液面分界线，我们可以用记号笔标记分界线的位置，就可以很直观观察到注射过程中是否存在针头阻塞现象了。”

二、实验耗材类

1.脑立体定位手术中，如何保护小鼠眼睛不受光源伤害？

“固定小鼠之后，可以在小鼠眼周涂抹红霉素眼膏，起到一定的闭光和防感染作用。”

2.光遗传与光纤记录使用的陶瓷插针有区别吗？

“目前常见的陶瓷插针都是使用的石英材质，自发荧光较低，所以可用于光遗传和光纤记录实验。但是光纤记录实验更推荐使用黑色陶瓷插针，可以更好的避免环境光对于信号的干扰。”

3.固定的颅钉需要使用多大尺寸？什么材质？

“小鼠用M1.0，大鼠用M1.4，M1.2介于两者之间，成年小鼠与幼大鼠可用，一般是不锈钢材质。”

4.颅钉的作用是？

“如同盖房子使用的钢筋一样，和牙科水泥一起可以让植入的陶瓷插针等更加牢固。”

三、实验技巧类

1.左右颅骨调平需要旁开多少距离？

“依据个人习惯而定，一般推荐旁开2mm左右（2-2.5mm均可）。”

2.使用牙科水泥固定，是否还需要缝合头皮组织？

“如果备皮环节直接将注射位点上方的头皮直接剪掉，那么直接通过牙科水泥就可以覆盖头部整体创面，不需要在缝合头皮。如果是剪开头皮进行的注射，或者牙科水泥固定的范围较小，可以将周边的头皮进行缝合。”

3．病毒注射完成后，植入陶瓷插针需要重新进行颅骨调平吗？

“在实验中一般不需要二次调平，使用前囟点作为参考0点，那么整体操作过程中就始终保持同一个参考点即可。如果发现更换夹持器或者更换实验器材，导致坐标有较大差别，可能是动物固定不够牢固，需要重新检查固定。”

4.光纤记录实验过程中需要全程避光吗？

“当然不建议强光下进行实验，使用黑色陶瓷插针及黑色陶瓷套管，将动物头部的牙科水泥涂黑即可很好的避免环境光对于实验信号的干扰。同时实验环境前后需要保持一致，避免环境变化导致的数据对比问题。”

5.怎样才能让数据结果更加平滑？

“数据处理过程中可以选择平滑处理功能，同时在数据采集过程中，可以改变相应的参数（如帧率，曝光等）可以让数据呈现的更加好看。”

6.光纤记录中进行光纤漂白的目的是？

“光纤具有一定的自发荧光，这种内部的自发荧光会掩盖一部分微弱的信号。常用光纤根据材质分为普通光纤和低自发荧光光纤，普通光纤进行光纤记录实验前必须进行漂白。”

7.本底信号波动的产生原因？

“实验环境的不稳定（温度，光线等），动物状态都有可能导致本底信号波动。使用黑色陶瓷插针及黑色陶瓷套管，将动物头部的牙科水泥涂黑可以很好的避免环境光对于实验信号的干扰。”

8.神经递质探针信号与钙信号有什么差别？

“常见钙信号会呈现出快速上升和缓慢下降的特征峰形，而递质类信号因为信号周期较长，上升或下降都可能需要较长的时间，所以信号较为平缓。但是不同脑区及种类细胞的钙信号差别较大，具体实验会有不同。（参考下面图片——经典钙信号状态）。”

四、实验仪器类

1.光纤记录数据分析软件需要单独安装吗？

“不需要，R820光纤记录软件包含数据采集功能和数据分析功能，通过一个软件即可实现采集和分析，简化实验步骤，提高实验效率。”

2.夹持玻璃电极的注射仪器是？

“R480玻璃微电极注射泵，可用于细胞、胚胎、颅脑等纳升级显微注射。”

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在做基础研究时加入动物实验不仅会使研究工作更完善，也会提高投稿的命中率，但是想把实验做成功却不是件容易的事儿，因为在动物造模中总遇到各种难题：

• 搞不清动物建模标准化的流程，做起实验磕磕绊绊

• 造模需要注意的细节多，反复摸索十几遍才造模成功

• 明明按照文献中的实验方法造模，却还老是不成功

“沃”的实验

全网最全的生命科学研究线上学习平台

第二期内容：

常见疾病动物模型——构建方法系列2

帮助大家解决造模中遇到的难题

“沃”的实验——全网最全的生命科学研究线上学习平台第二期内容，为大家分享常见疾病动物模型构建方法，涵盖8大视频课程+2大实验手册+3大建模的标准操作流程。

5位老师线上为你讲解不同动物模型的背景、造模方法等内容，理论结合实践，希望能给大家的动物建模带来更多新思路和新灵感。

  8大视频课程

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下期内容预告：

 实验动物手术操作-手术方法 

来看看这是实验中的你吗？

抑郁造模实验中，小鼠总是伤痕累累达不到使用标准，上网也查不到原因，太心累了

到信号采集这步，突然发现小鼠的电极掉了，数据采集不到，去网上又找不到完整的资料

迷宫类行为学实验种类太多，找资料花了好长时间，要是所有的迷宫实验的资料在一起就好了......

查找科研资源如大海捞针，耗时耗力

效率提不上去，科研工作都耽误了

自从“沃”的实验 | 实验方法实战教程

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涵盖科研基础知识、实验技能、经验总结

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“沃”的实验科研资源分享平台首批内容上线，我们为大家分享常见疾病动物模型——构建方法的视频课程+3大实验手册+2大实验解决方案流程图（SOP），涵盖8大动物模型构建课程，4位老师全面讲解每个造模的背景、方法等内容，全面汇总造模技术，助力大家系统性提升科研能力。

• 第一课：阿尔茨海默症模型

• 第二课：帕金森病模型

• 第三课：脑缺血模型

• 第四课：抑郁模型

• 第五课：焦虑模型

• 第六课：创伤后应激障碍模型

• 第七课：自闭症谱系障碍模型

• 第八课：成瘾模型

• 代谢类疾病研究手术与造模手册大全

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下期内容预告：

常见疾病动物模型——构建方法系列2

自主给药实验

01.准备

◆ Article（文章）Prefrontal cortical regulation of brainwide circuit dynamics and reward-related behaviorIncubation of Cocaine Craving After Intermittent-Access Self-administration: Sex Differences and Estrous Cycle

◆ Materials and Reagents（材料与试剂）实验分组：对照组，自主给药时给生理盐水。实验组，自主给药时给受试药物。

◆ Equipment （仪器设备）
Lafayette斯金纳箱-自主给药系统

02.Principle（原理）

自主给药系统（自身给药实验）是行为药理研究的常用方法，它利用某些药物的正性强化作用，通过一定条件控制，使动物建立起行为与奖赏之间的联系，从而模拟人类药物滥用的一些情况。

1954年，詹姆斯·奥尔兹和皮特·米尔纳ZX认识到脑内存在奖赏系统并运用动物自主给药系统：按压按钮使大鼠接受大脑中的对特定部位短暂的电刺激。

奖赏环路的分类

正性奖赏环路（增大奖赏效应）和负性奖赏环路（YZ奖赏效应），此处主要介绍正反馈自主给药实验。

1、正性奖赏环路

中脑边缘多巴胺（Dopamine，DA）系统是奖赏环路的ZX。该系统主要起源于两个脑区：中脑腹侧被盖区（ventral tegmental area，VTA）和黑质致密部（Substantial nigra pars compacta，SNpc）。VTA多巴胺能神经元主要投射到伏隔核（Nucleus Accumbens，NAcc）、内侧前额叶皮层（Medial Prefrontal Cortex）和基底外侧杏仁核（basolateral nucleus of amygdale，）。此外，基底外侧杏仁核的谷氨酸能神经元可以通过 NAcc 间接投射到VTA。内侧前额叶皮层也能投射到VTA，这些脑区共同构成了正性奖赏环路。其中，VTA富含多巴胺能神经元，是调控奖赏功能的主要区域，这就是奖励对动物神经内分泌的作用的体现之一。

2、负性奖赏环路

研究表明LHb接收来自苍白球、下丘脑和前扣带回等脑区的输入，然后投射到VTA的多巴胺能神经元。这些通路共同构成了负性奖赏环路。外侧缰核（lateral habenula，LHb）是负性奖赏环路的主要区域。研究发现，向猴子进行厌恶刺激会强烈激活LHb神经元；用光遗传方法激活大鼠脚内核到LHb的输入会使得大鼠厌恶、逃避所探索的环境。这表明在啮齿类动物和非人灵长类动物中LHb均参与处理和编码厌恶信息，提示我们可通过激活LHb来YZ奖赏效应，从而ZL药物成瘾、YZ动物刻板行为的目的。

03.Procedure （方法步骤）

适应期

1. handle动物3-7天，使动物适应被抓取，不会产生过大的应激反应

学习期

1. 斯金纳箱预设程序，压杆一次给予糖水奖励（比较简单，无需禁食），每个实验周期设为10分钟或压杆20次；

2. 将动物放入斯金纳箱进行学习，每天1次；

3. 动物10分钟内按压压杆20次，且按压后进入食槽获得奖励概率大于85%，稳定重复2天，视为学会压杆；

4. 当有满足分组数量足够多的动物学会压杆操作后（每组额外预留多只动物，后续仍会有淘汰阶段），结束学习期，淘汰没有学会压杆的动物（淘汰动物可以用于其它实验）。

实验期

1. 对所有学会压杆的动物进行静脉埋管；

2. 埋管后重复一天斯金纳箱学习实验，剔除埋管导致压杆行为丧失的动物；

3. 将剩余动物按照实验需要进行分组；

4. 斯金纳箱预设程序 ，压杆一次给予药物注射一定时间，药物依据分组不同而不同。每个实验周期设为10分钟；

5. 将动物放入斯金纳箱中进行实验，每天1次，共计2天。

04.检测数据

实验期动物按压压杆的次数。

正性奖赏环路实验中，对照组一般注射溶剂或者生理盐水等动物不会产生成瘾反应的液体，动物会在实验过程中发生行为消退，两次实验过程中按压压杆次数会减少。若药物对于动物有成瘾作用，则动物会视药物注射为奖励，压杆操作则不会因为消退而导致减少，甚至可能会产生更多次的按压行为。负性奖赏环路实验中，对照组一般注射容易让动物产生成瘾反应的液体，从而动物在实验过程中不易发生行为消退，两次实验过程中压杆次数不会减少，甚至会增多。若受试药物对此有YZ作用，则动物会发生行为消退，两次实验过程中按压压杆次数会减少。

05.数据分析方法

*注意事项

◆ 触鼻和压杆是两种经典斯金纳箱常用响应方式。之所以选择压杆而不是触鼻进行实验，是因为触鼻是动物本来就存在的一种行为，造模相对会比较类似于经典条件反射。

◆ 实验期应对动物食槽进行遮挡，避免动物进入食槽时可能会扯掉给药导管。

◆ 如果需要同时评估药物除了成瘾外的其它功能，如对动物记忆、注意力的作用等，则需使用更为复杂的斯金纳箱应用程序来进行实验，实验周期也会有所延长。若受试药物为兴奋剂类型的药物，动物可能会进入过度亢奋的状态，产生如四处乱跳等亢奋行为，会对压杆操作有一定的影响。此时建议结合视频录制来观察动物状态，确定药物是否有成瘾倾向

糖水偏好实验

01.准备

◆ Article（文章）Prefrontal cortical regulation of brainwide circuit dynamics and reward-related behaviorChemogenetic inhibition of lateral habenula projections to the dorsal raphe nucleus reduces passive coping and perseverative reward seeking in rats

◆ Materials and Reagents（材料与试剂）糖精、清洁水、千分秤

◆ Equipment （仪器设备）Lickometer舔舐行为测试系统

02.Principle（原理）

糖水偏好测试是一项简单的任务，用于评估啮齿动物模型中的动机、抑郁(和无快感)及相关情绪状态，也用于更复杂的模型，如产后抑郁症和停药等。

1981年，Katz等人首次在抑郁大鼠造模过程中发现，应激后的大鼠蔗糖和糖精水的消耗减少达50%，并进一步发现三环类抗抑郁药丙咪嗪可显著增加模型组大鼠糖水的消耗量，随后Willner等使用糖水偏好实验对CUMS（Chronic unpredictable mild stress，慢性轻度不可预见刺激应激模型）大鼠进行评价，发现随着应激时间的延长和应激强度增加，模型大鼠的糖水消耗率明显下降，且该结果可被抗抑郁药物去甲丙咪嗪改善。该实验同时排除了大鼠糖水消耗减少是出于热量调节失调或应激后血糖升髙引起糖水摄入量降低的猜想。此重要发现说明了内源性抑郁症的核心特征是奖励机制缺陷和快感缺乏。现代研究表明，作为中脑“奖励ZX”的单胺核团，多巴胺系统边缘通路与奖赏机制有关叫外侧缰核则是大脑的“反奖励中 枢”，其簇状放电方式增强了对腹侧被盖区与中缝背核的抑 制，进而导致了快感缺失与行为绝望，是抑郁症发生的充分条件。

03.Protocol （方法步骤）

◆ Day1-3：适应实验房间（单笼饲养，双饮水瓶均装洁净自来水，自由饮水摄食）；Handle（5min/天将动物放在手上轻柔把玩）（测试开始于测试结束时均要称量记录水瓶重量）；

◆ Day4：双瓶均为水（测试开始与测试结束时均要称量记录水瓶重量，剔除有饮水偏好的动物）；

◆ Day5：双瓶均为1-2%糖水（测试开始与测试结束时均要称量记录水瓶重量）；

◆ Day6：8am-2pm进行实验，动物可自由摄取两瓶水/糖水（测试开始与测试结束时均要称量记录水瓶重量）。

04.数据分析方法

糖水比例（%）=【糖水摄入量/（糖水摄入量+水摄入量）】*100%同时也可以分析舔舐次数变化。

*注意事项

1. 水瓶滴漏：避免水瓶地漏，造成称量重量出现偏差

2. 品系差异：如，李斯特（Lister）带帽的大鼠在浓度为1％时显示出明显的蔗糖偏爱，而威斯塔（Wistar）大鼠则没有。与C57BL / 6J小鼠相比，129P3 / J小鼠对蔗糖或麦芽糊精加糖溶液的偏爱性较低

3. 性别差异：如，Wistar Kyoto雄性大鼠的蔗糖偏爱率低于雌性。京都Wistar雄性大鼠表现出应激诱导的蔗糖偏爱损失，而雌性则没有。相反，雄性和雌性Sprague Dawley大鼠在慢性轻度应激后均表现出蔗糖偏爱的降低