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在做基础研究时加入动物实验不仅会使研究工作更完善，也会提高投稿的命中率，但是想把实验做成功却不是件容易的事儿，因为在动物造模中总遇到各种难题：

• 搞不清动物建模标准化的流程，做起实验磕磕绊绊

• 造模需要注意的细节多，反复摸索十几遍才造模成功

• 明明按照文献中的实验方法造模，却还老是不成功

“沃”的实验

全网最全的生命科学研究线上学习平台

第二期内容：

常见疾病动物模型——构建方法系列2

帮助大家解决造模中遇到的难题

“沃”的实验——全网最全的生命科学研究线上学习平台第二期内容，为大家分享常见疾病动物模型构建方法，涵盖8大视频课程+2大实验手册+3大建模的标准操作流程。

5位老师线上为你讲解不同动物模型的背景、造模方法等内容，理论结合实践，希望能给大家的动物建模带来更多新思路和新灵感。

  8大视频课程

  2大实验手册

  3大建模的标准操作流程

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下期内容预告：

 实验动物手术操作-手术方法 

动物行为学实验可以客观性、科学性评价动物的沟通行为、社交行为、学习行为和探索行为等，它可以帮助科研人员探索认知、情绪和运动等复杂的生命现象，将其实验结果类比和推演到人，研究其行为信息的生理和病理意义。但在实验过程中，总会遇到一些大大小小的问题

• 动物行为学实验种类很多，不知道用哪种研究手段？

• 做旷场、高架十字迷宫等实验时，不清楚有哪些注意事项？

• 在做行为学实验数据分析时，哪些数据有用、如何处理数据来支撑自己的研究？

“沃”的实验

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第四期内容：

实验动物行为评估

带你get动物行为学实验的研究方法

「“沃”的实验」——全网最全的生命科学研究线上学习平台第四期，为大家分享实验动物行为评估方法，囊括学习记忆检测、运动检测、抑郁检测、焦虑检测、疼痛检测和行为学分析方法，3位老师线上为你详解超20种动物行为学实验方法，助你轻松完成动物行为学实验，从而提高研究效率与质量。

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►学习记忆检测

• 奖赏相关行为学实验

• 自发活动相关行为学实验

• 惩罚相关行为学实验

►运动检测

• 损伤评估行为学实验

• 耐力评估行为学实验

• 协调评估行为学实验

► 抑郁检测

• 习得性无助实验介绍

• 悬尾实验介绍

• 强迫游泳实验介绍

• 糖水偏好实验介绍

• 旷场实验介绍

• 新奇物体探索实验介绍

• 新奇抑制摄食实验介绍

►焦虑检测

• 高架十字迷宫实验介绍

• O迷宫实验介绍

• 黑白箱实验介绍

• 饮水焦虑实验介绍

• 旷场实验介绍

• 新奇抑制摄食实验介绍

► 疼痛检测

• 疼痛分类及神经通路

• 机械刺痛检测方法

• 热刺痛检测方法

• 自发疼痛检测方法

►行为学分析方法

以西班牙Panlab公司的行为学视频记录分析软件Smart v3.0为例，介绍Smart v3.0软件分析旷场实验视频的操作过程，以及演示Smart v3.0软件的特色功能

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下期内容预告：

神经信号研究-调控与检测方法

即可获取最实用的生命科学研究资料

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涵盖科研基础知识、实验技能、经验总结

囊括视频课程、实验手册、SOP流程图……

“沃”的实验线上学习平台将陆续上线，包含常见疾病动物模型、实验动物手术操作、实验动物行为评估、神经信号研究、细胞与分子研究……陪你走过整个学期，一站式助你提升科研技能

抑郁动物模型的造模方法找不对？

实验动物不会选择？

不知道有哪些常用的行为学检测方法？

「全线赋能“沃”的实验」之实验方法实战教程

直播第二期将为大家带来

《抑郁动物模型研究方法》

两位老师为大家详细讲解

造模方法、实验动物选择、行为学检测方法

涵盖常用模型和高频技巧，更有互动答疑

快速帮你摸清抑郁动物模型的构建

直播时间

4月26日（周二）19：00

报名方式

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直播全程免费，群内专业答疑

上期不少小伙伴在直播间

提出互动问题，这次我们全部讲解

一、实验操作类

1.注射针进入目标脑区后，可以直接进行注射吗？

“确定针头到达目标脑区后，建议停针1min，平衡气压，然后就可以开启注射程序了。”

2.颅钉植入的位置如何选择？

“颅钉的植入位置应该尽量避免血管集中的区域及注射位点。”

3.颅骨调平的标准要求是？

“前囟和后囟高度差，Bregma左右高度差均在±0.03mm以内，即可认为与颅骨水平。”

4.小鼠脑部病毒注射实验需要挑开硬脑膜吗？

“使用较细的玻璃电极注射的时候需要挑开硬脑膜，因为电极尖端较为脆弱，而硬脑膜具有弹性阻力，可能会把尖端弄断。同样道理，在植入多通道电极的时，也需要挑开硬脑膜，防止电极尖端受损。”

5.脑部病毒注射实验中，进针速度需要控制在？

“进针应保持匀速缓慢，推荐将全自动脑立体定位仪的速度设置在0.2-0.5mm/s。”

6.使用脑立体定位仪固定小鼠，耳杆固定位置是？

“一侧耳杆移至适当位置旋紧固定，用手轻柔拖住老鼠头部，将头部同侧枕骨大孔位置对准耳杆尖端，缓慢推动另一侧耳杆至枕骨大孔处。”

7.如何判断病毒正常注射，没有产生针头堵塞等现象？

“在使用注射针连接玻璃电极进行病毒注射时，可以先用空针吸取足够的矿物油起到密封作用，再吸取一定体积的病毒，矿物油的重力作用可以保证病毒注射更为流畅。另外矿物油与病毒之间因为密度不同会出现明显的液面分界线，我们可以用记号笔标记分界线的位置，就可以很直观观察到注射过程中是否存在针头阻塞现象了。”

二、实验耗材类

1.脑立体定位手术中，如何保护小鼠眼睛不受光源伤害？

“固定小鼠之后，可以在小鼠眼周涂抹红霉素眼膏，起到一定的闭光和防感染作用。”

2.光遗传与光纤记录使用的陶瓷插针有区别吗？

“目前常见的陶瓷插针都是使用的石英材质，自发荧光较低，所以可用于光遗传和光纤记录实验。但是光纤记录实验更推荐使用黑色陶瓷插针，可以更好的避免环境光对于信号的干扰。”

3.固定的颅钉需要使用多大尺寸？什么材质？

“小鼠用M1.0，大鼠用M1.4，M1.2介于两者之间，成年小鼠与幼大鼠可用，一般是不锈钢材质。”

4.颅钉的作用是？

“如同盖房子使用的钢筋一样，和牙科水泥一起可以让植入的陶瓷插针等更加牢固。”

三、实验技巧类

1.左右颅骨调平需要旁开多少距离？

“依据个人习惯而定，一般推荐旁开2mm左右（2-2.5mm均可）。”

2.使用牙科水泥固定，是否还需要缝合头皮组织？

“如果备皮环节直接将注射位点上方的头皮直接剪掉，那么直接通过牙科水泥就可以覆盖头部整体创面，不需要在缝合头皮。如果是剪开头皮进行的注射，或者牙科水泥固定的范围较小，可以将周边的头皮进行缝合。”

3．病毒注射完成后，植入陶瓷插针需要重新进行颅骨调平吗？

“在实验中一般不需要二次调平，使用前囟点作为参考0点，那么整体操作过程中就始终保持同一个参考点即可。如果发现更换夹持器或者更换实验器材，导致坐标有较大差别，可能是动物固定不够牢固，需要重新检查固定。”

4.光纤记录实验过程中需要全程避光吗？

“当然不建议强光下进行实验，使用黑色陶瓷插针及黑色陶瓷套管，将动物头部的牙科水泥涂黑即可很好的避免环境光对于实验信号的干扰。同时实验环境前后需要保持一致，避免环境变化导致的数据对比问题。”

5.怎样才能让数据结果更加平滑？

“数据处理过程中可以选择平滑处理功能，同时在数据采集过程中，可以改变相应的参数（如帧率，曝光等）可以让数据呈现的更加好看。”

6.光纤记录中进行光纤漂白的目的是？

“光纤具有一定的自发荧光，这种内部的自发荧光会掩盖一部分微弱的信号。常用光纤根据材质分为普通光纤和低自发荧光光纤，普通光纤进行光纤记录实验前必须进行漂白。”

7.本底信号波动的产生原因？

“实验环境的不稳定（温度，光线等），动物状态都有可能导致本底信号波动。使用黑色陶瓷插针及黑色陶瓷套管，将动物头部的牙科水泥涂黑可以很好的避免环境光对于实验信号的干扰。”

8.神经递质探针信号与钙信号有什么差别？

“常见钙信号会呈现出快速上升和缓慢下降的特征峰形，而递质类信号因为信号周期较长，上升或下降都可能需要较长的时间，所以信号较为平缓。但是不同脑区及种类细胞的钙信号差别较大，具体实验会有不同。（参考下面图片——经典钙信号状态）。”

四、实验仪器类

1.光纤记录数据分析软件需要单独安装吗？

“不需要，R820光纤记录软件包含数据采集功能和数据分析功能，通过一个软件即可实现采集和分析，简化实验步骤，提高实验效率。”

2.夹持玻璃电极的注射仪器是？

“R480玻璃微电极注射泵，可用于细胞、胚胎、颅脑等纳升级显微注射。”

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实验进展如何？

实验数据有了吗？

动物模型构建没人教？

换课题之后对动物模型构建不了解？

辛辛苦苦建立的动物模型

剔除掉了三分之一甚至一大半？

动物模型构建后该如何评估？

别着急，我们帮你准备了

助你开启实验第 一步

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这本手册大全包含什么？

01.神经环路相关研究常用的手术操作

你想要的脑立体定位病毒注射实验、套管埋植实验、光遗传光纤埋植实验、微透析探针埋植实验、在体电生理电极埋植实验等统统都有。实验步骤如材料和试剂、设备、操作流程全都包含。
 

02.神经系统疾病动物造模和评估方法

AD、PD、PTSD、抑郁症、自闭症、颅脑损伤、脊髓损伤、视神经损伤、疼痛等疾病造模与评估方法全部都有。

该动物手术造模大全囊括了神经科学领域最常使用的动物实验操作技术以及动物模型构建的方法，具体内容包括相关疾病的研究背景、模型构建的操作和评估方法以及参考文献，为您提供规范的实验操作流程和更多的模型选择，提高实验的成功率和可重复性，助您实验顺利开展。

不要998，也不要98

统统都不要！！

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冻干机起源于19世纪20年代真空冷冻干燥的技术，进入21世纪，真空冻干技术除了在医药、生物制品、食品、血液制品、活性物质领域之外的领域得到广泛应用。市面上的冻干机种类很多，要如何选购合适的冻干机需要从以下几点来看。

1.冻干面积

冻干机型号中的数字代表该型号冻干机的冻干面积，例如，CTFD-10型冻干机的冻干面积为0.18㎡。用户应根据自己的需要，通过计算来确定需用多大冻干面积的冻干机。例如每批需冻干1.8公斤(升)液体量的产品,用物料盘装载物料，每盘装载10㎜厚，则可计算得冻干板层的负荷面积：

A(面积，㎡)=V(体积，m)/H(高度，m)=0.0018m/0.01m=0.18㎡

即需选用板层负荷面积为0.18㎡的冻干机。

2.冷阱温度

冷阱是冷冻干燥过程捕获水分的装置，理论上讲，冷阱温度越低，冷阱的捕水能力越强，但冷阱温度低，对制冷要求高，机器成本及运转费用高。实验系列冷冻干燥机的冷阱温度主要有-56℃左右、-80℃左右等几个档次。冷阱温度为-56℃左右的冻干机适用于大部分产品的冻干，冷阱温度为-80℃的冻干适用于一些特殊产品的冻干。冷阱温度对捕水能力的影响实验表明冷阱温度从-35℃下降到-55℃，捕水能力有提升明显，冷阱温度低于-55℃，冷阱的捕水能力提升不明显。因此，在没有特殊需求的情况下，选用冷阱温度-60℃左右是理想的选择。Creatrust冻干机中CTFD型冷冻干燥机的冷阱温度≤-56℃，CTFD-10系列的冷冻干燥机的冷阱温度≤-56℃，并且采用混合工质制冷技术，在同样制冷机组的情况下，制冷温度低、制冷量大、工作稳定性高、故障率低。CTFD-12和CTFD-18型冷冻干燥机的冷阱温度可以选择≤-56℃或≤-80℃，特别适用于医药和特殊产品的冻干。

3.降温速率

降温速率体现制冷系统的制冷能力，在空载情况下,冷阱温度应在1小时内达到指标规定的Z低温度。例如，冷阱温度≤-56℃的冻干机，机器从打开制冷开始计时，冷阱温度达到-56℃的时间应不大于1小时。

4.极限真空度

极限真空度体现冻干机的泄漏情况及真空泵的抽气效率。冻干箱的真空度，过去的观点认为真空度是越高越好，行业内的观点认为真空度应在一个合理的范围之内。真空度太高了，不利于传热，干燥速度反而下降，但无论如何冻干箱的空载极限真空度应达到15Pa以上

5.抽真空时间

冻干箱空载的抽空速度，应在半小时之内从大气压抽到15Pa。

6.板层温度均匀性及平整度：

板层温度的均匀性和平整度,对产品质量的均一性有很大的影响,温度均匀性和平整度越好，则冻干产品质量的均一性也越好。冻干机搁板温度控制有加热器型和中间流体型，采用中间流体控制板层的冻干机搁板温度均匀性和平整度好，这种冻干机板层为空心夹层结构，板层的制冷和加热均通过中间流体在板层内部的流体通道循环来实现，因此板层温度均匀一致。Creatrust冷冻干燥机就采用搁板中间流体的技术。冻干机的搁板温度控制基本上都是采用加热器，板层温度一致性稍差。但总体而言，医YY冻干机板层温差应控制在±1.5℃，板内温差为±1℃，食品冻干机可适当放宽。

7.控制系统

冻干机的控制系统类型及功能各异，对于实验系列的冻干机，主要应用于物料的冻干工艺摸索和少量试生产。因此，控制系统应可实时显示冻干过程参数并自动记录；设定、修改及有效地执行冻干工艺程序；具备通讯接口，便于数据采集、保存。

（来源：青岛永合创信电子科技有限公司）

作为一线的科研人，往往都要做动物实验，有时高分科研paper也离不开动物实验的支撑。你是否还在为动物实验手术操作而犯愁：

• 给药、埋置等操作比较繁杂，稍不留意就会功亏一篑？

• 只会皮下注射，其他腹腔、鞘内、肌肉注射给药技术都没操作过？

• 颅脑损伤实验，老鼠颅骨不好固定？

• 查阅大量文献，实际手术操作还是不会做？

• 没人指导，实验一拖再拖？

「“沃”的实验」——全网最全的生命科学研究线上学习平台第三期，为大家分享实验动物手术操作方法，涵盖12种手术操作技术/4大手术操作实验/10大视频课程，带你轻松熟悉注射给药、手术埋置、颅脑/脊髓损伤和缓释泵植入等实验，加速你的实验进程，助你paper连连。

>动物注射给药技术

• 腹腔注射

• 皮下注射

• 肌肉注射

• 尾静脉注射

• 鞘内注射

>动物手术埋植实验

• 立体定位注射/插针埋置实验操作

• 电极埋植手术操作

• 给药套管埋植手术操作

• 脑组织移除及透镜植入实验操作

 >颅脑/脊髓损伤实验 

• 颅脑损伤实验操作

• 脊髓横断实验操作

>缓释泵植入实验

• 植入式缓释泵概述

• 缓释泵植入实验操作

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实验动物该怎么选择？

不同脑缺血模型，弄不清对应构建方法？

常用的血流监测技术，你都掌握了吗？

「全线赋能·“沃”的实验」之实验方法实战教程

直播第五期为大家聚焦

《脑缺血模型构建及检测》

从实验动物的选择、不同模型的分类

各个模型的构建方法到血流监测技术

两位老师将进行综合详细的讲解

全面助力你的科研实验研究

直播时间

6月21日（周二）19：00

报名方式

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主题：脑缺血模型构建

• 脑缺血研究背景

• 脑缺血动物模型构建

• 脑缺血模型构建实验仪器

讲师：孙绍强

瑞沃德行业解决方案专家，在膜片钳/钙成像/干细胞诱导方面有着丰富的实验经验，曾参与多项重大研发及自然科学基金项目，曾在Cell Stem Cell 上发表论文，专注于神经疾病，脑缺血及神经退行性疾病模型制备和机制研究，已为上百家客户提供专业的神经疾病整体解决方案。

主题：脑卒中研究中的血流监测技术

• 激光多普勒

• 激光散斑

• 超声多普勒

• 核磁共振成像

• 双光子显微镜

讲师：殷维君

瑞沃德微循环监测解决方案专家，在生理信号监测和血流血氧成像领域拥有丰富的经验，主导动物活体成像解决方案的设计及优化，专注于临床及临床前微循环监测解决方案的构建。

上期直播间互动问题

这次我们全部为小伙伴解答

Q1：组织剪切的大小有没有具体要求，肿瘤组织一般2-4mm可以吗？

A1：这要根据组织类型去判断，一般会预处理成10mm左右的组织块，太大可能会导致处理不完全，太小可能导致细胞死亡增加，甚至导致样本变稠等。

Q2：细胞活率80%就可以了吗，看到一些资料写的都要90%以上。

A2：这个需要根据下游实验的需求灵活调整，如果样本存活率不能达到要求的话，除了优化实验条件以外，还可以通过一些死细胞去除的试剂来优化已获得的样本。

Q3：低温解离细胞与常规的37度制备单细胞优势分别是什么？区别是什么？

A3：37℃条件下进行组织解离，由于细胞转录活跃，因此解离过程中基因表达可能会发生改变，可能会干扰应激反应相关基因表达，所以在进行snRNA-seq时可以通过使用冷活性酶释放细胞核，同时一些热敏感或者脆弱的细胞更适合采用低温解离的分离方式，但是低温条件对一些质密难解离的组织的处理效率可能会降低。

另外，温度对不同细胞种类也有一定影响，比如在进行脑组织解离时，热解离可能会影响神经元和星形胶质细胞的获取，但是会大量富集小胶质细胞，所以在进行组织解离时，根据获得目的细胞的需求要灵活调整解离方案。

Q4：裂红处理有什么注意事项吗？

A4：如果直径6-8μm的细胞占比较高，且有核率偏低，这表明红细胞含量可能较多，需要进行红细胞裂解，如果红细胞裂解依然不干净，不建议增大裂解体系，建议适当延长裂红时间，或适当增加裂红次数。

Q5：流式染色时间及温度如何选择？

A5：染色本身取决于抗体抗原之间的结合能力，染色时间和温度，受限于抗体浓度，一般根据选择抗体的说明书推荐的浓度和孵育时间、温度选择。我的实践经验：当不清楚说明书的情况，我会选择室温染色12-15min（取决于抗体浓度微调），或4度冰上30min。注意染色时间尽量不要让细胞破损，否则死细胞碎片会影响流式结果。此外细胞消化完毕后应该尽快染色处理，特别是一些凋亡染色、胞内酶染色为保持细胞物质活性，应尽快染色。

Q6：请问流式细胞实验中单抗进行荧光需要什么样的对照？

A6：关于对照设置，这个比较复杂，一般我们是选择同型对照作为阴性对照组，得到的结果往往是比较好的。所谓的同型对照就是同种属同亚型、相同荧光标记物、使用剂量和浓度相同，且属于非特异性结合的抗体为同型对照组。通常用来消除抗体与抗原的非特异性结合造成的背景染色。 

还有一类就是最常见的纯阴性对照，检测细胞群不进行任何抗体处理，直接进行流式检测，这就是简单消除细胞和溶剂本身的影响，这种方法的好处是节约抗体，毕竟抗体很贵。

Q7：如何减少补偿的干扰？

A7：补偿干扰往往是多激光的流式仪器才会发生一定干扰情况，此时，可以根据抗体公司提供的染料搭配方案选择比较好，也就是发射光谱的波长峰尽量不重叠的染料，这样补偿干扰会尽量消除。因此，往往需要查看染料的波长范围，此外，对于4色以上的多色标记情况，一般不常见，此时往往染料的波长范围难以避免的重叠，这时候，推荐使用抗体公司推荐的配色方案，尽量避免发射光谱的重叠。此外很多流式仪器配套软件都带一定算法对补偿进行修正，可以适当修正这个影响。

Q8：细胞自发荧光如何解决？

A8：细胞自发荧光往往是细胞内物质带有荧光，植物细胞因为叶绿素原因会自带一定荧光，然后一些药物处理下，药物本身带有发色基团，也可能自荧光，此时，纯阴性对照的设置可以补偿一定的情况。然后就是染料的选择情况，染料荧光波长范围避免与细胞自发荧光的波长的重叠，这样会比较好一些。我之前做药物的细胞凋亡实验时候，考虑到药物的情况，就没有使用常见的凋亡检测的Annexin V染料，而改用Annexin V-APC 。尽量设置纯阴性对照、有条件做下同型对照，往往可以在数据处理时候适当减少部分因素的影响。这样流式的结果会更好。

如果您错过前四期直播课

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来看看这是实验中的你吗？

抑郁造模实验中，小鼠总是伤痕累累达不到使用标准，上网也查不到原因，太心累了

到信号采集这步，突然发现小鼠的电极掉了，数据采集不到，去网上又找不到完整的资料

迷宫类行为学实验种类太多，找资料花了好长时间，要是所有的迷宫实验的资料在一起就好了......

查找科研资源如大海捞针，耗时耗力

效率提不上去，科研工作都耽误了

自从“沃”的实验 | 实验方法实战教程

直播课开播后

小沃也收到全国各地科研人

为助力科研，解决大家找资料难的困境

01实用性强

涵盖科研基础知识、实验技能、经验总结

02形式多样

囊括视频课程、实验手册、SOP流程图……

03内容丰富，持续更新

“沃”的实验线上学习平台将陆续上线，包含常见疾病动物模型、实验动物手术操作、实验动物行为评估、神经信号研究、细胞与分子研究……陪你走过整个学期，一站式助你提升科研技能

04操作便捷观看操作方便，可以随时观看学习

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“沃”的实验科研资源分享平台首批内容上线，我们为大家分享常见疾病动物模型——构建方法的视频课程+3大实验手册+2大实验解决方案流程图（SOP），涵盖8大动物模型构建课程，4位老师全面讲解每个造模的背景、方法等内容，全面汇总造模技术，助力大家系统性提升科研能力。

• 第一课：阿尔茨海默症模型

• 第二课：帕金森病模型

• 第三课：脑缺血模型

• 第四课：抑郁模型

• 第五课：焦虑模型

• 第六课：创伤后应激障碍模型

• 第七课：自闭症谱系障碍模型

• 第八课：成瘾模型

• 代谢类疾病研究手术与造模手册大全

• 呼吸系统疾病研究手术与造模手册大全

• 神经系统研究手术与造模手册大全

• 动物麻醉解决方案

• 给药手术解决方案

第一期干货内容已上线 →  https://mp.weixin.qq.com/s/gImD4GcLCVqQjJ74xjtWXg

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下期内容预告：

常见疾病动物模型——构建方法系列2

前言：溶出是药物吸收和暴露的限速步骤，因此，难溶性药物的体外测试尤其具有挑战性和重要性，需要明确此方法必须能够利用这一特征，通过提供有意义的释放速率的解释，或在某些情况下，解释实际的释放机制，从而提供重要的临床相关信息。

难溶性药物在制剂CF和制造工艺中需要特别注意，如减小颗粒大小的方法以及更复杂的制剂操作和工程技术领域，以提高药物的有效性、增加体内浓度和吸收。有一些新兴课题正在进行深入的探索和理解，特别是诸如溶出方法中的漏槽与非漏槽方面的条件、固态性质的贡献、表面活性剂的化学性质、计算机模拟、剂量倾泻和胶囊属性。

目前，正在开发的口服剂型在水性介质中具有不同水平的溶解度，为了促进具有较低水溶性的药物的溶出测试，管理机构允许使用低浓度的表面活性剂，以提高溶解度。1添加主要目的是提高药物在测试介质中的溶解度以实现漏槽条件，由于正在开发的药物中有很多是难溶性的（统称BCSII类和IV类），尤其要注意在溶出介质中加入表面活性剂，并不是方法开发中增加溶解度的wei一选择。

LOGAN12位溶出自动取样系统

01 表面活性剂

“表面活性剂”是“表面活性物质”的一组化学物质的通用术语。表面活性剂分子中存在疏水基团（尾部）和亲水基团（头部），决定了表面活性剂是具有两亲属性（亲水性和疏水性环境的亲和性）的有机化合物。因此，表面活性剂分子同时含有水不溶性（油溶性）和水溶性成分。表面活性剂分子将迁移到水表面，其中不溶性疏水基团可以延伸出大部分水相，或者如果水与油混合，则进入油相，而水溶性头部组保持在水相中。表面活性剂分子的这种排列和聚集起着改变水/空气或水/油界面处水的表面性质的作用（图1）。

图1表面活性剂单体

02 在溶出方法开发中的表面活性剂类型

在溶出方法的开发中，表面活性剂可以通过其离子电荷分为四大类用于筛选目的：

•阴离子：例如十二烷基硫酸钠/月桂基硫酸钠（SLS / SDS）

•阳离子：例如十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）

•非离子型：如聚山梨酯20和80，泊洛沙姆

•两性/两性离子：例如卵磷脂，椰油酰胺丙基甜菜碱

此外，为了体外评估GIT的性能，可以考虑更复杂的“生物相关的”表面活性剂介质体系。这些制剂模拟人GIT中的禁食（FaSSIF）和进食状态（FeSSIF）环境。2FaSSIF和FeSSIF介质配方可商购。

03 溶出介质中的表面活性剂浓度

如上所述，基于表面活性剂的介质的溶解度增加是浓度依赖性的，而较高浓度的表面活性剂会溶解更多的药物，³必须优化表面活性剂浓度以平衡溶解度和漏槽条件与检测制造或稳定性变化方法的区分能力。通常，设定表面活性剂浓度的目标是在溶出介质中使用尽可能少的表面活性剂，以实现所需的漏槽条件和方法的稳健性，同时实现并保持对药品关键质量属性的区分。

在早期的开发过程中可以评估溶解性和漏槽条件，但是在开发的后期阶段，例如在验证方法可靠性以检测配方/工艺中的有意变化的过程中，该方法的区分特征往往被揭示出来。

另外，对于基于表面活性剂的溶出介质，应该考虑两个因素：

（i）应提供表面活性剂介质系统以确保方法可转移性。表面活性剂的各种来源有时在制备时导致可变的pH。SDS介质尤其如此，因为这种表面活性剂典型地来自乙氧基化中和过程。

（ii）在表面活性剂介质中使用的填充剂的pH值需要在添加表面活性剂之前进行调整。当表面活性剂改变电极的表面环境时，所得到的溶液应被认为是表观pH值。

04 表面活性剂在溶出介质开发中的应用

当表面活性剂被添加到溶出介质时，亲水端将与水性介质结合，疏水尾部遇到排斥力，有效地寻找与之相联系的替代相。相之间的“推拉”降低了水相内的分子间作用力，由此降低了表面和界面张力。事实上，界面张力的降低是表面活性剂增溶的关键驱动力。

想象一下一种药物由于高疏水性而不溶于水或溶出介质的情况。添加表面活性剂并将其溶解在介质中，它作为延伸/线性单体或自缔合球形存在，分布在介质中。表面活性剂浓度的进一步增加将ZZ产生胶束，多个表面活性剂分子的自缔合产生表面活性剂尾部的疏水核心的新胶体相。发生这种相变的浓度称为临界胶束浓度（CMC）。

在纯水相存在下，溶剂与任何疏水表面的相互作用不是在能量上有利的，导致润湿差和低溶解度。疏水性固体（不溶性药物）与溶解的表面活性剂的疏水性尾部之间的相互作用，降低了润湿和溶解固体所需的能量，从而增加了药物的溶解度。通过随后将溶解的物质分配到表面活性剂胶束的疏水核心中可以进一步提高溶解度。在方法开发中选择zui佳的表面活性剂浓度必须考虑胶束的存在与否对体外释放的基本机制的影响。

05 表面活性剂对溶解气体的影响

如前所述，溶出介质中表面活性剂的存在改变了介质的表面和界面张力。这导致溶解氧在介质中的溶解度的变化。Fliszar等人⁴评估了含有表面活性剂的溶出介质中溶解氧的作用。使用含有0.5％SLS，2.0％SLS和0.5％吐温80的含水（不含表面活性剂）介质和溶出介质，研究了几种标准制剂对氧溶解的作用。

在这项研究中，含有表面活性剂的介质的氧含量由于表面张力的降低而被发现为7.5-8.5mg/mL。然而，不含表面活性剂的水性介质更低，为5.5mg/mL。不管所用的脱气方法（在真空下搅拌，加热，超声处理，氦气喷射和膜过滤），一旦脱气完成，所有介质准备重新获得或重新生成。初始氧含量和通气达到平衡的持续时间取决于用于脱气的方法（图2-4）。评估氧含量的增加对其溶解的影响。研究证实，含有表面活性剂的介质在初始时间点没有发现任何结果值（误差范围内）（图5和6）。

此外，已知对溶解氧敏感的化合物（泼尼松）在通气和脱气（换句话说，含氧量）反应中的溶出曲线显示出显著的变化，如图7所示。从这项工作可以得出结论，含表面活性剂的介质迅速恢复其平衡氧含量，并且变化具有最小误差。该研究证实，在实验开始之前，介质中的溶解气体达到平衡是很重要的。

图2.0.5％吐温介质中的溶解氧平衡⁴

图3.在0.5％SDS介质中的溶解氧平衡⁴

图4.在2.0％SDS介质中的溶解氧平衡⁴

图5.在氦气鼓泡和未处理的1.0％SDS介质中化合物A的溶出曲线⁴

图6.在氦气鼓泡和未处理的0.5％SDS介质中化合物B的溶出曲线⁴

图7.泼尼松在0.3％和0.1％SDS中的释放曲线⁴

LOGAN将持续分享难溶性药物的溶出度测试系列的相关文献！

参考文献：

1. Noory, C., Tran, N., Ouderkirk, L., Shah, V. Steps for development of a dissolution test for sparingly water-soluble drug products. Dissolut.Technol., 2000, 7(1), 16–18.       

2. Bhagat, N. B., Yadav, A. B., Mail, S. S., Khutale, R. A., Hajare, A. A., Salunkhe,S. S., Nadaf, S. J. A review on development of biorelevant dissolution medium. J. Drug Deliv. Ther., 2014, 4(2), 140–148. 

3. Shah, V. P., Konecny, J. J., Everett, R. L., Mc Cullough, B., Noorizadeh,A. C., Skelly, J. P. In vitro dissolution profile of water-insoluble drug dosage forms in the presence of surfactant. Pharm. Res., 1989, 6(7), 612–618.    

4. Fliszar, K. A., Forsyth, R. J., Zhong, L., Martin, G. P. Effects of dissolved gases in surfactant dissolution media. Dissolut. Technol., 2005, 12(3), 6–10.

学习与记忆

学习是高等生物接受外界环境变化获得新行为和经验的过程，常见的学习形式有非联合型学习和联合型学习两种。人或动物受到一次或多次单一刺激后形成的、并不需要将两个以上刺激或刺激与反应之间形成明确联系的过程，如习惯化（习以为常），称为非联合型学习；人或动物受到一系列事物刺激、且在时间上很靠近地重复发生，ZH在脑内逐渐形成联系，如操作性条件反射，称为联合型学习。

记忆是对学习获得的经验或行为的保持，包括获得、巩固、再现及再巩固四个环节，常见的有程序性记忆与陈述性记忆。程序性记忆即无意识情况下建立的无法用语言描述的记忆，如使用筷子；陈述性记忆指可以用语言描述的关于过去经历或事件的记忆，包括事实、事件、情景以及他们间的相互关系等，如回忆并说出事情经过。

学习与记忆二者是互相联系的神经活动过程，学习过程中必然包含记忆，记忆也总是需要以学习为先决条件。以实验动物为对象，采集并分析动物的行为信息是学习与记忆的常规研究手段之一。例如：利用动物自发活动特性进行研究、通过奖惩等操纵进行研究等。今天我们主要介绍利用动物自发活动进行研究的最常用手段之一：Morris水迷宫中的平台探查实验研究方法（常规的水迷宫实验包括Morris水迷宫、通道式水迷宫等，由于Morris水迷宫最常用，本文主要介绍Morris水迷宫）。后续我们还会介绍：T/Y迷宫、放射性迷宫（八臂迷宫）、物体识别（新物体识别、位置物体识别）、操作性条件反射（斯金纳箱）、穿梭箱、跳台、避暗箱、巴恩斯迷宫等。

实验方法步骤

1.原理

1981年，Morris基于动物厌恶水环境的特性建立了水迷宫方法，实验动物被迫游泳，学习寻找隐藏在水中的平台。通过记录实验动物在目标象限（原先放置平台的象限）所花的时间和进入该象限的次数，以此作为空间记忆的检测指标。

2.文献

Partial loss of psychiatric risk gene Mir137 in mice causes repetitive behavior and impairs sociability and learning via increased Pde10a.

3.实验设备

Morris水迷宫、Smart 3.0软件、摄像系统等。

4.实验方法

常用实验分组方法

01、已知品系的记忆缺陷转基因动物模型

(1)对照组：按照实际实验需求选定（分类一：工具鼠的空载鼠，如Cre、Cas9、FLP鼠等；分类二：同笼阴性鼠、转基因品系背景鼠等）

(2)转基因对照组：不作任何处理的转基因动物

(3)转基因实验组：对转基因动物进行额外处理，如给药，注射病毒等

02、定向基因编辑待验证的转基因动物

(1)对照组：按照实际实验需求选定。（分类一：工具鼠的空载鼠，如Cre、Cas9、FLP鼠等；分类二：同笼阴性鼠、转基因品系背景鼠等）

(2)转基因组：不作任何处理的转基因动物

03、验证药物造模效果-学习记忆变强/变弱

(1)对照组：不作任何处理的动物

(2)实验组：使用造模药物使动物学习记忆能力变化的动物

04、验证受试药物对造模药物的恢复效果

(1)对照组：不作任何处理的动物

(2)药物造模组：使用造模药物使动物出现记忆力问题的动物

(3)实验组：对药物造模组动物使用受试药物恢复的动物

*所有实验动物均进行同样的实验流程，在实验开始就应对需要给药的动物进行给药

适应阶段

实验开始前3-7天（自己繁育小鼠 Handle 3天，外购动物 Handle 7天），每天抓取、轻抚动物，让其熟悉实验人员手，在实验过程中不会处于应激状态。

学习阶段

01、旗帜标记学习(1)实验设置

• 在迷宫臂交叉垂直的四个方向的水面上方分别放置一个显眼（与水面，窗帘的颜色不同）的标志物（如圆形，方形，五角星，三角形等）可以贴在桶臂上，也可以贴在帘子上（需避免帘子在实验过程中晃动），或者房间墙壁上（此时需要没有帘子）

• 将水面按照标记物的位置分为4个象限，并将平台放置于一个象限的ZX

• 将平台置于水下1-2厘米深（加入染料后，根据动物游泳过程中水面波动后，水平台不会露出水面即可）。不宜太深，平台过深会导致动物到达平台后仍然继续游走

• 在平台上放置一个高于水面的标记物，使动物可以通过标记物确认平台位置

(2)时间

根据动物学习记忆水平，可设置0-6天的学习时间

(3)方法

将动物分别从不同象限放入水中，让动物自由活动寻找平台。

• 动物找到平台：记录时间，让动物在平台停留30s，观察周围环境

• 动物未找到平台：动物自由活动1-2min（实验中保持一致，推荐1min）后， 将动物引导至平台所在处，并停留30s，让动物观察周围环境

每只动物每天分别随机从4个象限各进行一次实验，两次实验需要间隔至少2-3min（推荐2min），让动物补充体力。（方法一：两只动物同时开展实验，交替进行学习，即动物A进行Trial1，接下来动物B进行Trial1，动物A进行Trial2依次进行实验。方法二：单只动物进行4个Trial实验后，再开展另外一只动物训练实验。）

(4)记录数据

第  一次到达平台的时间（潜伏期），总活动轨迹、距离。

• 总活动轨迹用于判断动物是否有不利于实验结果的行为习惯（如绕圈，跳跃等），必要时以此剔除动物

• 总活动距离仅做动物活跃程度参考，受潜伏期以及动物活跃程度影响

• 潜伏期越短说明动物已经学会找到平台这一行为，学习能力越强

02、平台学习

(1)实验设置：取下平台上高于水面的标记物，其余保持不变

(2)时间：根据动物学习记忆水平，可设置4-7天的学习时间

(3)方法：

将动物分别从不同象限放入水中，让动物自由活动寻找平台。

• 动物找到平台：记录时间，让动物在平台停留30s，观察周围环境

• 动物未找到平台：动物自由活动1-2min（实验中保持一致，推荐1min）后， 将动物引导至平台所在处，并停留30s，让动物观察周围环境

每只动物每天分别随机从4个象限各进行一次实验，两次实验需要间隔至少2-3min（推荐2min），让动物补充体力

(4)记录数据：第  一次到达平台的时间（潜伏期），总活动轨迹、距离

• 总活动轨迹用于判断动物是否有不良行为习惯（如绕圈，跳跃等），必要时以此剔除动物

• 总活动距离仅做动物活跃程度参考，受潜伏期以及动物活跃程度影响

• 潜伏期越短说明动物已经学会找到平台这一行为，学习能力越强

测试阶段

01、实验设置

去除水中的平台，其余保持不变

02、时间

平台学习结束后一天

03、方法

将动物在指定位置放入水迷宫中，让动物在水中自由活动1-2min（推荐1min，与学习阶段测试时间相同）

04、记录数据

主要包括：平台区域经过次数、平台区域停留时间、总活动轨迹与距离、不同象限活动时间、距离。

(1)经过平台区域次数为主要指标，经过次数越多，说明动物记忆越好

(2)平台区域停留时间作为经过平台次数的参考，部分动物可能会在平台区域停留，导致经过平台区域次数较少

(3)总活动轨迹可以作为实验结果进行展示

(4)当经过平台次数，停留时间无显著差异时，考虑分析平台所在象限的活动时间及距离是否有差异，部分动物可能对平台具体位置记忆不是特别清楚，但是会在平台附近区域反复移动

5.数据分析

1、不同时期分析的数据类型不同

2、采用单因素方差分析（one way-ANOVA），当多组间有差异时，两两比较采用Fisher's LSD post hoc多重比较方法

3、P<0.05认为具有统计学显著性差异

6.注意事项

（1）实验时，建议将水温维持在21℃-23℃范围内。水温过低或过高均容易导致动物产生应激反应。

（2）实验时间周期设置应保证对照组对照组的动物学会的最短时间为标准，实验周期过长会让学会寻找平台的动物产生厌倦感，从而影响实验结果。

（3）每次实验结束后，需要将动物毛发擦干，避免动物受凉死亡。

（4）实验中需要在水中加入不易变质的染料，不仅可以增加水面与动物颜色的对比度，也可以防止动物透过透明的水看到平台。黑鼠棕鼠推荐使用钛白  粉做为染料（购买链接→）；白鼠推荐使用食用黑色素作为染料（购买链接→）。

另外还可选择使用透明浮珠，其有反射少、蒸发少等特点，但是阻力大，会导致小鼠游泳非常累，因此不推荐。

（5）实验进行过程中不要进行换水。虽然水池中会存在很多动物排泄物导致异味产生，但换水操作可能会导致动物认为进入了一个新的环境而影响实验结果。

（6）加入的染料易在水中沉降，每半天进行实验前应对水进行搅拌，使染料重新分布均匀。

（7）实验过程中每天都会有水的损耗，导致平台深度越来越浅。建议实验开始前确定一个标准水位，后续每天进行实验前，对迷宫进行补水。

（8）实验过程中应尽可能保持安静，避免声音影响动物对方向的判断。

（9）实验人员将鼠放入水迷宫后，应尽快离开动物视线区域以及视频记录区域，避免被动物当做标记物，或被视频记录识别为实验动物。

（10）固定时间点开展实验。由于动物节律问题，在一天不同的时间段进行实验会导致实验结果不同。建议实验过程中，不同实验组的动物逐只或逐2只进行实验，可以获得更为准确的实验结果。

2019年8月8日

苏州普源精电科技有限公司（RIGOL）

MSO8000系列数字示波器

以全“芯”之势，闪耀登场！

电子测测量行业持续飞速发展，各行各业的电子测量产品与解决方案层出不穷！普源示波器MSO8000系列填补了国产2GHz带宽示波器的技术空白。同时，作为RIGOLduchuang的试UltraVision II技术平台产品家族的新成员，其性能得到了极大提升。

RIGOL秉承“成就客户，无限可能”的信念，以持续创新、⼯匠精神与zhuo越技术为本，致力于为专业⽤户提供良好体验的电⼦测量仪器产品与解决⽅案，目前已成为测试测量行业的品牌之一。

普源示波器MSO8000系列以全“芯”的设计和服务，倾情奉献，是一款满足行业客户多方面需求的独特创意之作！

产品三大亮点：

· 搭载自主芯片2GHz带宽，10GSa/s采样率。

· 拥有UltraVision II技术平台600,000wfms/s高刷新率，500Mpts深存储，全数字触发。

· 支持平台灵活升级硬件标配，可通过选件激活更高带宽和增值功能模块。

产品应用场景：

MSO8000系列数字示波器适用于工业电子、科研教育、航空航天及国防等诸多行业与领域。

普源示波器MSO8000系列——满足工业电子行业的高带宽需求

RIGOL自主研发的“Phoenix”芯片组突破了国产示波器1GHz的带宽限制，在中高端数字示波器领域，为您提供更”宽“的选择。

RIGOL自研的Phoenix芯片组

实时眼图测量

随着数字总线标准的不断演进，信号速率也随之快速提升，这对调试及生产过程中的示波器带宽提出了更高要求。MSO8000系列数字示波器拥有Z大2GHz带宽，10GSa/s采样率。同时。基于出色的带宽和采样率，MSO8000系列示波器提供了带时钟恢复功能的实时眼图绘制和测量。

2GHz带宽对1Gb/s信号进行眼图观测

抖动测量与分析

示波器进行眼图测量可以帮助您直观地显示出数字信号的传输质量，从而了解系统中码间串扰的强弱，便于您在系统设计中做出改善。MSO8000可使您准确快速地对串行时钟信号或并行总线信号进行抖动测量与分析。

对时钟信号进行抖动TIE测量，并通过趋势图和直方图分析

普源示波器MSO8000—支持教育与科研领域的GX、经济需求

MSO8000系列数字示波器的初始硬件已具备所有功能，后期只需要通过选件来进行升级,从而获取相应特性。

集七台仪器功能于一体

教育科研领域的客户使用仪器种类较为广泛，实验初期不会一次性采购所有设备，需要随着研究的深入逐步购买。MSO8000系列数字示波器集7种独立仪器功能于一体（示波器、逻辑分析仪、频谱分析仪、任意波形发生器、数字电压表、高精度频率计和累加器以及协议分析仪），便于您在各种应用场景使用。

MSO8000集成七合一功能

灵活升级带宽及功能选项

“七合一”的功能为您提供了更经济的选择，并极大的节省您的工作台空间；同时，MSO8000系列数字示波器的带宽升级及功能选项均可通过软件升级实现，减轻您Z初的投资压力，让您的投资更GX。

普源示波器MSO8000—聚焦航空航天/国防领域的高精度需求

MSO8000系列数字示波器基于RIGOL的UltraVisionII技术平台，具有高刷新率、深存储及全数字触发等特点，能满足您更高的测量精度及测试效率的要求。

更高的波形捕获率

在航空航天与国防领域，对信号处理的要求更高，需要更精确的测量信号，更快速的发现异常。MSO8000系列示波器可提供高达600,000 wfms/s的波形捕获率，能够助您快速地发现信号中存在的毛刺和其他偶发事件，从而极大地提高您的调试效率。

高刷新率下捕获偶发异常信号

硬件全内存自动测量

普源示波器MSO8000提供硬件全内存自动测量，有效地提高了波形测量的精确度。在Z大内存500 M数据点的情况下，任意测量项均可在1.5秒内完成，能出色地解决您长时间观测信号的测量难题。而全数字触发技术的使用，通过数字信号处理方法进行触发点测定，以精确的算法检测有效触发事件，大幅提高您的测量精度。

普源示波器MSO8000系列有三个主体型号：带宽分别为600 MHz、1GHz和2GHz，低带宽型号可随时通过购买并激活带宽升级选件，获得更高带宽。如需进一步了解产品资料或者具体报价，欢迎咨询普源dai理商——安泰测试网。

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