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  tanhjiuv938 2016-05-19 00:00:00

  仪器及器皿 THZ-C恒温震荡器，LRH-250生化培养箱，LDZX-50FB立式电热压力蒸汽灭 菌器，SW-CJ-1F洁净工作台，百分之一电子天平，生物显微镜， 18×150试管，90mm培养皿，500ml三角瓶，10ml刻度吸管，1ml移液枪，吸耳球，玻璃珠（直径4-6mm），pH试纸（5.5-9.0） 试剂 氯化钠（分析纯），葡萄糖（分析纯），蛋白胨（生化试剂），牛肉浸膏（生化试剂），柠檬酸铵、磷酸氢二钾、酵母膏、乙酸钠、硫酸镁、硫酸锰、吐温-80、进口琼脂等 3．具体步骤 准备工作 1 MRS琼脂培养基的配制及灭菌：葡萄糖20g、柠檬酸铵2g、乙酸钠5g、磷酸氢二钾5g、硫酸镁0.5g、硫酸锰0.2g、牛肉膏10g、酵母膏5g、蛋白胨10g、吐温-80 1g、琼脂16g、水1000mL 、pH5.5-6.0，118℃灭菌30min。 2 其他物品的包装及灭菌：500ml三角瓶、培养皿、1ml移液枪、10ml刻度吸管、玻璃珠、18×1500试管等用牛皮纸包裹好，0.85%生理盐水置于1000ml三角瓶和250ml三角瓶，1ml枪头盒（内置枪头）、灭菌器121℃30分钟。 3 洁净工作台的准备：操作前将所需物品置于台面，紫外线灭菌30分钟再进行操作。 样品制备 采样应不少于500克，采用称量纸称取25.00克（精确到0.01g），倾入 已加入灭菌玻璃珠的干燥已灭菌500ml三角瓶中，用100ml量筒量取先100ml已灭菌的生理盐水沿瓶壁倾入500ml三角瓶，摇匀，约2分钟，再量取125ml已灭菌的生理盐水沿瓶壁倾入500ml三角瓶，然后包裹起来于旋转式摇床上200r/min充分振荡30min，即成母液的菌悬液。 3.3 样品处理 1　用移液枪取1ml上述母液的菌悬液加入盛有9ml无菌水的试管中，混匀成1:102稀释的菌悬液，这样依次稀释，分别得到1:103、1:104……1:107等浓度（每个稀释度必须更换无菌吸管）。 2　取1ml不同稀释度菌悬液加入培养皿内，与琼脂培养基混匀。每个样品取3个连续适宜稀释度，每一个稀释度重复3次，同时加无菌水的空白对照。置于生化培养箱37℃培养48h，每个稀释度取5~10个菌落的菌体，涂片染色，显微镜观察识别后计数菌落。

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