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实验背景

     邻苯二甲酸酯类物质（phthalate esters，PAEs）俗称塑化剂，普遍应用于玩具、食品包材、个人护理等产品中。食物在加工、包装过程中很可能会造成邻苯二甲酸酯的溶出且渗入到食物中，ZZ摄入人体危害肝脏和肾脏等。欧盟、美国、丹麦、ZG都将其列入“优先控制污染物名单”。国家市场监管总局也下文《关于食品中“塑化剂”污染风险防控的指导意见》，明确要求ZD检查油脂类、酒类食品生产经验者塑化剂防控措施落实情况。

可食品基质种类又多又复杂，样品检测该从哪下手呢？

安谱实验根据GB 5009.271-2016，采用SPE 小柱法和QuEChERS法对食品中邻苯二甲酸酯进行了测定，整体实验数据好，解决了各种基质样品的处理要求。其中QuEChERS 方法相比于小柱而言操作更简单、更节省溶剂，进一步提高xiao率。具体方法供大家参考。

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接下来，小编带大家走进安谱实验室一起来学习具体检测方法吧~

典型应用 

一、QuEChERS 方法

1 样品前处理

基质：普通食用油等（不含太多的添加剂）

称取0.5g 油样，用2mL 乙腈饱和的正己烷溶解，然后用4mL 正己烷饱和的乙腈提取一次，玻璃滴管吸取乙腈层，再用4mL 正己烷饱和乙腈重复提取一次，收集乙腈层后全部倒入dSPE 玻璃萃取管( 纯油基质A 套餐净化管，SBEQ-CA8645-glass) 充分振荡，4000r/min 离心5min，取上清液GC-MS 分析。

如果要做油品里面更低浓度的PAEs，可以放大取样量，用dSPE 玻璃净化管之后再浓缩。

2 GC-MS条件

色谱柱：C℃保持1min, 以20℃ /min 的速率升温至220℃ , 保持1min, 以5℃ /min 的速率升D-5MS 气相毛细管色谱柱(30m*0.25mm*0.25um，GAEQ-554421), 升温程序：60温至280℃ , 保持4min；载气：He；1mL/min，进样量：1uL，不分流进样;

电离方式：EI 电子能量：70ev 进样口温度 250℃，离子源温度 280℃，传输线温度 280℃。

3 实验谱图

图1. 玉米油中0.5ppm加标GC-FID谱图

前十四个目标物的回收率在68-140%，DNOP 回收率为83%

图2. 玉米油中100ppb加标GC-MS谱图

目标物的回收率在90-150% 之间

二、SPE小柱方法

1 样品前处理

（1） 称取0.5g 油样于12mL 螺纹培养管中，加入1ppm 混标200uL，加入100uL 正己烷，2mL 乙腈，涡旋1min 超声20min，4000rpm 离心5min，取上层乙腈层于16mL 培养管中，剩下油层继续加2mL 乙腈，涡旋30s 离心5min，取上层乙腈层，下层油层再加入2mL 乙腈重复提取一次，合并3 次的乙腈6mL ，待spe 净化。（2） 称取0.5g 豆瓣酱于12mL 螺纹培养管中，1ppm 混标加200uL，加入1mL 正己烷涡旋1min，再加5mL 乙腈，涡旋1min 超声20min 4000rpm 离心5min，收集上清液于16mL 培养管中；再加入5mL 乙腈重复提取一次，合并后，氮气吹至6mL 待SPE 净化。

2 小柱操作

SBEQ-CA5369-GLASS CNWBOND Si/PSA SPE 玻璃小柱；

• 活化：5mL 二氯甲烷；平衡：5mL 乙腈;

• 上样：控制1d/s 再加5mL 乙腈于16mL 培养管中，震荡后加入到小柱中去；

• 洗脱：2*3mL 乙腈洗脱, 收集上样液和洗脱液, 再加入1mL 丙酮;

• 氮吹近干后，加入1mL 正己烷定容 上机检测。

3 色谱条件

色谱柱：CD-5 MS(30*0.25*0.25)

升温程序：初始温度60℃，保持1min，以20℃ /min 升温至220℃，保持1min, 以5℃ /min 升温至250℃，保持1min,

以20℃ /min 升温至290℃，保持7.5min；

进样口温度：260℃

传输线温度：280℃

离子源温度：280℃

载气：氦气

流速：1mL/min

进样方式：不分流进样

4 实验谱图

图1.200ppb 标准品谱图

图2. 豆瓣酱基质空白谱图

图3. 豆瓣酱加标200ppb 谱图

图4. 油样基质空白谱图

图5. 油样加标200ppb 谱图

5 实验数据

三、产品推荐

参考标准：《全国土壤污染状况详查土壤样品分析测试方法技术规定》和《ISO 13913-2014 土壤中邻苯二甲酸酯类的测定 GC/MS法》

邻苯二甲酸酯（PAEs）是一类具有环境内分泌干扰作用的有机污染物，具有致畸性、致癌性、致突变性及生殖毒性的特点。主要来源于人工合成，可通过各种途径进入环境，广泛存在于大气、水体、土壤、沉积物、灰尘等环境介质中，日用消费品中也普遍含有。邻苯二甲酸酯的大量使用所带来的环境污染和人体健康问题已经引起了人们广泛的关注。

方法优势
        迪马科技技术实验室参考《全国土壤污染状况详查土壤样品分析测试方法技术规定》和《ISO 13913-2014 土壤中邻苯二甲酸酯类的测定 GC/MS法》建立了土壤中17种PAEs的测定方法，该方法：
(1) 采用乙酸乙酯提取，ProElut AL-B玻璃固相萃取柱净化，GC-MS检测；
(2) 可有效去除土壤中的矿物质，水分和腐殖质等多种杂质，实现优异的净化效果；
(3) 具有前处理简单，回收率高，除杂效果明显、方法重现性好等优点。

土壤中17种邻苯二甲酸酯(PAEs)的测定——GC/MS法

1、适用范围
        本方案适用于土壤中DMP、DEP、DAP、DIBP、DBP、DMEP、BMPP、DEEP、DPP、DHXP、BBP、DBEP、DCHP、DEHP、邻苯二甲酸二苯酯、DNOP和DNP的检测。

2、标准品配制
单标标准储备液：准确称取各标准品，用乙酸乙酯配制成1000 μg/mL的单标标准储备液。
混合标准储备液：分别吸取各单标标准储备液，用乙酸乙酯配制成10 μg/mL（DBP为6 μg/mL）的混合标准储备液。

3、提取
        取5 g样品，加入适量无水硫酸钠(一般样品加8-10 g)，搅拌均匀，加入20 mL乙酸乙酯，振荡30 min，静置5 min，收集3 mL上层清液，待净化。

4、净化—— ProElut AL-B 1000 mg/6 mL Glass（Cat.# 65206G）
(1)活    化： 向柱中加入6 mL乙酸乙酯，弃去流出液；
(2)上    样： 将待净化液加入柱中，控制流速1滴/秒，收集后1 mL流出液，供GC/MS分析。

5、色谱条件
色谱柱：DM-5MS, 30 m × 0.32 mm × 0.25 μm (Cat.# 8231)
进样口温度：280 ℃
升温程序：初始温度60 ℃，保持1 min，以20 ℃/min升温至220 ℃，保持1 min，再以5 ℃/min升温至300 ℃，保持5 min
载气：氦气，柱流速：2.69 mL/min
进样方式：不分流进样
进样量：1.0 μL
离子源温度：230 ℃
接口温度：280 ℃
溶剂延迟：5.5 min
电子轰击电离源（EI）：选择离子监测模式（SIM），分组监测见表1

表1 选择离子监测组表

6、添加回收结果
添加水平为0.1 mg/kg土壤中17种PAEs的GC/MS检测添加回收结果

17种PAEs标准（DBP 6 μg/mL、其它10 μg/mL）TIC图

土壤中17种邻苯二甲酸酯(PAEs)的测定——GC/MS法相关产品信息

邻苯二甲酸酯主要用于聚氯乙烯（PVC）材料，令聚氯乙烯由硬塑胶变为有弹性的塑胶，起到增塑剂的作用。它被普遍应用于玩具、食品包装材料、医用血袋和胶管、乙烯地板和壁纸、清洁剂、润滑油、个人护理用品（如指甲油、头发喷雾剂、香皂和洗发液）等数百种产品中，但对人体的健康有严重的危害 。由于各国的发展水平不同，产品技术法规和标准并没有统一化，而是因各个国家地区经济社会情况的不同而有差异。现将对邻苯二甲酸有严格法规要求的国家总结如下：

CATO根据Z新市场需求以及材料成本的降低，对DHNUP的价格进行了调整，同时根据用户需求新增1.2ml规格的DHNUP。让用户有更多的选择，价格更优惠。更多产品信息可与CATO销售工程师或与当地经销代理联系，我们真诚为您服务。

更多相关标准品及产品详细信息请联系我们020--81960175，或者浏览我们的网站ch.cato-chem.com 进行查询。

       有害物质限制（RoHS）指令由欧盟制定，主要用来限制电气和电子产品中特定危险材料的使用。出口欧盟的产品，必须遵从RoHS要求提供相应检测报告。

       RoHS目前的Z新版本是RoHS 3，其强制执行起始日期为2019年7月22日。对比前期指令版本，RoHS 3要求检测以下4种邻苯二甲酸酯：邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯（DEHP），邻苯二甲酸苄基丁酯（BBP），邻苯二甲酸二正丁酯（DBP），邻苯二甲酸二异丁酯（DIBP）。这些邻苯二甲酸酯通常用作绝缘增塑剂，列在欧洲化学品管理局的REACH清单中SVHC（高度关注物质）。

直 播 课 程

       国际电工委员会（IEC）发布了 IEC 62321-8标准方法，定义了通过GC-MS和TD-GC-MS测定电子产品中的邻苯二甲酸酯。TD-GC-MS方法中一次GC运行包含两个独立的热解吸加热程序，本次直播课程将详细讲解如何利用热裂解器一次运行就完成此检测，大大简化检测过程，对于工业用户，自动进样器的加入适于批量检测，进一步提高工作效率。

时间：4月2日上午9:30开始

课程纲要：

1、RoHS检测背景介绍；

2、裂解器技术介绍；

3、裂解器根据RoHS 3指令检测邻苯二甲酸酯详细介绍。

讲师简介

       CDS Analytical公司总经理。

       清华大学凝聚态物理学士，斯坦福大学高能物理研究生，爱莫雷大学生物物理博士研究生。

       2002年参与美能源部(DOE) E160丁肇中粒子试验。

       2006年参与美国国立卫生研究院(NIH) 维生素B12辅酶在人体内生化反应机理研究。

       2008年任SP工业高级产品经理，参与布鲁克公司研发chao强场核磁测量仪器以及配套各种核磁耗材。

       2016年主持研发CDS第六代热裂解仪6000系列和超快速温度光学探头模块。

       2017年主持研发了世界首套和瑞士CTC公司的Z新三代PAL前处理自动进样器匹配的7000C吹扫捕集富集阱模块。

       2018年主持研发了世界首套和瑞士CTC公司的Z新三代PAL前处理自动进样器匹配的动态顶空模块。该模块完全符合EPA 8260C土壤检测标准，同时达到EPA 5030全密闭系统要求。

       2018年主持研发了世界首台采用液冷模式提高功效比的热解吸冷阱，具有降温快，效率高的特点。

       2019年主持研发了CDSdiyi代利用光裂解作为辅助手段研究聚合物老化机理的Photoprobe。其发光部件采用了自由空间聚焦技术，一举实现了800毫瓦每平方毫米的光密度，使老化时间比传统方法缩减了一个数量级。

直 播 入 口

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2020年7月到11月，广州市消委会、佛山市消委会和澳门消委会委托专业第三方开展了老人鞋、儿童鞋中禁用偶氮染料、增塑化剂邻苯二甲酸酯的测试，其中 40 多款老人鞋样品中芳香胺实测值超出相关限量值。安谱实验密切关注市场，快速推出皮革中邻苯二甲酸酯和偶氮的方法包，助力企业严格把控安全质量，同时针对偶氮项目采用 CNW 偶氮染料专用柱对 24 种偶氮染料进行回收测试，满足 GB/T19942-2005 对于回收率要求。

热点相关标准推荐的前处理柱

一、皮革中邻苯（GBT22048-2008） 方法包推荐

玻璃小柱特色：

● 采用玻璃柱管避免邻苯本底；

● 洁净填料，严格质控。

1、SPE 小柱步骤（SBEQ-CA1355）

活化：3mL 二氯甲烷

上样：所有上样液上样

淋洗洗脱：3*3mL 二氯甲烷

收集上样液和淋洗液待上机

2、色谱条件

a、色谱柱：石英毛细管色谱柱

b、载气：氮气，纯度≧ 99.999%

c、进样方式：分流进样

d、离子源：电子离子源（EI）

e、电子能量：70 eV

3、谱图

二、皮革中偶氮（GBT19942-2005）应用方案及方法包

偶氮专用柱特色：

● 反复优化后的填料及配比，满足皮革基质检测要求；

● 洁净填料，严格质控。

1、样品前处理

取1mL 30 ug/mL 的芳香胺标准溶液加入到 16 mL 预热至 (70±5)℃的柠檬酸盐缓冲液，盖上塞子，在通风柜中将其置于已预热到(70±2)℃的水浴 (或沙浴)中加热(25±5)min，反应器内部始终保持70℃。用注射器加入1.5mL连二亚硫酸钠溶液，保持70℃，加热10min，再加1.5mL连二亚硫酸钠溶液，继续加热10min，取出。反应器用冷水尽快冷却至室温。 

2、小柱操作

上样：将全部反应溶液小心转移到硅藻土提取柱中，静止吸收15min。 

淋洗：加入5ml叔丁基甲醚和1mL20%氢氧化钠甲醇溶液于留有试样的反应容器里，旋紧盖子，充分振摇后立即将溶液转移到提取柱中 ( 如试样严重结块则用玻棒将其捣散)。分别用15mL，20mL叔丁基甲醚两次冲洗反应容器和试样，每次洗涤后，将液体完全转移到硅藻土提取柱中开始洗提。

洗脱：ZH直接加 40 mL 叔丁基甲醚到提取柱中，将洗提液收集到 100 mL 圆底烧瓶中 . 在不高于 50 ℃的真空旋转蒸发器中 (真空度500mbar±100mbar) 将叔丁基甲醚提取液浓缩至近1mL(不要全干)，残留的叔丁基甲醚用惰性气体流缓慢吹干。直接加入2mL甲醇 (或乙酸乙酯，TLC方法用 ) 到圆底烧瓶中溶解残渣，该溶液用于仪器分析。

3、色谱条件

毛细管色谱柱：CD-5MS （30m*0.25mm*0.25um）； 

进样口温度：250℃； 

程序升温：50℃保持 0.5min，以 20℃ /min 升温到150℃，保持 8min，再以 20℃ /min 升温到 230℃，保持 20min，继续以 20℃ /min 升温到 260℃，保持 5min；

质谱接口温度：280℃； 

进样方式：分流（30:1）； 载气：氦气 ( ≥ 99.999%)， 

流量：1.0mL/min；

进样量：1μL； 

离化方式：EI。

4、实验谱图

4.1 空白谱图

4.2 标准溶液谱图（15ppm）

4.3 小柱加标（15ppm）

5、实验数据

6、结果与讨论

6.1、2，4 二氨基苯甲醚（615-05-4）国标（GB/T19942-2005 ）要求回收率大于 20%,因而实验回收率满足标准要求；

6.2、 邻氨基偶氮甲苯（97-56-3）经本方法分解为邻苯甲胺，2- 氨基 -4- 硝基甲苯分解为 2，4 二氨基甲苯，因此会导致本体回收很低；

6.3、4- 氨基偶氮苯（60-09-3）会裂解为苯胺和 / 或 1,4 苯二胺，因此回收很低，应该考察是否检测到 1，4 苯二胺或者苯胺，若检测到应该按照 GB/T23344 测定。

三、其他通用产品推荐

01 超低本底的试剂

02 计量器具

03 小型仪器

     目前复杂基质中四环素类化合物的检测方法主要参照GB/T 23409-2009、GB/T 23409-2009、 GB/T 20764-2006和GB/T 22990-2008。但是国标的方法普遍存在以下的缺陷：

      安谱实验成功开发出CNW II代四环素检测专用SPE专用柱，与HLB串联使用，针对各种复杂食品基质（蜂蜜、牛奶、猪肉、猪肝等），实验过程方便，无需氮吹，回收率高且稳定，杂峰少。

一、样品前处理

     准确称量2g样品（精确到0.01g），加入四环素标品（上机的加标浓度5ppm），加入20mL Na2 EDTA-Mcllvaine 缓冲溶液，涡旋混合2min后，于35°C超声20min，然后4000r/min，离心10min，上层溶液过滤至另一个50mL离心管。重复提取一次，上清液过滤后收集，将两次过滤后的溶液混合，取10mL上清液后离心取上清，待上样。

二、SPE操作过程

小柱：Poly-sery HLB小柱 (SBEQ-CA3181)

活化：5mL甲醇

平衡：10mL水

上样：提取液 

淋洗：5mL甲醇-水溶液（5: 95）

洗脱：5mL甲醇，洗脱后，向洗脱液中加氨水，使pH值在8-10之间。

小柱：CNW II代四环素检测专用SPE小柱（复杂基质）(SBEQ-CA6980)

活化：5mL甲醇

平衡：5mL 5%氨水甲醇

上样：HLB小柱的洗脱液 

淋洗：5 mL 甲醇

洗脱：4mL洗脱液（甲醇-乙腈-0.01M草酸（pH 2.00）1.5: 1.5: 7）

从洗脱液中取部分样品至2mL进样小瓶，待HPLC-UV检测

三、色谱条件

色谱柱：Athena C18, 250mm*4.6mm，5µm

流动相：乙腈/甲醇/草酸（0.01M）=1.5:1.5:7，pH=2.0

流速：1.0mL/min

柱温：30°C

进样量：10µL

检测器：紫外（361nm）

四、实验谱图

五、实验数据

结论：HLB+四环素专用柱在净化复杂基质时，可以避免HLB+WCX的柱子回收率骤降的现象，保证高回收率，同时可以去除许多杂质。

六、实验耗材

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　   塑化剂（增塑剂）是一种高分子材料助剂，也是环境雌激素中的酞酸酯类（PAEs phthalates），其种类繁多，Z常见的品种是DEHP（商业名称DOP）。DEHP化学名邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯，是一种无色、无味液体，工业上应用广泛。塑化剂从化学结构分类有脂肪族二元酸酯类、苯二甲酸酯类（包括邻苯二甲酸酯类、对苯二甲酸酯类）、苯多酸酯类、苯甲酸酯类、多元醇酯类、氯化烃类、环氧类、柠檬酸酯类、聚酯类等多种。

　　塑化剂种类可达百余种。2011年台湾地区不法企业添加的是DEHP、DINP等。 DEHP和DINP急性毒性均较低。动物试验发现长期大量摄入DEHP和DINP，会产生内分泌干扰作用，可造成生殖和发育障碍，并能诱发动物肝癌。但尚无证据表明对人类具有致癌性。

　　邻苯二甲酸二乙酯属于苯甲酸酯类的塑化剂。因此，检测邻苯二甲酸二乙酯在水中的含量具有重要意义。

　　本实验主要采用顶空固相微萃取（HS-SPME)-气相色谱的方法检测自来水中的邻苯二甲酸二乙酯，从而达到监控水中塑化剂的目的。

      SPME 发明于 1990 年，被广泛应用于不同食物基质、环境样本特别是水样中的挥发或半挥发性物研究。这项独特技术之所有被广泛接受，主要是由于其强大的应用优势。SPME 通过将提取和预浓缩合并为简单的一步而极大地降低了有机溶剂用量。此外，它还使原本极耗费时间的样本处置和前处理效率显著提高。自动化的 SPME 是一种GX、适用于常规分析的前处理手段。

　　本次实验采用MASS-6027全自动固相微萃取仪（上海新拓分析仪器科技有限公司）实现与安捷伦7890B气相色谱的全自动SPME联用，对自来水中可能存在的代表性增塑剂邻苯二甲酸二乙酯进行了定量分析。方法应用了全自动SPME操作，有效的提高了实验室的测试通量；自动SPME操作避免了手动操作引入的人为操作误差，稳定且节省了人力。

（来源：上海新拓分析仪器科技有限公司）