荧光定量PCR的2个概念和特点
将荧光基团加入到PCR反应体系中,通过不断累积荧光信号从而使对PCR全程的实时监测实现,再根据标准曲线定量分析未知模板的方法,即是荧光定量PCR技术。在实时荧光定量PCR中,实时检测全程PCR扩增过程,按照反应时间和荧光信号的变化能够将一条曲线绘制成。
两个概念
1.Ct值
t代表threshold,C代表Cycle,每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数,即为Ct值的含义。
2.荧光域值(threshold)的设定
荧光本底信号为PCR反应的前15个循环的荧光信号,3~15个循环的荧光信号标准偏差的10倍为荧光域值的缺省设置。
传统定量只能终点检测的不足之处,通过实时荧光定量PCR技术可以将其有效的解决,使得荧光信号的强度每一轮循环就能够检测一次并且在电脑上记录下来得以实现。在电脑软件之中,通过计算每个样品Ct值,按照标准曲线就能将定量结果得到。所以基于如下两点,实时荧光定量PCR可以不需要内标。
a.Ct值与起始模板的线性关系
因为Ct值与起始模板的对数存在线性关系,未知样品的定量测定能够根据标准曲线。所以实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
b.Ct值的重现性
PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,真正的指数扩增期(对数期)刚刚进入,这个时间误差很小,还没有被放大,所以Ct值有极好的重现性,也就是时间相同不同管内扩增或者不同时间相同模板扩增,会得到相同的Ct值。
特点
1.重复性好
2.检测速度快
3.自动化程度高
4.特异性强
5.灵敏度高
全部评论(0条)
推荐阅读
-
- 荧光定量PCR的2个概念和特点
- 将荧光基团加入到PCR反应体系中,通过不断累积荧光信号从而使对PCR全程的实时监测实现,再根据标准曲线定量分析未知模板的方法,即是荧光定量PCR技术。
-
- 荧光定量PCR定量方法
- 将荧光基团加入到PCR反应体系中,通过不断累积荧光信号从而使对PCR全程的实时监测实现,再根据标准曲线定量分析未知模板的方法,即是荧光定量PCR技术。
-
- 实时荧光定量PCR
- 实时荧光定量PCR是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。
-
- 荧光定量PCR的注意事项
- 将荧光基团加入到PCR反应体系中,通过不断累积荧光信号从而使对PCR全程的实时监测实现,再根据标准曲线定量分析未知模板的方法,即是荧光定量PCR技术。
-
- 荧光定量PCR的应用
- 实时荧光定量PCR具有灵敏度高、特异性高和精确性高的优点,此项技术已被应用于分子生物学、医学、食品检测和环境监测等多个领域。
-
- 荧光定量PCR检测方法
- 将荧光基团加入到PCR反应体系中,通过不断累积荧光信号从而使对PCR全程的实时监测实现,再根据标准曲线定量分析未知模板的方法,即是荧光定量PCR技术。
-
- 荧光定量PCR仪介绍
- 实时定量荧光PCR,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行总量分析或通过Ct值对模板进行相对定量。
-
- 普通PCR仪和荧光定量PCR仪的操作规程
- 聚合酶链式反应是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,通过高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应形成一个周期,目的DNA迅速扩增,其具有节约时间,操作简单,高灵敏度,强特异性等特点。
-
- 荧光定量PCR的技术原理和化学方法
- 将荧光基团加入到PCR反应体系中,通过不断累积荧光信号从而使对PCR全程的实时监测实现,再根据标准曲线定量分析未知模板的方法,即是荧光定量PCR技术。
-
- 实时荧光定量pcr仪的计算原理
- Real-timePCR是在PCR扩增过程中,通过荧光信号,对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期,模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系,所以成为定量的依据。
-
- 极谱的概念和特点应用
- 一种电解质溶液中不同离子含量通过物质电解时所得到的电流-电压曲线进行定性以及定量分析的电化学式分析仪器,即为极谱仪。一条极谱曲线(或者叫做极谱图)为其测试的结果。
-
- PCR的反应特点
- PCR技术是模拟体内DNA的天然复制过程,在体外扩增DNA分子的一种分子生物学技术,主要用于扩增位于两段已知序列之间的DNA区段。
-
- 电化学腐蚀的概念和危害
- 腐蚀测试仪根据电化学腐蚀监测理论,通过极化电阻值,可以计算出体系的腐蚀电流和腐蚀速率等信息。腐蚀测试仪结合了线性极化测量方法和交流阻抗测量方法的优点,能够更加准确的得到测量结果。
-
- 粘度计的概念和应用
- 用来对流体(液体和气体)的粘度进行测量的仪器,叫做粘度计。粘度是表示流体在流动时,流体内部有内摩擦的物理量发生,为流体反抗形变的能力,其作为一项重要指标用于某些成品或半成品的鉴定。
-
- 软件开发概念和过程
- 一系列根据特定顺序组织的计算机数据和指令的集合,称为软件。通常而言,软件包括系统软件、应用软件和介于这两者之间的中间件。软件包括能够运行于计算机上的电脑程序和这些电脑程序有关联的文档。
-
- 荧光定量PCR技术
- Real-TimePCR技术,又称实时定量荧光PCR,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行总量分析或通过Ct值对模板进行相对定量。
-
- 荧光定量基因扩增仪
- 荧光定量基因扩增仪的PCR扩增原理和普通基因扩增仪扩增原理相同,只是PCR扩增时加入的引物是利用同位素、荧光素等进行标记,使用引物和荧光探针同时与模板特异性结合扩增。
-
- 电子鼻的概念
- 电子鼻为一种对食品进行快速检测的新颖仪器,其是在20 世纪90 年代发展起来的,被叫做气味扫描仪。被测样品的整体信息以及指示样品的隐含特征通过其特定的传感器和模式识别系统被快速地提供。
-
- 人工合成DNA的概念和原理
- 基因合成是指在体外人工合成双链DNA分子的技术,与寡核苷酸合成有所不同:寡核苷酸是单链的,所能合成的最长片段仅为100nt左右,而基因合成则为双链DNA分子合成,所能合成的长度范围50bp-12kb。
-
- 通风柜的概念和分类方法
- 实验室通风是实验室设计中不可缺少的一个组成部分。为了使实验室工作人员不吸入或咽入一些有毒的、可致病的或毒性不明的化学物质和有机体、实验室中应有良好的通风。
①本文由仪器网入驻的作者或注册的会员撰写并发布,观点仅代表作者本人,不代表仪器网立场。若内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们立即通知作者,并马上删除。
②凡本网注明"来源:仪器网"的所有作品,版权均属于仪器网,转载时须经本网同意,并请注明仪器网(www.yiqi.com)。
③本网转载并注明来源的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品来源,并自负版权等法律责任。
④若本站内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们马上修改或删除。邮箱:hezou_yiqi
参与评论
登录后参与评论