基因导入仪外源基因导入过程和特点
利用现代遗传工程技术往受体生物基因组导入来自于不同生物体的基因,即是外源基因导入。基因工程的一个关键步骤就是外源基因导入。需要有合适的载体、酶、和方法才能够实现外源基因导入。外源基因导入有很多的方法,然而对于所有的生物体来说,同一个方法不能全部适用。
外源基因导入过程
1、获得外源基因的途径
主要通过人工合成获得真核细胞基因:
(1)、结构基因的核苷酸序列以及相应的 mRNA序列通过已知蛋白质的氨基酸序列推测出来,然后再以单核苷酸为原料通过化学方法进行合成。
(2)、将mRNA作为板,逆转录成互补的单链DNA,之后在酶的作用下,使双链DNA合成,从而使所需要的基因获得。
2、往载体克隆
质粒为常用的载体,外源基因和质粒利用同样限制性内切酶切断,质粒与外源基因在DNA连接酶作用下结合,使得一个重组DNA分子形成。
3、转化和表达
在生物体内通过载体带入外源基因并使它得到表达。土壤农杆菌、动植物细胞、枯草杆菌、大肠杆菌等为常用的受体细胞。当在受体细胞内导入外源基因后,随着受体细胞的繁殖,外源基因会复制。
4、筛选和检测
真正能够摄入外源基因的受体细胞在全部受体细胞中都是很少的。所以细胞中是否导入了外源基因必须通过一定的手段进行检测 ,有多种检测的方法。
特点
其优点为有比较广泛的应用程面,有较为简单的方法,有较短的转化时间,有较高的转化效率,有比较低的实验费用。
受体预处理、受体轰击后培养、受体种类、轰击压力、制止盘与金颗粒的距离、微弹大小等会直接相关联基因枪的转化频率。
微弹技术的速度
微弹的速度要求会受到表皮的力学特性、所处的环境以及人的年龄的影响。微弹Z高加速到500m/s以上以便使该技术有较大的适应范围。
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