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色谱柱清洗再生

方法及注意事项

春节长假已过，人到岗，心归位，大部分色谱人已经迅速进入了工作状态。为了保障分析工作的顺畅进行，确保色谱柱处于"最 佳状态"是非常重要的。

本期推送小编将给大家介绍以下3种类型的TSKgel色谱柱的清洗再生及保存方法，助您轻松开工！

1、SW型硅胶基质尺寸排阻色谱柱

TSKgel SW、SWXL、SuperSW以及UP-SW系列都是硅胶基质的SEC色谱柱，使用含水缓冲液作为流动相，用来分离蛋白质、肽、核酸等样品。此类型色谱柱的清洗步骤按照如下：

1）反向连接色谱柱，并以最 大流速的1/2运行色谱柱。

2）使用5倍柱体积 (CV) 的0.5 mol/L硫酸钠，pH 3.0溶液冲洗色谱柱。

3）使用5 CV Milli-Q或去离子水冲洗色谱柱。

4）使用5 CV 20%乙腈清洗色谱柱。

5）使用5 CV Milli-Q或去离子水冲洗色谱柱。

6）再正向连接色谱柱，并以样品分析时的流速使用至少10 CV的流动相来平衡色谱柱。

※请注意：应逐渐提高流速，以免损坏色谱柱。

2、PW型聚合物基质SEC色谱柱

TSKgel PW、PWXL、SuperMultiporePW系列以及SuperOligoPW系列产品都是用于高分子分子量测定的亲水性聚甲基丙烯酸酯树脂SEC色谱柱。此类型色谱柱中的充填介质与样品间常会发生离子相互作用或疏水相互作用等现象。

1）对于阳离子性吸附物质，可以通过提高盐浓度进行过柱清洗。

2）对于疏水性吸附物质，可以通过提高有机溶剂的浓度进行过柱清洗。

3）去除难溶性蛋白质，可使用含尿素的溶液清洗。但需要留意尿素可能会残留在色谱柱上。

3、亲水性聚合物基质蛋白分离用色谱柱

TSKgel亲水性聚合物基质的蛋白分离用色谱柱，包括SuperQ-5PW, DEAE-5PW, SP-5PW, CM-5PW, DEAE-NPR, SP-NPR, BioAssist Q/S这几个型号的离子交换色谱柱，还有疏水、亲和等其他多种类型的柱子。

1）先使用0.1～0.2 mol/L氢氧化钠水溶液或20～40%的醋酸水溶液进样清洗 (100 µL, 3～5针) 即可冲掉色谱柱上吸附的杂质。如果采用该方法清洗后，色谱柱性能仍无法恢复，再考虑以下两种方法。

2）去除疏水性杂质：在清洗液中添加10-20 %的甲醇、乙腈等有机溶剂后过柱清洗。

3）去除难溶性蛋白：在清洗液中添加6-8 mol/L的尿素或0.2-0.3 %的中性表面活性剂 (Triton、Tween、Brij等) 后过柱清洗。但需注意尿素及界面活性剂可能在柱中残留。