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- 【导读】动物脾脏组织中性粒细胞分离液KIT说明书【产品规格】200ml/Kit【产品组成】为方便广大用户使用,试剂内容如下:名称产品编号规格A试剂A200mlB试剂F(赠品)F2013TB...
动物组织中性粒细胞分离液KIT说明书
【产品规格】
200ml/Kit
【产品组成】
为方便广大用户使用,试剂内容如下:
名称
产品编号
规格
A
试剂A
200ml
B
试剂F(赠品)
F2013TBD
200ml
C
样本稀释液(赠品)
2010C1119
200ml
D
清洗液(赠品)
2010X1118
200ml
E
红细胞裂解液(赠品)
NH4CL2009
100ml
F
说明书
1份
【实验前准备】
A.适用仪器
Zda离心力可达1200g的水平转子离心机
B.耗材
产品名称
产品货号
产地
15ml离心管散装
339650
美国NUNC
15ml离心管架装
339651
美国NUNC
50ml离心管散装
339652
美国NUNC
50ml离心管架装
339653
美国NUNC
无菌胶头滴管或塑料滴管
【检验方法】
1.全过程样本、试剂及实验环境均需在20±2℃的条件下进行。
2.首先制备组织单细胞悬液,制备方法详见“组织单细胞悬液制备技术”。
取一支15ml离心管,小心加入5ml试剂A。
3.用吸管小心吸取细胞悬液样本加于分离液之液面上,400-550g,离心20-30min(注:如改变样本及分离液用量,需相应调整离心力及离心时间,具体离心条件需客户自行摸索,以达到Z佳分离效果)。
4.离心后,离心管中将出现两层环状乳白色细胞层,上层细胞为单个核细胞层,下层细胞为中性粒细胞层。
5.用吸管小心吸取分离液中的中性粒细胞层,如有红细胞混杂则加入适量红细胞裂解液(产品编号:NH4CL2009)将红细胞裂解(具体方法见“红细胞裂解液使用说明”)即得目的细胞。
6.将获得的细胞层移至另一15ml离心管中,向所得离心管中加入10ml清洗液(产品编号:2010X1118),混匀细胞。
7.250g,离心10min。
8.弃上清。
9.用吸管以5ml清洗液(产品编号:2010X1118)重悬所得细胞。
10.250g,离心10min。
11.重复8、9、10,弃上清后以0.5ml后续实验所需相应液体重悬细胞。
【注意事项】
1.全过程样本、试剂及实验环境均需在20±2℃的条件下进行。为获得Z佳的实验结果,需在取样2h内进行实验。
2.本实验Z好不使用高聚合材质(如聚苯乙烯)的塑料制品,应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理过后的玻璃制品,因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面,影响细胞分离效果。
3.分离液用量大于组织单细胞悬液样本量时,分离效果更佳。
4.如实验后细胞得率或活性过低,请联系天津灏洋技术支持以寻求帮助,具体联系方式详见下方生产企业信息。
【储存条件及有效期】
18-25℃保存,有效期2年。本品易感染细菌,需无菌条件操作。无菌条件下操作,启
封后置常温保存。如4℃保存,本分离液易出现白色结晶,影响分离效果。
【参考值(参考范围)】
本实验中性粒细胞提取率大于80%。
下表为成年人外周血中各种细胞的数量及比例,用户可适当进行参考。
红细胞
白细胞
血小板
含量(个/L)
(4.0-5.5)×1012
(4.0-10.0)×109
(1.0-3.0)×1011
中性粒细胞
淋巴细胞
单核细胞
50%-70%20%-40%3%-8%
【相关实验技术方案】
1.组织单细胞悬液制备技术。
2.所获得中性粒细胞的培养技术。
3.所获得中性粒细胞的核酸提取技术。
4.所获得中性粒细胞的鉴定方法A.流式细胞技术B.免疫组化技术C.原位杂交技术D.PCR技术
【可能存在的问题及解决方法】
1.由于血液粘度、细胞密度等差异可能造成的问题及解决方案如下表所示:
出现情况
出现原因
建议解决方案
离心后目的细胞存在于血浆层或稀释液层
转速过小或离心时间过短
适当增减转速
离心后目的细胞存在于分离液中
转速过大或离心时间过长
离心后白环层弥散
细胞密度过大
调整细胞密度
离心后白环层太浅或看不见
细胞密度过小
2.本分离液分离细胞的原理为密度梯度离心,其密度与温度、大气压等密切相关。不同地区客户可根据当地情况对离心条件进行适当调整。建议对离心条件进行调整时,恒定离心时间,对离心转速进行调整。
3.本分离液依照国际标准,全部使用YY级原料,性能指标与国产同类产品略有不同,可能出现红细胞沉降不完全的情况,可以适当加大离心转速。
注:在对离心条件进行调整时,离心转速的加减以50-100g为基数,直至达到Z佳分离效果,
离心力Z小不得小于400g,Zda不得大于1200g。离心时间以20-30min为准。
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- 2004-11-05 09:23:11
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