动物外周血中性粒细胞分离液KIT说明书

“XXXX”

【产品规格】

200ml/Kit

【产品组成】

为方便广大用户使用，试剂内容如下：

名称

产品编号

规格

A

试剂A

200ml

B

清洗液（赠品）

2010X1118

200ml

C

红细胞裂解液（赠品）

NH4CL2009

100ml

D

说明书

1份

【实验前准备】

A．适用仪器

Zda离心力可达1200g的水平转子离心机

B．耗材

产品名称

产品货号

产地

15ml离心管散装

339650

美国NUNC

15ml离心管架装

339651

美国NUNC

50ml离心管散装

339652

美国NUNC

50ml离心管架装

339653

美国NUNC

无菌胶头滴管或塑料滴管

【检验方法】

全过程样本、试剂及实验环境均需在20±2℃的条件下进行。根据样本量大小，分以下两种情况：

情况A：血液样本量小于5ml时，实验方法如下：

1.取一支15ml离心管，小心加入5ml试剂A。

2.用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面上，400-550g，离心20-30min（注：如改变血液样本及分离液用量，需相应调整离心力及离心时间，具体离心条件需客户自行摸索，以达到Z佳分离效果。）

3.离心后，离心管中将出现两层环状乳白色细胞层，上层细胞为单个核细胞层，下层细胞为中性粒细胞层。

4.用吸管小心吸取分离液中的中性粒细胞层，如有红细胞混杂则加入适量红细胞裂解液（产品编号：NH4CL2009）将红细胞裂解（具体方法见“红细胞裂解液使用说明”）即得目的细胞。

5.将获得的细胞层移至另一15ml离心管中，向所得离心管中加入10ml清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。

6.250g，离心10min。

7.弃上清。

8.用吸管以5ml清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。

9.250g，离心10min。

10.重复7、8、9，弃上清后以0.5ml后续实验所需相应液体重悬细胞。

情况B：血液样本量大于等于5ml时，实验方法如下：

1.取一支适当的离心管，依次小心加入试剂A,试剂总量与稀释后的样本量相等。

2.将血液样本小心加于分离液之液面上，450-650g（Zda离心力可至1000g），离心20-30min。（注：根据血液样本量确定离心条件，血液量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到Z佳分离效果。加入血液样本后，样本及分离液总体积不得超过离心管总体积的三分之二）。

3.剩余步骤同“情况A”中步骤3至步骤10。

【注意事项】

1.全过程样本、试剂及实验环境均需在20±2℃的条件下进行。为获得Z佳的实验结果，Z好在取血2h内进行实验，血液存放时间越长，细胞分离效果越差。血液放置超过6h后分离效果更差甚至不能达到分离目的。

2.本实验Z好不使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面，影响细胞分离效果。

3.分离液用量大于血液样本时，分离效果更佳。

4.血液样本不需稀释，直接进行分离即可。

5.如实验后细胞得率或活性过低，请联系天津灏洋技术支持以寻求帮助，具体联系方式详见下方生产企业信息。

【储存条件及有效期】

18-25℃保存，有效期2年。本品易感染细菌，需无菌条件操作。无菌条件下操作，启封后置常温保存。如4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。

【参考值（参考范围）】

本实验中性粒细胞提取率大于80%。

下表为成年人外周血中各种细胞的数量及比例，用户可适当进行参考。

红细胞

白细胞

血小板

（4.0-10.0）×109

含量（个/L）

（4.0-5.5）×1012

中性粒细胞

淋巴细胞

单核细胞

（1.0-3.0）×1011

50%-70%

20%-40%

3%-8%

【相关实验技术方案】

1.所获得中性粒细胞的培养技术。

2.所获得中性粒细胞的核酸提取技术。

3.所获得中性粒细胞的鉴定方法

A.流式细胞技术

B.免疫组化技术

C.原位杂交技术

D.PCR技术

【可能存在的问题及解决方法】

1.由于血液粘度、细胞密度等差异可能造成的问题及解决方案如下表所示：

出现情况

出现原因

建议解决方案

离心后目的细胞存在于血浆层或稀释液层

转速过小或离心时间过短

适当增减转速

离心后目的细胞存在于分离液中

转速过大或离心时间过长

离心后白环层弥散

细胞密度过大

调整细胞密度

离心后白环层太浅或看不见

细胞密度过小

2.本分离液分离细胞的原理为密度梯度离心，其密度与温度、大气压等密切相关。不同地区客户可根据当地情况对离心条件进行适当调整。建议对离心条件进行调整时，恒定离心时间，对离心转速进行调整。

3.本分离液依照国际标准，全部使用YY级原料，性能指标与国产同类产品略有不同，可能出现红细胞沉降不完全的情况，可以适当加大离心转速。

注：在对离心条件进行调整时，离心转速的加减以50-100g为基数，直至达到Z佳分离效果，

离心力Z小不得小于400g，Zda不得大于1200g。离心时间以20-30min为准。

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