抗甲状腺球蛋白抗体TGA的检测方法

甲亢、慢性甲状腺炎、甲减具有自身免疫病的性质。在这些疾病的患者中，常可测出循环抗甲状腺抗体，如抗甲状腺球蛋白抗体（thyroglobulinantibodyTGA）、抗甲状腺微粒体抗体（thyromicrosomalantibodyTMA）、抗第二胶原抗体、抗甲状腺细胞膜抗体、甲状腺刺激抗体。前二者在临床实验中应用Z广，诊断价值也较大。

应用RIA检测TGA敏感性甚高，且现已有试剂盒供应，操作简便、快速，样品可直接测定。但由于条件所限，目前常用的还是IFF和ELISA法。在纯化TG的基础上，进行ELISA法则具有敏感、特异、快速、简便、可批量检测等优点。特介绍如下。

1．甲状腺球蛋白的纯化将手术摘除的甲状腺洗净，30℃冻存，取出后在冻结状态下用刀削成薄片，加2倍量生理盐水于4~C浸泡过夜（切勿搅拌）。收集浸液，同法再浸泡1次。将2次浸液合并，加硫酸铵使达37％饱和度，4℃静置1～2h，离心除去沉淀。上清内继续加硫酸铵使达42％饱和度，4~C静置2h，2000r／rain离心20rain，收集沉淀物，溶于0．01mol／L，pH7．2PBS中，即为粗提TG。将粗提TG用SephadexG-200柱作凝胶过滤，PBS洗脱，收集diyi蛋白峰，混合，即为纯化的TG。如疑残留有白蛋白，可再流穿抗人全血清-Sepharose4B亲和层析柱。

2．操作步骤用纯化TG（1050pg／mL）包被聚苯乙烯微孔板，每孔0．1mL，37~C1h后，4℃过夜；洗涤（每次3min，共3次，以下同）后加1：10稀释待测血清，每孔0．1mL，设复孔。37％，2h（或45cC，1h）后洗涤；每孔加HRP标记的TG（Z适工作浓度用方阵法滴定）0．ImL，37~C，2h（或45℃，1h）后洗涤；每孔加OPD-U202底物0，lmL，37~C避光反应1520min显色后，加0．05mL2mol／LH2S04终止反应。目测呈色程度，或用酶标仪检测492nm吸光度，计算复孔均值。

3．结果观察目测呈色深浅与标准品孔比较，判定是否为阳性。P／N值大于或等于2．1判为阳性。

4．临床意义血清TGA是诊断甲状腺自身免疫疾病的一个特异性指标。大约60％甲亢，80％90％慢性甲状腺炎患者TGA表现为强阳性。TGA阳性者倾向于诊断为慢性淋巴细胞性甲状腺炎，而较少考虑甲状腺肿瘤，故可作为甲状腺肿块的鉴别。

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