支原体检测试剂盒 CA1080

支原体检测试剂盒 
货号：CA1080 
保存：4℃保存，有效期为2年，Hoechst工作液需要避光保存。 
产品内容： 
Hoechst33258工作液50ml 
固定液 50ml 
抗荧光衰减封片液 10ml 
说明书 1份 
产品简介： 
本试剂盒是利用荧光染料（bisbenzimide,Hoechst33258）检测支原体污染。这种染料会结合到DNA的A-T富
集区域，因为支原体的DNA中A-T含量高（55％～80％），所以可将其染色而被检测到。被支原体污染的
细胞经染色后在细胞周围可看到许多大小均一的荧光小点，即为支原体的DNA染色斑，说明有支原体污染。
Hoechst33258的Zda激发波长为346nm，Zda发射波长为460nm；Hoechst33258和双链DNA结合后，Zda
激发波长为352nm，Zda发射波长为461nm。 
操作步骤：  
贴壁细胞： 
1、被检细胞接种于无菌的6孔细胞培养板中，接种密度为1-2×104
。同时，接种正常无支原体感染的同种细
胞，作为阴性对照。 
2、5天后，先吸去培养液，再加入1ml的固定液，静置20min， 
3、吸去固定液，晾干。 
4、于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液（Hoechst33258工作液须覆盖全部被检细胞），37℃避光放
置15-20min或室温静置20～30min。 
5、吸去Hoechst33258工作液，加入2ml灭菌超纯水洗涤三次，直接风干。风干后加入一滴封片液，并以盖
玻片覆盖。 
6、荧光显微镜观察。用紫外激发光激发，观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状荧光小点。 
悬浮细胞： 
1、收集需检测的细胞，1500rpm，5min。 
2、将收集的细胞涂片于载玻片上，再加1ml的固定液，静置20min。 
3、吸去固定液，晾干。 
4、于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液（Hoechst33258工作液须覆盖全部被检细胞），37℃避光放
置15～20min或室温静置20～30min。 
5、吸去Hoechst33258工作液，用无菌水洗涤玻片3次，直接风干。风干后加入一滴封固液，并以盖玻片覆
盖。 
6、荧光显微镜观察。用紫外激发光激发，观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状荧光小点。 
结果判断（参考）： 
阴性：仅见细胞的细胞核呈现黄绿色荧光。 
阳性：除细胞外，细胞周围可见大量的大小均一的荧光着色颗粒。 
注意事项： 
1．Hoechst工作液对人体有害，请注意防护。 
2．固定液有刺激性气味，建议在通风橱进行固定。 
3．支原体检测时，Z好用不含抗生素的培养液培养2～3代，这样容易避免假阴性结果。 
4．本试剂盒用于6孔板检测时，可以进行50次检测反应。 
5．检测支原体污染，可以使用支原体GXVero细胞，这样可以提高检测灵敏度，即将被检测样品接种于Vero
细胞进行检测。 

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