细胞原代培养实验

来源：内容来源于网络浏览量：556次

【导读】实验方法原理将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过...

实验方法原理将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。因此，较为严格地说是指成功传代之前的培养，此时的细胞保持原有细胞的基本性质，如果是正常细胞，仍然保留二倍体数。但实际上，通常把diyi代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。Z常用的原代培养有组织块培养和分散细胞培养。

实验材料

胎鼠新生鼠

试剂、试剂盒

1640培养基牛血清胰酶Hank’s液碘酒

仪器、耗材

培养箱培养瓶青霉素瓶小玻璃漏斗平皿吸管移液管纱布手术器械血球计数板离心机水浴箱

实验步骤一、实验材料准备

1.Hank’s液配方：KH2PO40.06g，Nacl8.0g，NaHCO30.35g，KCl0.4g，葡萄糖1.0g，Na2HPO4H2O0.06g，加H2O至1000ml。Hank’s液可以高压灭菌。4℃下保存。

二、具体操作

1.将孕鼠或新生小鼠拉颈椎致死，置75%酒精泡2-3秒钟（时间不能过长、以免酒精从口和肛门浸入体内）再用碘酒消毒腹部，取胎鼠带入超净台内（或将新生小鼠在超净台内）解剖取肝脏，置平皿中。

2.用Hank’s液洗涤三次，并剔除脂肪，结缔组织，血液等杂物。

3.用手术剪将肝脏剪成小块（1mm2），再用Hank’s液洗三次，转移至小青霉素瓶中。

4.视组织块量加入5-6倍的0.25%胰酶液，37℃中消化20-40分钟，每隔5分钟振荡一次，或用吸管吹打一次，使细胞分离。

5.加入3-5ml培养液以终止胰酶消化作用（或加入胰酶YZ剂）。

6.静置5-10分钟，使未分散的组织块下沉，取悬液加入到离心管中。

7.1000rpm，离心10分钟，弃上清液。

8.加入Hank’s液5ml，冲散细胞，再离心一次，弃上清液。

9.加入培养液1-2ml（视细胞量），血球计数板计数。

10.将细胞调整到5×105/ml左右，转移至25ml细胞培养瓶中，37℃下培养。

注意事项

仪器网-专业分析仪器服务平台,实验室仪器设备交易网,仪器行业专业网络宣传媒体。

2004-09-11 09:23:06

标签：

收藏(0) 赞(0) 踩(0)

随时了解更多仪器资讯，求购、招标、中标信息实时更新，厂商招商信息随时看。大量、齐全、专业的仪器信息尽在仪器网（yiqi.com）。扫一扫关注仪器网官方微信，随时随地查看仪器用户采购、招标需求！

您可能感兴趣

肿瘤细胞原代培养实验2004-09-11 09:23:05

实验方法原理肿瘤细胞的原代培养与正常细胞的原代培养的条件基本相似。一般常用原代细胞的基础培养基，10%血清浓
大鼠肺成纤维细胞原代培养实验2004-09-11 09:23:05

实验方法原理将大鼠的肺成纤维细胞从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置合适的生长
大鼠肝星状细胞原代培养实验2004-09-11 09:23:06

大鼠肝星状细胞原代培养可以：（1）用于细胞保种；（2）用于分子生物学研究；（3）用于基因治疗研究。实验方法原
分享：小鼠肝细胞原代培养实验步骤2004-09-26 09:23:06

一、实验材料准备1、动物：小鼠；2、试剂：DMEM(含血清)、无血清DMEM培养基、胰酶、PBS；3、器械：
滑膜细胞原代培养|实验技术服务2004-11-23 09:23:21

关键词:简介：世界顶尖品牌原装正品，质量保证,价格优惠。pCzn1质粒+ArcticExpress宿主菌低温
细胞培养实验三要素2004-07-09 09:55:17

要素一、无菌实验技术 1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台（laminar flow）以紫外灯照射30-6
怎么用培养箱进行初代细胞培养实验？2004-07-09 09:55:21

初代培养或原代培养，是从供体获取组织后的首次培养。其最大优点是：组织和细胞刚刚离体，生物性状尚未发生很大的变
神经细胞培养实验用的各种基质2004-07-25 09:29:07

培养细胞的完全培养基由基础培养基（如MEM）和添加剂（如血清或无血清培养用的某些确定的激素及生长因
细胞培养实验中需要的材料2004-07-25 09:29:07

1.种类1.1.细胞培养实验用品均为无菌，除了玻璃容器与pasteurpipet外，其它均为塑料无
一个标准的细胞培养实验室应该是这样的……2004-07-29 09:50:25

导语你所在的细胞培养实验室是功能完善的细胞培养实验室吗，不但要布局合理，还要操作安全、方便，并能避免污染，既

版权与免责声明

①本文由仪器网入驻的作者或注册的会员撰写并发布，观点仅代表作者本人，不代表仪器网立场。若内容侵犯到您的合法权益，请及时告诉,我们立即通知作者，并马上删除。

②凡本网注明"来源：仪器网"的所有作品，版权均属于仪器网，转载时须经本网同意，并请注明仪器网(www.yiqi.com)。

③本网转载并注明来源的作品，目的在于传递更多信息，并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性，不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时，必须保留本网注明的作品来源，并自负版权等法律责任。

④若本站内容侵犯到您的合法权益，请及时告诉,我们马上修改或删除。邮箱：hezou_yiqi