细胞实验室常见的细胞污染及如何预防？

1.细胞污染的种类

在细胞实验室里，细胞污染一般可分为微生物污染和真核生物污染。其中微生物污染包括真菌和酵母、细菌、支原体等。而真核生物一般是细胞系间的交叉污染。

细菌、真菌或酵母的污染很容易辨识，直接可通过培养基颜色变化、显微镜下观察便可判断。如细菌污染后细胞培养基变黄色，而且镜下有小黑点，且有规律的运动。而酵母污染后培养基变紫色，镜下可见透明、且连成一串的圆形。但如果是支原体污染的话，由于Z开始支原体生长缓慢，而且显微镜下难以看出，因此很难发现。

真核细胞污染是指一种细胞污染了另外一种细胞，主要发生在操作不当，尤其是长时间进行某些细胞系的研究而传代时。目前越来越多的科研人员发现了细胞间污染这一被忽略的问题。据不完全统计，约有 15-20% 的细胞存在细胞间污染。

2.细胞污染对实验的影响

不管发生哪种类型的污染都会造成相同的结果，即必须重新做实验，因此浪费工作时间，增加实验成本，降低实验重复性。而且以污染细胞和未污染细胞为基础进行实验时，有可能得到的实验结果完全不同。更为严重的是，如果你所研究的细胞是另外一种细胞的话，那所做的工作会徒劳无功。

目前，学术界对细胞污染的报道越来越多。《The Scientist》期刊的 2008 年 9 月 16 日期发表了 Megan Scudellari 撰写的题为 A case of mistaken identity 的文章，文中指出现已发表的 650 多项研究中所用的乳腺癌细胞可能并不是真正的乳腺癌细胞。

科罗拉多大学的遗传学家 Christopher  Korch 发现，在过去 15 年期间，他发表的文章中有 78 株广泛应用的细胞系被证明受到了污染。 其中有两株存在严重污染的"明星"细胞系。一个是 HEp-2 细胞系，有 5789 篇文章中使用的 HEP-2 存在 HELA 细胞的污染；另外一个是 INT 407 细胞系，有 1336 篇文章中使用的这种细胞系同样受到了 HELA 细胞的污染。这篇题为 〈Line of Attack 〉 的文章发表 2015 年 〈Science〉 杂志上。

3.如何预防细胞污染

对于细胞培养实验室来说，Z重要的是杜绝一切可能的污染源。污染的来源可分为直接和间接两类。直接污染指使用试剂带来的污染或者所培养的细胞已经被污染。间接污染可能来自于实验室、实验设备或者我们自己本身。因此，如何预防细胞污染的发生是细胞实验室日常工作的重中之重。

1、如果实验室引入一种新的细胞，或者一直培养保存的细胞，但对保存细胞从未检测过，就有可能给实验室带来污染。因此使用前先检测新引入细胞株，或检测保存细胞是否纯净无污染。

2、对于培养基等试剂的选择，必须在符合 GMP/GLP 规定的厂房生产，并且需要对血清进行常规污染检测，以及建立良好的分装习惯和体系。

3、实验室是否保持洁净，实验设备是否保持无菌，以及操作环节的正确操作，都可避免污染产生。因此必须遵照严格的无菌操作规范和管理。