在细胞培养实验室,凡是细胞培养体系中的外来成分或成分变化,都应视为污染,细胞污染不能完全被消除,但能减少其发生的频率和后果的严重性。细胞污染根据污染源主要可以分为物理性,化学性和生物性污染。
物理性污染通过影响细胞培养体系中的生化成分,从而影响细胞的代谢,如温 度、放射线、振动、辐射(紫外线或荧光)会对细胞产生影响。常见的例子有:培养箱温度过高、周围放置能引起机械振动的设备、试剂放在有玻璃门的冰箱中长期受到光照等。物理性污染常常被人们所忽视或被笼统地归为化学性污染。
培养环境中许多化学物质都可以引起细胞的污染。化学物质并不总是YZ细胞的生长,某些化学物质如激素就可促进细胞的生长。未纯化的物质、试剂、水、血清、生长辅助因子及储存试剂的容器都可能成为化学性污染的来源。为了避免金属离子、有机分子、细胞内毒素等物质对水的污染,在配制液体,清洗容器时必须使用不含杂质的超纯水。细胞培养使用的所有物质都应是高纯度的,并经过权威机构的鉴定,实验者本人也应对上述成分进行纯度鉴定。同时,正确配置和储存培养液及试剂也是非常重要的,应该采取标准的操作步骤,避免液体体积计算错误,混用类似化合物等错误。
微生物污染的原因可分为2个阶段:实验准备阶段和实验操作过程。准备阶段的原因包括:实验耗材灭菌不彻底;细胞房清洁度不够,增加微生物污染风险;超净台洁净度不够,消毒不够彻底,紫外线没有预先照射足够时间,表面没有用酒精擦拭;没有带无菌乳胶手套;试剂本身已经污染,没有检测出来。实验操作中的污染,往往是不够严谨,粗心大意造成,如:手从无菌试剂的上方经过;移液器操作不当,液体接触到移液器前端;移液管吸液过猛;枪头没有更换,较差污染等。
细胞污染和细菌污染不同,细胞污染是由于在培养过程中各种细胞同时进行,而所用器具或液体混杂使用所致。这种污染没有微生物存在,但使培养细胞不同种类之间发生混乱,细胞生长特性,形态发生变化。污染过的细胞由于种类不纯,无法进行实验研究。
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