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　　BUNSEN本生带您了解ELISA试剂盒失败的原因

　　成功的实验是个循序渐进的过程影响EL ISA实验结果的因素有很多只有的掌握了实验的细节才能购做出好的实验。 您可知您的ELISA试剂盒实验为什么会失败?下面天津本生小编带大家了解一下。

　　一、标本的影响

　　溶血标本及混有红细胞的血清采用E1 ISA法检测易产生假阳性。可能是溶血血清中含有过氧化酶物质(红细胞或血红蛋白中的亚铁血红素)在洗涤过程中往往难以洗脱它可使H202释放出原生态氧 (0)从而催化底物四甲基联苯胺生成可溶性的有色物质即显蓝色产生假阳性。所以严重溶血标本禁用。

　　二、标本受细菌污染

　　因菌体中可能含有内源性辣根过氧化物酶因此 被细菌污染的标本同溶血标本样 亦可产生非特异性显色而干扰测定结果。

　　三、标本保存不挡

　　在冰箱中保存过久的标本在间接法ELISA测定中会导致本底过深 造成假阳性;为克服 上述干扰ELISA试剂盒测定的血清标本宜为新鲜采集;如不能立即测定5d内测定的血清标本可存放于4°C,1周后测定的血清标本应低温冻存 ;冻存后融解的标本 蛋白质局部浓缩分布不均 应充分混合后再测定但混匀时应轻柔不可强烈振荡。

　　四、标本凝固不全

　　在工作中有时为了争取时间快速检测 常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清使血清中仍残留部分纤维蛋白原 在EL ISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块易造成假阳性结果 ;因此血波标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清。

　　ELISA试剂盒 本生一次性实验室耗材移液管 多种规格 本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。

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　　一、标本的影响

　　溶血标本及混有红细胞的血清采用E1 ISA法检测易产生假阳性。可能是溶血血清中含有过氧化酶物质(红细胞或血红蛋白中的亚铁血红素)在洗涤过程中往往难以洗脱它可使H202释放出原生态氧 (0)从而催化底物四甲基联苯胺生成可溶性的有色物质即显蓝色产生假阳性。所以严重溶血标本禁用。

　　二、标本受细菌污染

　　因菌体中可能含有内源性辣根过氧化物酶因此 被细菌污染的标本同溶血标本样 亦可产生非特异性显色而干扰测定结果。

　　三、标本保存不挡

　　在冰箱中保存过久的标本在间接法ELISA测定中会导致本底过深 造成假阳性;为克服 上述干扰ELISA试剂盒测定的血清标本宜为新鲜采集;如不能立即测定5d内测定的血清标本可存放于4°C,1周后测定的血清标本应低温冻存 ;冻存后融解的标本 蛋白质局部浓缩分布不均 应充分混合后再测定但混匀时应轻柔不可强烈振荡。

　　四、标本凝固不全

　　在工作中有时为了争取时间快速检测 常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清使血清中仍残留部分纤维蛋白原 在EL ISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块易造成假阳性结果 ;因此血波标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清。

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　大鼠ELISA试剂盒运用的基本原理就是将抗原抗体固定到特定的载体上进行反应，并通过酶催化底物发生化学变化，将抗原抗体反应通过颜色的办法显现出来。

　　固相吸附蛋白对错特异性的，在包被目的免疫蛋白后，未吸附蛋白的固相表面依然有吸附其它蛋白的才华，为了确保抗原抗体反应的特异性，因而被剩余的固相表面应该用抗原抗体反应无关蛋白封闭，也可用脱脂奶粉、明胶、牛血清代替。酶可以通过共价键与抗原或抗体衔接构成结合物，当抗原抗体反应的时分，被检测靶方针中也结合了酶分子。

　　大鼠ELISA试剂盒该还具有以下特性：

　　特异性：大鼠ELISA试剂盒的特异性与试剂盒的要害组分、抗体对有关，若抗体对中为多抗，另一个有必要为单抗，建议运用双单抗;

　　简便性：在高质量数据的情况下，实验时间越短，操作越便利，越简略遭到用户等候，这也无妨作为选择试剂盒的一个方针;

　　简易：以简略的一步反应取代惯例法的五个进程;

　　通用：适合于绝大多数一抗体,并且不需要二抗体反应;

　　便利：以1个小时取代惯例法的3-5个小时;

　　活络：具有与惯例法相似的活络度;

　　重现性好：实验成果重现性好;

　　经济：抗体和试剂可重复运用4-5次。

　　结合在抗原抗体中的酶分子，可以促进底物发生颜色反应，检测人员可以裸眼查询，可以通过颜色来断定是否有免疫反应的存在，通过颜色的深浅判别标本中相应抗原或抗体的含量，也可借用酶标仪在恰当的波长读取吸光度值。

　　将抗原抗体反应固相化，即实验中的包被环节，使抗原或抗体吸附于固相载体表面。其机制可能是聚苯乙x表面间的疏水基团可以无选择性地吸附蛋白分子。此物理性吸附不损坏蛋白分子结构，坚持其生物学特性和免疫学活性。

　　大鼠ELISA试剂盒本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。

　　BUNSEN本生Elisa试剂盒实验的技巧及注意事项

　　在操作elisa试剂盒实验前，不少老师会找寻很多的相关实验资料，网上的资料一大堆，然而真正所能够需要用到的技巧和注意也就那几条，熟练的了解并掌握之后再应用到实验中就会简单的多。

　　一、加样的经验总结

　　加样或加试剂时，请注意在吸取标本/标准品，酶结合物或底物时，个孔与一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的 “预孵育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间控制 在10分钟内，如标本数量多，推荐使用多道移液器加样。

　　二、孵育的三条必知

　　1.为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标 板加上盖或覆膜，以避免液体蒸发;

　　2.洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;

　　3.同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。

　　三、ELISA洗涤小技巧

　　洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直 接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响*后的酶标仪读数。

　　四、反应时间的控制

　　加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如，每隔 10分钟)，如颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。

　　五、操作说明

　　1.封板膜只做一次性使用。

　　2.标本中待测物质含量过高时先将样本稀释一定倍数后再测定，计算时请乘以稀释倍数。

　　3.各步加样均使用加样器，并经常校对其正确性，一次加样时间控制在5分钟内(标本数目多的时候，上海研域推荐使用排枪加样)。

　　4.液体标本置4℃保存应小于1周，-20℃或-80℃均应密封保存，-20℃不应超过1个月，-80℃不应超过2个月;标本溶血会影响检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

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BUNSEN本生Elisa试剂盒买2增1,限96T

Elisa试剂盒 抗体本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。本生移液管

　【BUNSEN本生】关于ELISA试剂盒如何保温，你知道多少?

　　在ELISA试剂盒中一般有两次抗原抗体反响，即加标本和加酶结合物后，抗原抗体反响的完结需求有一定的温度和时刻，这一保温进程称为温育，有人称之为孵育，在ELISA试剂盒中似不恰当。

　　1. 为什么ELISA反响总是需求一定时刻的温育?

　　ELISA属固相免疫测定，抗原、抗体的结合只在固相表面上发生，以抗体包被的夹心法为例，加入板孔中的标本，其间的抗原并不是都有平等的和固相抗结合的时机，只有贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触，这是一个逐步平衡的进程，因而需经扩散才能到达反响的结尾。在这以后加入的酶标记抗体与固相抗原的结合也同样如此。

　　2. 温育常选用的温度有43℃、37℃、室温和4℃等。

　　37℃是实验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体结合的适宜温度，在建立ELISA方法作反响动力学研究时，实验表明，两次抗原抗体反响一般在37℃经1～2小时，产品的生成可达高峰。为加快反响，可进步反响的温度，有些实验在43℃进行，但不宜选用更高的温度。抗原抗体反响4℃更为，在放射免疫测定中多使反响在冰箱中过夜，以构成多的沉淀。但因所需时刻太长，在ELISA试剂盒中一般不予选用。

　　ELISA试剂盒保温的方式除有的ELISA仪器附有特制的电热块外，一般均选用水浴，可将ELISA试剂盒板置于水浴箱中，ELISA板底应贴着水面，使温度敏捷平衡。为防止蒸腾，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔，此时可让反响板漂浮在水面上。若用保温箱，ELISA试剂盒应放在湿盒内，湿盒要选用传热性良好的资料如金属等，在盒底垫湿的纱布，后将ELISA板放在湿纱布上。湿盒应先放在保温箱中预温至规则的温度，特别是在气温较低的时候更应如此。

　　无论是水浴仍是湿盒温育，反响板均不宜叠放，以确保各板的温度都能敏捷平衡。室温温育的反响，操作时的室温应严厉限制在规则的范围内，规范室温温度是指20～25℃，但具体操作时可根据说明书的要求控制温育。室温温育时，ELISA试剂盒只需平置于操作台上即可。应留意温育的温度和时刻应按规则力求准确。为确保这一点，一个人操作时，一次不宜多于两块板一起测定。

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　　即用型透析袋知识点
 

 　　透析袋的选择：

　　(1) 根据样品溶剂和确定的透析液，选择CE或RC材料的膜:(2) 根据实验纯座需求选择生物技术或标准的透析袋(3) 正确选择扁平宽度:

　　透析袋扁平宽度的选择取决于样品体积和透析容量。较小的透析管透析更快;较大的透析管因扩散距离较长透析较慢。为易于使用，建议使用总长(包括闭合夹和顶部空

　　间)为大约10-15cm的透析袋(4)   根据杂质和要保留的物质的分子量选择一定截留分子量的选析袋:a析袋的截留分子量是指对该分子量的物质的截留率能达到90-95%，如10000截留分子量的透析袋对于10000的物质，截留率是90-95%(5-10%会出去)b.对于奈质,若想去除的干净,需选择100倍的截留分子量的透析袋,如杂质是1000,那选择10万载留分子量的透析袋才能将杂质去除;但同时考虑要保留的物质的分子量;所以，要想得到纯座较高的物质，就尽量选择大一点的我留分子量，产品收率会降低;若想获得较高的产品收率就选择要和保留的产品的分子量相同的透析袋。

　　析袋的使用：

　　下述透析程序是一个普渔的基程透析过程。在开始透析之应考虑到许多变数。透析样品落剂、顾的化学相客性、膜的假留分子量,透析溶剂、透析体积、温度等变量都会影响透析速率,因此,一些应用中下述透析过程可能需要适当的变化a,把适量的透析液(缓冲液)加入透析装置。透析液的体积应为样品体积量的100倍。(例如:在一升透析液中透析10毫升的样品)

　　b.裁剪适当长度的透析管。预留一段额外长度(约占总样品体积量的20%)作为头部空间c.把析管插入打开的透析夹，在约超出遗析夹3-5毫米的位置再夹住。不要折叠透析城d.由透析管开口端将样品装入。调整一下顶部空问的长度，实紧透析夹

　　e.把透析样品放在合适的透析缓冲涨中

　　1.透析要根据具体的应用需求。通常情况下，允许过夜透析。在持续透析的过程中，至少要进行3次全部更换透析液。建议在(透析后12-4小时，6-8小时和10-14小时(第2天早晨)更换透析液。在一次透析瘦的更换后要至少继续进行2小时的透析。

　　注意事项：

　　a.对于预湿型和甘油处理的透析袋使用一定要用去离子水冲洗掉防腐剂和甘油后使用b.透析袋不能在纯水中储存，会长菌，用1张苯甲酸钠落液储存c  样品按推荐的单位长度容量加样，不可多加，样品浓度不可太大，否则容易导致膜涨破d.样品和透析变体积比一般是1:50.500

　　8.对于高浓座污染物，样品可能需要较长的时间透析，选析凌需要更规憾的更换f.透析温座主要取决于样品。温座限制主要取决于膜的类型。纤维素透析袋可以承受的温度高达37心，再生纤维素透析袋可以承受的温度高达60C。g.在适当的储存情条件下，保质期为两年。

　　推荐产品： 纤维素透析袋(100-500)，10mm,0.32ML/CM

　　纤维素透析袋(100-500)，16mm,0.79ML/CM

　　纤维素透析袋(100-500)，24mm,1.8ML/CM

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　　透析袋 > 即用型   本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。

　　天津本生将您怎样选购ELISA试剂盒?

　　今天天津本生小编给大家科普一下怎样选购适合ELISA试剂盒。目前市场上的ELISA试剂盒质量参差不齐，如何去挑选适合自己的试剂盒就显得特别重要，具体有以下几点可供参考：

　　一、特异性

　　ELISA试剂盒的特异性与试剂盒的关键组分，抗体对有关，若抗体对中之一为多抗，另一个必须为单抗，建议使用双单抗。

　　二、灵敏度

　　灵敏度反映的是试剂盒检出被检物质的能力，用户可根据自己样本中待检指标的量选择合适的试剂盒，如果待检指标量很低，一般的试剂盒不能满足要求，可选择高敏的ELISA试剂盒。

　　三、重复性

　　科学实验讲求重复性，一般ELISA试剂盒，其板内和板间变异系数应该控制在15%以内。

　　四、简便性

　　试剂盒在保证高质量数据的情况下，实验时间越短，操作越便利，越容易受到用户欢迎!这也不妨作为选择试剂盒的一个指标。

　　五、经济性

　　进口分装试剂盒因为省去不少物流和报关费用，与国外进口试剂相比价格上有比较大的优惠，而且能提供比较灵活的包装规格，特别是48T等小包装，目前很多客户因为对品牌的信任度问题，主要还是选择国外进口，但是国内进口分装比较成熟的公司仍然是一个非常好的选择。

　　本生生物公司供应：ELISA试剂盒,动物血清,荧光定量PCR耗材,移液器吸嘴,微量离心管,进口冻存管,细胞培养皿,培养板,培养瓶,进口吸头,仪器及手套,色谱耗材,针头过滤器等。

　　本生教您如何选择ELISA试剂盒的正确步骤

　　ELISA试剂盒以灵敏度较高、特异性较好的特点在上得到了广泛的应用，然而实验新手们面对各种各样、动则上上千种的ELISA试剂盒，内心应该是崩溃的。

　　各种厂家、品牌，各种种属，各种因子，琳琅满目，质量良莠不齐，如何浪里淘金，选择既符合研究需求，又品质上乘的 ELISA 试剂盒呢?

　　本生技术小编教你几招，一眼“相中”、最合适的那个ELISA试剂盒!

　　首先，你要明确研究种属：

　　一般来说，厂家都会在产品名称上标明种属，且为单词，检索种属的常用语言为英文。

　　如果您需对不同物种的同一因子进行定量，建议优先寻找适用于多个种属的 ELISA 试剂盒，产品介绍中会注明

　　其次，要明确样本类型：

　　不同厂家验证样本类型不同，即使同一厂家不同试剂盒，其验证样本类型也不尽相同。特别是复杂的血浆样本，根据样本处理方式的差异，分为 EDTA 血浆、肝素抗凝血浆和柠檬酸盐血浆，因此购买前需仔细核对。

　　第三步：要会预测自己的目标因子的浓度

　　一般来说，待测因子可以根据经验或资料获得参考的检测范围，且正常人与疾病状态存在差异。如热门炎症因子 IL-6，正常人血清中浓度为 3.13 pg/mL，病人会显著，CAR-T 回输病人血清中的 IL-6 浓度甚至为正常人的 200 倍以上。

　　因而，必要时进行样本的稀释及选择合适检测范围的试剂盒极其重要。

　　若浓度太低，可选择高敏试剂盒;若不确定待测浓度或样本间浓度差异较大，建议使用检测动态范围更宽的化学发光法ELISA试剂盒。

　　如同样为 IL-6 ELISA 试剂盒，各类型检测范围差异较大，需要根据实际情况选择合适的试剂盒。

　　第四步：检查试剂盒进行过哪些质控

　　质控数据在说明书中即可找到，在购买前检查试剂盒是否进行过严格的质控实验，包括批次内(Intra-Assay)及批次间(Inter-Assay)、掺入回收实验、线性稀释实验及交叉反应测试等，每个数据都看一下，确保的结果重现性及准确性。

　　第五步：确定需检测的因子数量

　　如果待测因子超过 5 个，且样本量较小时，单因子 ELISA 检测方法并不是选择。

　　建议考虑多因子检测方法，如固相芯片(样本数量一般 5 个以内，检测指标可达上百个)及 Luminex 液相芯片方法 (检测样本多达 80 个，检测指标多达 50 个)或微流控 ELISA 检测系统 Ella。

　　可节约样本及时间成本，也可保证检测结果准确。

　　第六步：预算评估

　　预算往往是大家优先考虑的，实际上，不能够一味讲究产品价格，更需要考虑性价比。生物学是极其严谨的科学，一致性的实验结果是基金、文章等评审过程中的因素，即使低廉的价格，不能够重现结果，也是资源的另一种浪费。

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　　本生带您了解如何选购合适的细胞培养耗材?

　　细胞培养广泛应用于医学的各个领域，要适应细胞的生长环境、保证实验的顺利进行，选择合适的细胞培养耗材是关键。那么，我们应该如何选购合适的细胞耗材呢?

　　选购合适的细胞培养耗材，可从以下几方面入手：

　　细胞培养瓶

　　1、培养方式：细胞培养技术分为贴壁培养与悬浮培养两种，一些细胞耗材仅适用于贴壁细胞或悬浮细胞培养中的一种，也有两种方式都适合的细胞耗材，在选购细胞耗材时首先要确定细胞培养方式，选择适合该方式的细胞耗材。

　　2、培养面积：大型的细胞实验需要较大培养面积的细胞耗材做支撑，小型的实验可以选择小面积的耗材，可根据实验大小，通过细胞密度来确定细胞耗材的培养面积。

　　3、耗材种类：常见的细胞耗材种类包括培养皿、培养板、培养瓶等，这几种耗材各有特点、形状各异，具体可根据实验需求和个人喜好而定。

　　96孔细胞培养板

　　4、材质选择：细胞耗材的材质分为玻璃和塑料两种，玻璃材质可反复使用，塑料材质多为一次性耗材，不同的细胞对胰酶的敏感度不一样，在选择时要根据细胞类型而定。

　　以上是关于细胞耗材选购的几点建议，细胞对于环境的要求较高，做好细胞耗材的选购工作需要在日常的工作中多学习、积累相关知识。

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　　本生—ELISA试剂盒检测注意事项汇总

　　以下是本生技术小编总结：影响ELISA检测的关键因素，也是众多ELISA 用户在实验中经常遇到的问题及解决方案：

　　Q1：为什么所有试剂和检测样本要平衡至室温后再进行加样操作?

　　A1：温度是ELISA结合反应的重要影响因素。为了使所有样本在一致的温度下反应，实验前务必将所有试剂平衡至室温，包括检测样本。避免因温度的动力学反应差异而导致ELISA检测结果的不准确。

　　Q2：为什么标准曲线线性较差?

　　A2：按照推荐方式保存标准品;溶解标准品之前需短暂离心，彻底收集粉末;确保标准品完全溶解和混匀(大约10min)，然后再进行后续的系列稀释步骤，确保每一步都充分混匀且精确移液;显色的恰当终止;选择合适的数学拟合方程绘制标准曲线。

　　Q3：ELISA实验为什么必须设置复孔?

　　A3：为获得更准确的实验结果，强烈建议标准品及样本进行复孔检测。

　　因为复孔检测可以：

　　★计算平均值，确保实验结果更准确;

　　★解决实验中误操作造成的跳孔现象;

　　★计算CV值，对实验的操作和试剂盒的精密度进行评估。

　　Q4：为什么实验过程中孵育、洗涤需要振荡?如何振荡?

　　A4：振荡孵育使反应更充分，振荡洗涤使背景更干净。建议使用酶标专用96孔微孔板振荡器。

　　孵育过程振荡，可以加快、加强抗原抗体间的相互碰撞接触，使得反应过程更加完全，OD值通常会比未振荡孵育的结果要高;洗涤过程振荡，可以使洗板更干净，在很大程度上能降低背景值，同时可以提高试剂盒检测的灵敏度。

　　具体操作请参见说明书或致电劲马生物

　　Q5：何时终止ELISA反应?

　　A5：ELISA实验最终需要酶催化底物显色反应来完成，在最合适的时间终止反应是ELISA实验成功的重要因素。在HRP-TMB酶反应系统中，当最高浓度标准品颜色不再变深，倒数2-3个浓度标准品颜色开始有浅蓝色时，便需要终止反应;或者也可以根据最高浓度标准品孔在620nm的OD值来决定，OD620=0.9-0.95之间时即可终止。

　　Q6：为什么酶标仪读数时必须选用双波长?

　　A6：首先，酶标仪使用前务必预热10-15min，使测读结果更稳定。其次，ELISA实验采用双波长测定吸光度，可以排除单波长检测时的测定干扰(标本的浓度，干扰色等)。一般采用波长作为参照波长，在参照波长下，检测物的吸光值最小，检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收;因此，双波长测定，可最大限度的消除指纹、杂质及不透光的物质对酶标仪读数带来的误差，以保证实验数据的准确度。

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　　本生生物ELISA试剂盒促销通知!

　　ELISA试剂盒检测种属：人、大小鼠、豚鼠、兔子、猪、犬、牛羊、鸡鸭、猴ELISA试剂盒等种属，天津本生生物供应。

       促销时间：

     11.22—12.22 时间有限，数量有限

       48T/96T——700/950

　　应用范围：可用于科研实验。

　　本生生物ELISA试剂盒促销通知!我司由具有行业背景和丰富市场经验的业人士组成，于为生命科学研究域提供产品，为广大科研工作者提供服务。 既能满足研发类客户对产品种类、包装的特殊要求，也能满足生产型企业从小试、中试到规模化生产各个阶段的综合需求。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。

　　天津本生-ELISA试剂盒实验操作技巧!

　　ELISA试剂盒在国内有许多种叫法，例如：ELISA检测试剂盒、ELISA Kit、酶联免疫试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒、酶联免疫分析试剂盒、酶免试剂盒等，比较常见的叫法是 ELISA检测试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒等;ELISA试剂盒适用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗体ELISA检测，自从60-70年代问世以来，得到*科研工作者的认可及推崇，在欧美及中国获得很大的推广，尤其是国内生化领域的长足发展。Elisa生物试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。为了保证ELISA试剂盒实验质量，我们需要掌握一些小技巧以助于实验的成功，那么ELISA试剂盒的操作

　　技巧您知道吗?如若您掌握了这些实验技巧之后，在做ELISA实验中，试验起来会更熟练，大大的降低了实验过程中的风险，ELISA试剂盒实验的入门新手掌握了这些知识后，操作起来都会快的多。

　　ELISA试剂盒17个相关操作技巧如下：

　　1.切记在加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。

　　2.合理安排检测量，以免反应板过多造成洗板等待时间长。

　　3.在吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。

　　4.务必做双孔实验，这样才既能保证数据的准确性，又能反映出试剂盒的精密度。

　　5.样品稀释液应用加液器加注，并经常校对其准确性。

　　6.为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。

　　7.未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。辣根过氧化物酶标记抗人IgG工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的辣根过氧化物酶标记抗人IgG工作液。

　　8.ELISA试剂盒实验中，加样后及时放人孵箱，标本较多时，要分批操作。按说明步骤严格控制操作时间，防止孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗彻底。

　　9.剩余样品及废弃物应经121℃高压蒸汽灭菌30分钟，或用5.0g/L次氯酸钠等消毒剂处理30分钟后废弃。

　　10.人ELISA试剂盒洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。

　　11.每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是后加底物溶液及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。

　　12.手工洗板时每次加入洗涤液后。应静置15～30s，不要将一个酶标孑L中的洗涤液溅入另一酶标孔中，防止交叉污染。甩去洗涤液后将酶标板放在毛巾或吸水纸上拍干。

　　13.对样本的结果有疑问时需要使用其他检测方法进行验证。

　　14.没有去离子水或双蒸水时，可以使用娃哈哈纯净水配制溶液，切勿使用自来水。

　　15.在使用微量加样器时，吸取不同瓶子中液体后要更换枪头，即使吸取标准品溶液。

　　16.吸取液体时速度不易太快，以免产生气泡，人ELISA试剂盒吸取的量不够准确。

　　17.吸取液体时要选用量程和需要量接近的微量加样器吸，减少误差。

　　天津本生-ELISA试剂盒实验操作技巧!我司由具有行业背景和丰富市场经验的业人士组成，于为生命科学研究域提供产品，为广大科研工作者提供服务。 既能满足研发类客户对产品种类、包装的特殊要求，也能满足生产型企业从小试、中试到规模化生产各个阶段的综合需求。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。

　　本生阐述：小鼠γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒

　　一、实验原理：

　　本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠γ干扰素(IFN-γ)水平。用纯化的小鼠γ 干扰素(IFN-γ)捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被的微孔中依次加入小鼠γ干 扰素(IFN-γ)，再与 HRP 标记的检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠γ干扰素(IFN-γ)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值)，通过标准曲线计算样品中小鼠γ干扰素(IFN-γ)含量。

　　二、注意事项：

　　1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

　　2. 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

　　3. 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

　　4. 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值大于标准品孔孔的 OD 值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定，计算时请乘以总稀释倍数(×n×5)。

　　5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6. 底物请避光保存。

　　7. 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

　　8. 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

　　9. 本试剂不同批号组分不得混用。

　　三、操作程序

　　四、小鼠γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒产品说明

　　规格：96T、48T

　　小鼠γ干扰素试剂盒性能：

　　1.样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.95 以上。 2.批内变异系数与批间变异系数应分别小于 10%和 10% 。

　　检测范围： 25 pg/mL - 800 pg/mL

　　灵敏度：小低检测浓度小于 1.0 pg/mL

　　保存条件及有效期： 1.试剂盒保存： 2-8℃。 2.有效期： 6 个月

　　小鼠γ干扰素试剂盒本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。

　　本生资讯| ELISA试剂盒的真伪如何鉴别?

　　在国内生物研究蓬勃发展的现在，假冒无视科学研究的严谨性和严肃性，让广大的科研工作者被动造假，严重破坏了科研氛围，扰乱了市场秩序，联科生物整理了一些鉴别这些假冒伪劣ELISA试剂盒的方法，供广大的科研工作者和用户参考，让希望对广大科研工作者有所帮助。

　　购买前

　　【方法一】向厂家索要或从其网站下载说明书，查找ELISA的性能指标：准确度(加标回收率、稀释线性)、精密度(板内差、板间差)、灵敏度、样本值、特异性、校准。一般来说，除了校准不一定每份说明书都有外，其余的指标一般都需要罗列(部分样本需要高倍稀释的，可能没有准确度这个指标)。如果无法提供这些性能指标，则说明该试剂盒可能是假货，或者试剂盒开发过程不够科学严谨，有可能无法检测出真实的样本值。

　　【方法二】对于夸大ELISA涵盖的指标的范围，尤其是不常见的种属，可先去ELISA试剂盒网站上搜索，如果搜索不到该种属的ELISA试剂盒，则有可能是假货，需要小心谨慎。

　　【方法三】将“厂家名”、“ELISA”和“假货”等关键词在网上搜索，有的网站或论坛都会有打假曝光台。

　　购买后

　　【方法一】检查说明书、包装盒的质量，通常假冒伪劣产品为了降低成本，印刷的质量会比较差。其次仔细阅读说明书，如上所示查找ELISA的性能指标。

　　【方法二】

　　Ⅰ.利用干扰实验即可鉴别ELISA试剂盒是否检测目的抗原，方法如下：

　　(1)将针对试剂盒特异性的重组蛋白抗原和试剂盒中的检测抗体配置成antibody:antigen=1:2的混合孵育液

　　(2)37℃孵育15分钟后，代替原试剂盒中的检测抗体

　　(3)后续操作按照试剂盒说明书进行，加检测抗体、酶复合物和底物

　　(4)实验完毕后，检测其标准曲线，如果标准曲线良好则说明加入的目的抗原和试剂盒抗体不匹配，试剂盒检测抗体针对的是非目的抗原，该试剂盒为伪劣假造ELISA试剂盒。

　　(5)如果标准曲线无线性，则说明试剂盒检测抗体已被目的抗原中和或干扰，影响了其实际试剂盒抗体的检测作用，则该试剂盒检测抗体针对的是目的抗原。

　　Ⅱ.如果购买了两盒同一公司的ELISA试剂盒A和B，利用交叉实验即可鉴别ELISA试剂盒是否造假，方法如下：

　　(1)取出购买的试剂盒A的包被板两条。

　　(2)一条包被板加试剂盒A的标准品做标准曲线。

　　(3)另一条包被板加试剂盒B的标准品做标准曲线。

　　(4)后续操作按照试剂盒说明书进行，加检测抗体、酶复合物和底物。

　　(5)实验完毕后，检测两条标准曲线，如果两条标准曲线一致则说明两个ELISA试剂盒检测的同一个指标而非A和B，即该试剂盒为伪劣假造ELISA试剂盒。

　　(6)如果两条标准曲线不一致则说明两个ELISA试剂盒检测的不同指标，试剂盒A只能检测A，不能检测B，即该试剂盒为正常的ELISA试剂盒。

　　ELISA 本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。

　　本生分享ELISA试剂盒质保的七要素
 

　　ELISA试剂盒质量是一个复杂的过程，许多重要的环节都影响到检测的质量。天津本生技术小编分享影响ELISA试剂盒质保的七要素。

　　一、方法学的影响

　　ELISA测定模式包括以下几种：双抗体夹心法、间接法、双抗原夹心法、IgM抗体捕捉法、竞争抑制法，其中竞争抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作时差所引起竞争等因素的影响，结果重复性较差，质量较难控制。

　　第二、试剂因素

　　不同批次的ELISA试剂在制作过程中很难质量一致，即使是通过批批检的项目其检测结果也存在差异，因此必须选择和订购长批号的试剂，并保存条件。严格执行这一标准可以避免因试剂批号改变而重新建立质控体系及重新评估试剂的复杂过程，并且能够结果的稳定性;对于效期短、使用率低的试剂，应当小量分装，每次使用则取分装部分即可，避免反复冻融造成试剂的失效。

　　第三、样本因素

　　标本干扰因素包括内源性干扰因素和外源性干扰因素，者包括类风湿因子、补体、异嗜性抗体、自身抗体等，后者包括标本溶血、标本被污染、标本贮存时间过长、标本凝固不全、冷冻标本的反复冻融等。

　　第四、操作因素

　　ELISA操作步骤复杂，操作不当将引起较大的误差。加样、温育、洗涤、显色、比色。

　　第五、灰区的设置

　　通常情况下，ELISA定性实验以“阳性"和“阴性"来报告结果，两者间有一条分界线被称为“阳性判断值"(cut-off  value，CO值)，这是定性免疫测定结果报告的依据。

　　第六、标本复查

　　ELISA手工检测过程复杂，影响因素较多，即使室内质控在控，也可能因孔间差异而造成结果的差异，因此加大复查力度是结果准确性的可靠方法，比如对HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等项目的可疑、弱阳性标本及少见模式的检测结果进行复查。

　　第七、常表示结果的常用方法

　　1.定性测定

　　2.半定量测定 结果一般以滴度表示。

　　3.定量测定  即用已知量的标准品作一系列稀释后进行ELISA测定，绘制标准曲线，结果以jue对量或单位表示。在ELISA定量检测中每一块反应板都必须绘制相应的标准曲线。

　　ELISA试剂盒  本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。