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DNA测序结果出现重叠峰是怎么回事?

wtdgoi7344 2008-08-26 22:33:47 2272  浏览
  • 我的PCR未扩增产物测序以后,测序部提示测序结果出现重叠峰,这是什么原因造成的呢?

参与评论

全部评论(1条)

  • 一龙太二 2008-08-27 00:00:00
    你的的片段不纯。也即pcr出来产物可能不止一种,杂带影响。建议pcr产物跑胶跑高浓度低电压长距离,这样尽量切割较纯的带回收送去测序。

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DNA测序结果出现重叠峰是怎么回事?
我的PCR未扩增产物测序以后,测序部提示测序结果出现重叠峰,这是什么原因造成的呢?
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如果仅部分解析两个峰形(两个峰仅有部分分开),则可能会认为其是裂峰或双峰。如图4显示的情形。

在图4a中,可观察到与图3极为类似的峰值变形(峰变形),其表明玻璃料被堵塞(筛板堵塞)。

改变柱并未纠正这个问题(更换色谱柱不能解决此问题),所以玻璃料(筛板)堵塞并非导致这一现象的原因。如果柱上样品的质量减少(减少上样量)(图4b),峰形看起来更像是两个峰,而不是一个肩形峰。

这便需要进一步研究,以确定是否存在第二个峰。可以通过修改方法条件来完全分离两个峰(由此进行了进一步的研究,证实了存在第二个峰。

调整方法的条件后,两个峰完全分离)。

图4. 由于存在第二个组分而产生分裂峰。

(a)25ng / mL,和(b)等离子体中10ng/ mL的药物(第二个峰)(10 ng/mL血浆中的药物(第二个峰))。来源[1]。


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