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液相色谱:氨基柱检测时重现性差怎么回事

为甜蜜 2016-12-30 07:52:20 364  浏览
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  • 2360818807 2016-12-31 00:00:00
    相同:兼具分离和分析功能,均可以在线检测主要差别:(1)操作条件差别(2)进样方式差别(3)检测器差别(4)流动相差别(5)分析对象差别详细:(1)操作条件差别GC:加温操作HPLC:通常室温操作,高压泵操作(2)进样方式差别GC:样品需加热气化或裂解HPLC:样品制成溶液即可(3)检测器差别GC:通用型检测器TCD,MSD选择性检测器FID,ECD,FPD,NPDHPLC:通用型检测器RID,ELSD,MSD选择性检测器UVD,PDAD,FD,ECD4)流动相差别GC:流动相为惰性气体,组分与流动相无亲合力HPLC:流动相为液体,流动相与组分间具亲合力,这为提高柱选择性、改善分离增加了因素,且流动相种类较多,选择余地广;流动相极性和pH值选择对分离起重要作用,选不同比例两种以上液体作为流动相可以增大选择性。(5)分析对象差别GC:分析低分子量、低沸点有机化合物和性气体;配合程序升温分析高沸点有机化合物;配合裂解技术分析高聚物;不能检测挥发性差、热稳定性差和离子型样品;占有机物的20%。HPLC:既可分析低分子量、低沸点有机化合物;也可分析中、高分子量和高沸点有机化合物;对于热不稳定、难挥发、有生物活性及离子型化合物均可检测;占有机物的80%。

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热门问答

液相色谱:氨基柱检测时重现性差怎么回事
 
2016-12-30 07:52:20 364 1
液相色谱:氨基柱检测时重现性差怎么回事?
我用氨基柱作为反相用,210nm下检测顺铂,发现柱子有时稳定,能顺利检测,每次用完都用甲醇冲洗,因为流动相只含甲醇/乙腈和少量水,甲醇冲就可以了,但坚持没多久就不行了,主要表现在主峰处受干扰比较严重,或者与前面峰分离度差,高手们知道的指点下,多谢... 我用氨基柱作为反相用,210nm下检测顺铂,发现柱子有时稳定,能顺利检测,每次用完都用甲醇冲洗,因为流动相只含甲醇/乙腈和少量水,甲醇冲就可以了,但坚持没多久就不行了,主要表现在主峰处受干扰比较严重,或者与前面峰分离度差,高手们知道的指点下,多谢了 展开
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浅谈氨基柱的使用


01

氨基柱

氨基柱属于正相色谱柱,键合的氨丙基基团,但实际应用时可以正相使用也可以反相使用。


02

储存

不同的厂家,氨基柱出厂时它的存储液大多数都是在正己烷体系,也有经改性后的如我们CNW NH3-RP柱,出厂时就保存在乙腈里,若是反相使用时就省去了异丙醇过渡的步骤。当测试完样品,冲洗后,也要过渡储存在正己烷或乙腈中,勿留水过夜。


03

应用

正相使用应用较少,常被Silica硅胶柱取代;

反相应用最多,用以检测糖的分离和定性定量。


04

常见问题

新柱刚开始使用峰形好、对称,随着使用针数的增加,表现出峰形差、拖尾等情况,其中,氨基柱的柱头污染、水解、流失是导致柱效和柱寿命的直接原因!


如:


重复性差



峰拖尾


05

维护再生(以反相测糖为例)

 对于重复性问题、保留时间漂移等,可采用纯乙腈低流速冲洗色谱柱,然后换用流动相。流动相采用单相手动混合,准确配置,乙腈-水的比例会对出峰时间和分离度造成较大影响。流动相需充分振荡与脱气操作,并适当延长柱平衡时间避免基线波动;

对于柱头污染,可以采用安装保护柱或在常规的国标方法下,进行基质稀释,从而减小杂质进入色谱柱,若已发生污染可采用60:40的乙腈水低流速冲洗;

对于柱水解流失问题,一般建议氨基柱的流动相水比例不能超过40%,常用75:25的乙腈-水而非70:30的乙腈-水。75:25下能保证5种糖的分离度均大于1.5及以上,也能避免氨基柱在持续较大比例水相下水解,还能规避糖组分(乳糖、蔗糖)析出问题;

设置流速为0.2mL/min,用60:40的乙腈水(含0.1%的氨水)过夜冲洗,后改用纯乙腈进行除氨,用以再生柱。


06

柱修复

当常规的维护方法无法解决时,可进行短暂性修复。

如图:遇到峰严重拖尾的情况,较大可能为柱头污染或塌陷,可尝试更换柱头填料;

修复前:





修复后:





备注:柱修复用于任何色谱柱,以便临时应急实验使用,但无法长久使用。同时,修复风险较大,可能导致柱报废,因此,当遇到维护后也无法解决的色谱行为时,优先建议购买新柱。


07

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上海禾工科学仪器有限公司 

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ACE C18-AR色谱柱介绍Ⅴ- 无与伦比的重现性

ACE C18-AR色谱柱有保证的可重现性和完全可扩展性

与替代选择性同等重要的是zhuo越的可重现性。

固定相的不同批次之间的变化是客户关注的Z常见原因。

ACE固定相通过保持对整个制造过程的严格控制并建立纯度、选择性、保留、柱效和不对称性的严格规范,几乎完全消除硅醇基对HPLC分离的不可预测的不利影响。

因此,如下图所示,所有ACE C18-AR色谱柱均可以保证批次间和柱间的可重现性。


色谱柱:ACE 5 C18-AR, 150 x 4.6mm(除非另有说明)
样品:1)尿嘧啶2)4-羟基苯甲酸3)乙酰水杨酸4)苯甲酸5)2-羟基苯甲酸6)对羟基苯甲酸乙酯
流动相:35:65乙腈/0.1%TFA(溶于水中)
 

温度:22°C  

波长:254nm  

流速:1.00ml/min  


将可用的3μm、5μm和10μm粒径与从毛细管到制备规模的一系列柱尺寸相结合,可确保方法可重现地放大或缩小。上述色谱图显示,当硅胶批次和硅烷批次改变时可以获得zhuo越的可重现性,并当粒径和柱直径改变时可以获得可重现的可扩展性。


材料特性  














 官能团  封端  粒径
(μm)
 
孔径(Å  表面积
(m
2/g)
 
碳载量(%)  Z大 pH 范围  
C18-AR  具有嵌入式苯基官能团的十八烷基    3, 5, 10  100  300  15.5  1.5-10.0a  
C18  十八烷基    3, 5, 10  100  300  15.5  1.5-10.0a  

为了获得Z佳色谱柱寿命,推荐使用2-8的pH范围。

为了在高pH值下增加色谱柱寿命,必须考虑有机缓冲液、低缓冲液浓度、高%有机溶剂和低温。


应用:  

Analgesic Separation  

 

Conditions

Column: ACE 3 C18-AR
Dimensions: 150 x 4.6 mm
Part Number: ACE-119-1546
Mobile Phase:

A: 0.1% formic acid in H2O
B: 0.1% formic acid in MeCN
Gradient: Time (mins) %B
                     0           5
                     9         35
                    14         35
Flow Rate: 1 mL/min
Temperature: 40 °C
Detection: UV, 240 nm

Analytes
1. 4-Acetamidophenol
2. 4-Aminobenzoic acid
3. 4-Hydroxybenzoic acid
4. Caffeine
5. 2-Acetamidophenol
6. 3-Hydroxybenzoic acid
7. Salicylamide
8. Acetanilide
9. Phenol
10. Acetylsalicylic acid
11. Benzoic acid
12. Sorbic acid
13. Salicylic acid
14. Phenacetin
15. Salicylaldehyde



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