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- 13858013259yy 2017-12-16 00:00:00
- 金黄色葡萄球菌的检验 ① 金黄色葡萄球菌的检验 样品处理:无菌取25g或25mL食品样品,放入225mL灭菌生理盐水中均质,制成10-1稀释液。 增菌培养:将10-1稀释液接入7.5%NaCl肉汤或胰蛋白胨肉汤中,37°C培养24小时。 分离培养:将上述稀释液或培养液分别划线血平板和Baird-Parker平板,置37°C培养24~48小时。金黄色葡萄球菌在血平板上呈金黄或白色菌落,大而凸起,表面光滑,周围有溶血圈。在Baird-Parker平板上菌落为圆形,直径2~3mm,颜色灰或黑色,周围有一浑浊带。 染色观察:从平板上挑取可疑性菌落进行革兰氏染色,金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性,显微镜下呈葡萄状排列无芽胞、荚膜,直径0.5~1μm。 血浆凝固酶试验:吸取0.5mL兔血浆与0.5mL金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤24小时培养物充分混匀,置36±1°C培养,每隔半小时观察一次,连续观察6小时,出现凝固,即将小试管倾斜或倒置时,内容物不流动,判为阳性。同时做阴阳性对照。 url]耐热核酸酶试验:将24小时肉汤培养物沸水浴处理15min,用接种环划线刺种于甲苯胺兰-DNA平板,36±1°C培养24小时,在刺种线周围出现淡粉色者为阳性。本试验金黄色葡萄球菌为阳性。 ② 金黄色葡萄球菌肠毒素检测 金黄色葡萄球菌肠毒素的检测主要有动物试验、血清学试验、免疫荧光试验及酶联免疫吸附等方法,在此就不一一赘述。
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正确操作人金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)ELISA试剂盒
人金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)ELISA试剂盒以其敏感性高、特异性强、重复性好的优点,在科研中深受广大,科研工作者的喜爱。
人金黄色葡萄球菌肠毒素试剂盒检测原理:
人金黄色葡萄球菌肠毒素试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被对称性黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的对称性黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)试剂盒呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
人金黄色葡萄球菌肠毒素试剂盒样品收集、处理及保存方法:
1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
3、组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟。
4、取上清液保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。
注:标本溶血会影响检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
人金黄色葡萄球菌肠毒素试剂盒操作
人金黄色葡萄球菌肠毒素试剂盒使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。在450nm波长处测定各孔的OD值。局限6号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到的结果。
人金黄色葡萄球菌肠毒素试剂盒:
1、灵敏度:最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为1.0 nmol/L。
2、特异性:不与其它细胞因子反应。
3、重复性:板内、板间变异系数均小于10%。
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