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线上课堂丨食品营养成分及品质分析解决方案

       俗话说，民以食为天。食物是人类赖以生存的物质基础。食品科学与食品工业的发展，极大地丰富了食品的种类和数量，人们对食品的需求也已经由简单的吃得饱逐渐转变为吃的好，也更注重营养。食品营养成分包括蛋白质、脂肪、碳水化合物、膳食纤维、微量元素等，也是评价食品品质Z重要的指标，因此食品营养成分含量检测成为食品研究领域的重要内容。

       随着工业技术水平的提高，测试手段也得到了快速的发展，各类测试仪器也应运而生。意大利VELP就是一家集设计、开发、生产和应用的仪器厂商，秉承节能环保的TEMS设计理念，贯彻自动化和智能化的发展方向，为食品、农产品相关企业、科研院校以及检测机构等提供食品分析的专业解决方案。我公司与意大利VELP公司已经合作十多年，一直作为意大利VELP公司在ZG区营销合作伙伴和ZGPreferred技术服务ZX，目前已经得到行业里客户的普遍认可。

      本次讲座将详细介绍意大利VELP产品类型、特点以及在实际中的应用。

讲师简介：

       曹大伟:毕业于河北农业大学食品科学与工程专业。

       自2015年加入北京盈盛恒泰科技有限责任公司技术部，主要负责VELP各类测定仪器、智能感官设备的安装及售后服务工作，经过多年的工作，在仪器的使用和应用方面积累了丰富的经验。

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线上课堂丨食品药品智能感官分析综合解决方案

       随着人们生活水平和消费认识的提高，消费者在关注食品、药品安全的同时，更关注产品的食用体验，故而建立可靠、科学、稳定的感官评价方法显得尤为重要。感官评价的核心主要是味觉分析、嗅觉分析和物性分析，传统的感官评价主要是通过人进行感官评定，而此方法通常会受到评价员的经验、心情及身体状况等环境因素的影响，难以获得客观、一致的品评结果，为提高感官评价的客观性，减少人为差异，近年来智能设备电子舌、电子鼻、辣度仪和质构仪越来越多的应用到了食品的感官评价之中。

课程详情

       电子舌技术采用同人的舌头味觉细胞工作原理相类似的人工脂质膜传感器技术，实现客观数字化的评价食品药品的各项味觉指标；

       辣度仪采用革命性的辣味传感器技术，快速检测辣味食品的辣度值；

       电子鼻技术则是对样品挥发的气味进行定性判断和定量预测；

       物性分析俗称质构仪则是分析食品在口腔中咀嚼时的感官，核心是分析食品在咀嚼时的力量、形变和时间的变化关系。

       目前智能感官设备越来越多的应用到了食品药品的感官评价当中并取得了良好的效果，在此以常见的食品和药品等为例介绍智能感官设备在感官综合解决方案中的应用。

讲师简介

        李轩：硕士研究生，毕业于河北农业大学

        自2015年加入北京盈盛恒泰科技有限责任公司技术部后主要负责智能感官设备（电子舌、辣度仪、电子鼻和质构仪）在食品、药品、农产品等中应用的方法开发和应用支持，经过多年的实践经历在智能感官设备应用方面积累了大量工作经验。

组织单位

北京盈盛恒泰科技有限责任公司

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大气污染恶臭检测解决方案

主讲人：耿利华     日期：2020/04/21    时间：14:00-16:00

       大气、水和各种固态物质散发的令人不快的气味统称为恶臭。恶臭气体不仅对生态环境造成严重影响，而且对人体健康具有极大的危害，且恶臭气体的污染源多，污染面广，涉及行业多，浓度一般较低，成分复杂，监测难度大。

      德国AIRSENSE公司的电子鼻恶臭监测仪器是Z早应用环境恶臭监测的仪器之一，在恶臭监测领域享有非常好的口碑和市场占有率。其独特的传感器阵列技术和核心数学算法，让复杂的臭气浓度检测变得客观、实时、易操作和可溯源比较。本次讲座将从实际应用出发逐步揭开这套系统的技术原理、监测特点和发展趋势。

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北京盈盛恒泰子公司-天津润泽环保科技有限公司

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      2020年2月27日，我公司举办的线上免费感官分析直播课堂圆满结束。课程内容主要涉及“食品辣度快速检测解决方案”和“解读-智能味觉数据及味谱图”，听课人数达637人（需要观看回播课程的可以联系我们）。在此感谢各位老师对盈盛恒泰的大力支持。

       疫情防控期间，线上课堂可以给每一位无法正常投入工作的各位老师提供一个共同学习和交流的机会，希望我们的课程能够让每一位老师真正的受益，同时也希望您提出宝贵的意见，使我们不断的完善服务，以期更好的服务于大家。后期我们还会陆续推出其他解决方案的分享，欢迎大家关注公司网站以及公众号。

      Z后，再次感谢各位老师的大力支持！感谢食品伙伴网的大力支持！

美国FTC公司是世界早期从事研究和开发物性分析仪的公司。公司成立于1966年，嫩度仪就是美国FTC公司研发生产的，质构仪从开始的嫩度仪到现在的功能强大的物性分析系统。美国FTC公司不仅掌握了嫩度全校正标准，而且拥有多项以其公司员工命名的质构仪检测探头。目前有超过300种探头可供选择，均符合国际检测标准，此外还可根据客户的实验需求进行探头的定制服务。

本次讲座主要介绍质构仪常见探头及应用。

美国FTC公司  食品物性分析仪

时间安排

主题：美国FTC质构仪探头及应用介绍

日期：2022年8月25日

时间：14:00-15:00

主讲人：杨岩  技术工程师

组织单位

北京盈盛恒泰科技有限责任公司

课程概要

千百年来，人类借助基本的感觉器官，通过口尝、眼观、鼻嗅、耳听、手触，进行最原始的药物筛选、鉴别、质控与分析等，在药学发展的历史长河中起到了至关重要的作用，但因其同时具备模糊、易疲劳、主观性强、重复性差等不足，因此不能适应发展的需求。

随着技术发展，灵敏度高、可靠性强、重复性好等优势的感官设备相继推出，在新药研发、制剂工艺的优选、配方的改良、药材的鉴定、药品的质控、药物的分析等多个药学领域中广泛的应用，极大推动药学研究的发展。

时间安排

主题：医药领域智能感官分析综合解决方案

日期：2022年3月25日

时间：10:00-11:00

主讲人：李轩 

中药的作用

中药是我国传统药物的总称。中药学在我国有着两千多年的历史文化，是中华民族优秀文化的瑰宝，中医药以其独有的特色和优势与现代医药相互补充，共同承担增进人民身体健康的任务。

中药的农药残留问题

我国是农药生产大国，也是农药出口和使用大国，推行农药减量使用，提高农药使用效率，是实现农药使用量“零增长”的重要途径。

中药材属性上为农副产品。在种植过程中，种植户为了预防病虫害，保障产量，通常会大量使用农药。若产品中残留有农药，会直接或间接对用于治疗疾病的人造成危害。

中药材农残污染的主要来源：

① 农药品种选用不当

② 农药乱用滥用现象严重

③ 药材加工、储存、运输不当

中药农残检测的前景

近年来，我国中药材种植面积快速增长，中药材种植已成为部分地区、特别是贫困山区调整种植业结构、农民增收致富的重要产业，我国中药材种植面积超过6620万亩（含林地种植面积），种植品种供应量或将进一步激增。

随着中药材种植规模逐年递增，在农药使用范围和使用量不断扩大的情况下，控制农药残留，保证人体安全、健康，已成为亟需解决的问题。

新版《药品管理法》对于药品研制、生产、经营作出严格明确的法律规定，包括新药典中对于中药33种农药残留作出具体限量规定。

2020版《中国药典》自2020年12月30日正式实施。四部通则《0212药材和饮片检定通则》最终确认了药材及饮片（植物类）33种禁用农药品种的定量限，规定了禁用农药不得检出（不得过定量限）。

阿斯曼尔在这里提供中药农残检测的前处理解决方案，为常服中药的病人们的健康和安全贡献一份力量。

参考标准：

⚫ 《中国药典》0212 药材和饮片检定通则

⚫ 《中国药典》2341农药残留量测定法

健康是当下大多数人追求的一种生活状态，为此人们付出了诸多行动。全民健身日鼓励更多的人热爱运动，拥有健康体魄的同时也要注意均衡的饮食搭配。营养成分表能够较为简便的判断食物的粗框架,能帮助我们找到一些更健康的食品。读懂营养成分表不仅能帮助您选择一些比较健康的食物，还能让您轻松拥有健康好身材。

能量主要来源于蛋白质、脂肪和碳水化合物，能量摄入过高、缺少运动与超重和肥胖有关。GB 28050-2011食品安全国家标准中要求能量的表达单位为千焦(kJ)，这与我们常说的大卡(卡路里)换算公式为:
1千焦(kJ)= 0.239千卡(kcal)
1千卡(kcal)= 4.184千焦(kJ)

蛋白质是人体的主要构成物质并提供多种氨基酸，是人体生命活动中必需的重要物质，有助于组织的形成和生长。GB 28050-2011食品安全国家标准中规定，每100g的含量≥20%NRV、每100ml的含量≥10%NRV或者每420kJ的含量≥10%NRV,则可声称为高/富含蛋白质食品。*NRV%指能量或营养成分含量占相应营养素参考值(NRV)的百分比。

明星产品
NDA 702杜马斯定氮仪

可以快速、可靠和准确地安全和有效地测定食品样品中的氮和蛋白质。

碳水化合物是人类能量的主要来源。膳食中碳水化合物应占能量的60%左右。要注意:碳水化合物的NRV为300g,摄入过多可能会引起肥胖。然而即使是减肥人士或健身人士也应适当摄入碳水化合物，所谓的“断糖饮食可能会造成饥饿性酮症、免疫力低下等，进而对身体造成危害。

食盐是我们从膳食中摄取钠的主要来源，但并非唯yi来源。除了食盐外，我们从膳食摄取的钠主要来自含钠的佐料及酱料，例如谷氨酸钠(俗称“味精")、豉油、蠔油、汤精等。要注意:钠摄入过多有害健康。钠的NRV为2000mg;成人每日食盐的摄入量不超过6g。过量摄入食盐可引起高血压等许多健康问题，因此倡导低盐饮食。

脂肪成人每日脂肪的摄入量不应超过60g,这包括了我们一日三餐摄入的油、食物及其他含油脂的物品。

明星产品
SER 158系列自动溶剂萃取仪

全自动和支持物联网的溶剂萃取仪，有3通道和6通道两种规格可选，保证了可提取物质的安全性、准确性和精确性

三十多年来，VELP唯意朴仪器一直在生产解决方案，通过支持生产者从原料分析到成品，保证和提高食品质量。VELP唯意朴仪器为您提供可靠、精确和准确的解决方案，促进实验室工作。

随着纳米材料在生活生产各方面应用的日趋广泛，研究的愈加深入，乃至相应标准与法规的建立与完善；对纳米材料的研究与检测的需求，也从单纯的形貌、结构等微观因素的表征分析，更进一步到需求在更大区域上获得更具体统计意义和科学意义的大量数据，这就要求更加稳定的电镜平台、更加便捷的数据获取方式、更具有重复性的数据结果、以及更加gao效的数据分析工具。

针对上述需求，基于我们目前现代化的高稳定性电镜平台、全自动的数据采集软件Maps、智能化的数据自动分析平台Avizo2D，我们开发了一套完整的纳米颗粒材料分析解决方案: APW (Automated NanoPartical Workflow)。它可以搭载在我们所有的电镜平台上，在无人值守的情况下，完成自定义大区域的在线全自动数据采集与数据分析工作，极大提高了数据的采集与分析效率，并且极大降低了人为因素的干扰，可以方便快捷地获得大量纳米颗粒各方面特性的准确统计数据，对相应的检验检测与科学研究意义重大。

赛默飞将于8月19日上午举办一场关于“zui新纳米颗粒材料分析解决方案”的直播讲座，欢迎扫码注册观看直播！

上周，随着近红外在农产品和食品质量安全快速检测中的应用、分子光谱在司法鉴定中的应用&分子光谱和流变技术在药物研发与创新中的应用的相继结束，3月份的8场分子光谱云课堂wan美收官。感谢所有听众的积极参与及热情讨论，后续我们也将推出更多优质ZT讲座，欢迎大家持续关注。接下来，赛默飞分子光谱系列云课堂干货提炼之终篇如期而至，快来一起学习吧！

在线讲座干货及答疑汇总

近红外在农产品和食品质量安全快速检测中的应用

第六场

赛默飞近红外产品经理--周学秋

Q：近红外分析单籽粒种子应该注意的关键技术问题？

1、光谱信号要稳定：

信噪比要高，单籽粒种子空间尺寸比较小，接收光的量少，信号会比较弱，提高光谱信噪比是关键问题，需要高灵敏度的检测器和高密度的光照，通过优化检测器的灵敏度、光谱扫描时间和分辨率达到高信噪比光谱；

样品放置位置要固定，保证尽可能减小光谱变化。

2、建立模型的代表性样品的选择：单籽粒种子破坏后不能再生，可以通过基础模型从大量的样品中筛选出具有代表性的样品进行模型的建立。

3、要保证实验室化学数据的可靠：因为单籽粒种子化学分析不可能进行平行样分析，一次分析的可靠性要求很高。

Q：傅里叶变换近红外光谱仪的优点和缺点有哪些？

优点

1、光通量大：光源发射50%能量经过分束器同时到达样品，再传递到检测器，信号强，信噪比高，尤其适合分析高含水量、高吸光度的样品；

2、分辨率可调节：可根据不同的样品特点设定不同的分辨率，满足不同分析实验的要求；

3、光路扩展灵活：由于照射样品后光同时传递到检测器上，光路切换非常简单和容易，一台仪器可以同时配置液体透射、积分球漫反射、光纤探头和固体透漫射四个模块和对应的独立检测器，光路切换由计算机控制的转化马达轻松完成，无需人更更换这几个大的附件。

4、不受杂散光的干扰：照射样品的光是经过干涉仪傅里叶变换后时间域的光，仪器外部的杂散光是频率域的，不会干扰检测器的响应。

缺点

干涉仪设计制造难度较大，而且大多数干涉仪都是ZL产品，生产制造干涉仪对技术要求比较高，因此傅里叶变换近红外的生产厂家比较少。

Q：近红外作为农产品及其加工食品快速品质分析的仪器，其可靠性如何？

近红外光谱分析技术是一种经过二次开发的快速分析技术，即任何近红外仪器必须建立相应的近红外分析模型才能实现快速分析的应用，因此开发模型的关键技术环节要经过严格控制才能得到稳定、可靠和适应性的二次分析方法。所以只要严格控制以下这3点要领，近红外分析数据的可靠性就能得到充分保证。

1、要严格控制光谱质量：光谱信号要有很好的信噪比、很好的代表性和稳定性；

2、要严格控制实验室常规分析数据的可靠性；

3、要选择代表性的样品进行模型建立，即建模样品的化学组成、物理形状和性质要能涵盖被测样品的信息。

分子光谱在司法鉴定中的应用

第七场

赛默飞红外应用工程师--徐菁

赛默飞拉曼应用工程师--马书荣

Q：赛默飞尼高力傅里叶变换显微红外光谱仪iN10在法证科学中Z突出的特色是什么？

iN10是一款“R&D 100”获奖产品。具有Z优化的独立一体化的设计光学平台，光路稳定能量高，谱图信噪比高，秉承全自动化的操作设计理念，全新Picta在一个窗口完成所有的操作，并且支持实时预览和实时搜索，极大的提高了分析人员工作效率。分析向导功能的设计能帮助即使是零经验的客户快速获得样品的谱图以及分析样品的组成和分布，自动化程度高，分析速度快，重现性好。其中，分析向导功能包括颗粒分析向导、混合物分析向导、多层膜分析向导和包埋物分析向导。赛默飞尼高力iN10傅里叶变换显微红外光谱仪在定性分析微小纤维、粉末、鉴别真伪纸 币、朱印时序和微小样品物时发挥着重要的作用。

Q：我国的法证实验室一般是依据有哪些标准和技术规范使用红外光谱？赛默飞尼高力傅里叶变换红外光谱仪如何保证仪器的可靠性和合规性？

在我国现有的标准中，法证实验室主要依据以下这些标准：国家标准——GB/T 19267.1-2008 《刑事技术微量物证的理化检验》、GB/T 18294.6-2012 《火灾技术鉴定方法第六部分红外光谱法》、GA部标准——GAT1423-2017《法庭科学塑料物证检验 红外光谱法》和GAT 1424-2017 《法庭物证合成纤维物证检验 红外光谱法》；GA部禁毒技术规范——检验鉴定技术规范 JY01.11-2017 《甲基苯丙 胺,海洛 因,可 卡因,氯胺 酮定性分析》、检验鉴定技术规范 JY01.12-2017《可疑物品中13种易制毒化学品定性分析》、检验鉴定技术规范 JY01.13-2017《可疑物品中83种YY类麻醉药品和精神药品定性分析》。这些标准中涵盖了对样品的收集、处理和测试过程的操作，也提供了需要定性分析的违禁药物或易制毒的特征吸收峰和判据。

赛默飞为实验室的管理提供了验证服务，我们遵循ASTM-1421中对FT-IR光谱仪性能验证步骤和指标，并内置含有NIST可追踪标准片的验证轮，设计了自动验证体系。整个验证体系都是软件自动控制，并自动输出报告，随时满足您对仪器的期间核查。ASTM-1421是美国的材料测试协会对傅里叶变换红外光谱仪所规定的参数标准，相较于我国现行的GB/T 21186和JJF 1319而言，所规定的条目更细致和某些指标更严格。

同时，赛默飞尼高力傅里叶变换红外光谱仪提供系统适用性测试。系统适用性测试相对于严格按照ASTM-1421检测Valpro而言，更加贴合用户的实际要求。在用户实验室认为必要的时候，可自定义系统适用性的条件，并随时执行该适用性测试，测试结果可以为用户评价光学平台的稳定性和常用场景中光学平台的工作状态提供信心。

Q：在火灾和爆炸 物的应用中，赛默飞尼高力傅里叶变换红外光谱是如何发挥作用的？

对于火灾和爆炸事件的调查，赛默飞尼高力红外光谱产品有两种应用方式。diyi种是对疑似爆炸 物的样品进行分析。其中，粉末或者颗粒利用iN10的颗粒物分析或者混合物分析向导，既能在短时间内，对样品进行表征。确定样品的成分和成分分布。对于数据分析，也可以使用Specta对样品进行多组分分析，更详细的区分样品的组织成分，为侦破爆炸点、起火点提供有力的证据和支持。

第二种解决方案是针对爆炸现场或者火灾中的气体分析。赛默飞提供一款专门的气体分析红外光谱仪，内置多种标准气体曲线，能够在10分钟分析得出现场的气体组分，案例中，IGS测得现场气体中含有较高的丙 烯醛，甲烷和氨，这种快速的测试结果，可以为专家组提供判定失火的物品是什么材料，这些气体是否会对救援人员有伤害，如何安排救援等后续工作提供可靠的分析结果。也可以为随后的侦破过程中提供有效线索。IGS是一款专门针对气体设计的红外光谱仪，对气体敏感，快速定量分析气体成分含量并且重复性好。

Q：与红外技术相比，拉曼技术在司法鉴定中具有哪些优势，两种技术如何实现互补？

与红外技术相比，拉曼技术的优势主要有以下几点：

1、无损、非接触式测量；

2、无需制样，不限样品状态，块体、粉末、纤维、薄膜、液体、悬浮液等，均可直接进行测试，无需前处理；

3、共焦功能，激光具有穿透性，无需打开包装，即可轻松实现透明或半透明包装内样品、多层膜样品、包埋物等测试；

4、无惧水，轻松实现水相中样品的测试；

5、空间分辨率更高，实现小于1um以下的微区测试；

6、在无机物的分析可得到更丰富的结构信息。红外和拉曼都属于分子振动光谱技术，是对分子振动或晶格振动的测试和分析，两者在解析同一有机物时，可以实现结构信息上的互补，对于未知物可以获得更全面的解析：分子结构的跃迁偶极矩变化越大红外活性越高，分子结构的极化率变化越大拉曼活性越高；红外光谱不受荧光干扰，拉曼光谱可以提供更丰富更全面的无机结构信息。

Q：针对司法鉴定样品，拉曼测试过程中需要注意哪些测试条件？

一个高质量拉曼光谱或拉曼成像的获取除了仪器性能影响之外，合适的测试条件同样起着重要的作用。通常来讲，需要考虑以下几个问题：

1、首先确认样品是否需要微区观察或样品测试点定位，如果是，需要采用显微共焦的拉曼光谱仪，并采用合适的物镜倍数；

2、选择合适的激发波长，例如文检分析时，油墨测试常用532nm，一些有荧光干扰的印泥785nm会较合适；

3、选择合适的激光功率和曝光时间，确保样品不被灼烧，例如黑色或深色样品，微小样品等需要低功率测试，爆炸 物样品不适合高功率和长曝光等；

4、选择合适的物镜倍数和光阑，例如文检、痕量物证等选择高倍物镜如50X和100X，信号较弱样品采用大光阑等；

5、测试过程其他可能遇到的问题等。

Q：请举例在司法鉴定中，哪些样品容易受到激光功率的破坏，该怎么避免？

文件检验分析相关的样品，如黑色笔迹，油墨；爆炸 物样品，如黑色残留物，或可能含碳爆炸 物成分等；一些毒品和化学品，测试中吸热而引起结构不稳定；纤维织物；痕量物证样品等。赛默飞拉曼光谱仪具有ZL激光功率调节功能，可以实现到样品测试点的激光功率调节，软件显示到样品测试点的实际功率值并可实时改变，精细调节程度非常高，能够确保易灼烧样品在不被激光破坏的情况下，实现Z优激光功率下的光谱和成像测试。

分子光谱和流变技术在药物研发与创新中的应用

第八场

赛默飞拉曼应用工程师--王冬梅

赛默飞流变应用经理--祝旻卿

Q：拉曼成像如何实现药物粒径分析？对比激光粒度仪有什么特点？

拉曼成像分析药物粒径是图像分析的结果。通过对某一组分的拉曼成像图进行图像分析，选取出该组分的图像区域并计算得到这一组分不同颗粒的面积、长度、宽度、周长、位置等统计结果。而激光粒度仪只能单纯地统计所有药物颗粒的尺寸范围，无法准确分辨各个组分。赛默飞Z新DXR3系列拉曼光谱仪新升级了高级颗粒物分析软件，在优化了原有颗粒分析基础上新增了显微白光像定位和选择颗粒功能，针对混悬剂等药剂类型提出新的分析方法。

Q：针对低剂量药片，如何快速找到API的分布？

Omnicxi成像软件拥有包括MCR多组分分析、相关性分析、峰高成像、峰位移成像等成像方式，适应各种分析需要。药片的原辅料分布一般采用MCR多组分分析的方式，计算原辅料分布和面积占比。但对于百分含量左右的低剂量药片，需要先采集整个药片或者尽量大区域的成像，然后采用API的光谱进行相关性分析、峰高成像等成像方式进行分析，准确定位到API位置再切换高倍物镜进行小步长精细成像。针对不同类型样品需要灵活应用不同成像方式，加速药物研发和配方研究。

Q：针对皮肤外用仿制药的技术评价要求（征求意见稿）中的流变学特性指标测试，分别具有什么意义？

对于乳膏剂、乳剂产品为包含油/水两相的热力学不稳定体系的一致性评价仿制药，通过旋转流变仪可将相对的感官评价通过流变学测试进行量化，以达到研究与指导工艺的合理性及参比样和自制样的对比。流动曲线是通过模拟手部涂抹过程中产生的由低到高的剪切速率下黏度的变化，来表征是否易于涂抹均和灌装入管等；膏剂为分散体系体系，通过屈服应力值测试了解分散相之间的相互作用力大小，表征挤出、涂抹和泵送难易程度，及货架期（抵抗地球重力的结构稳定性）；线性粘弹性则是通过模量直观的反应体系的结构性，线性粘弹区LVR可说明体系内部在静置或低剪切下的硬度和稳定性，可抵抗分层沉降能力。

Q：通过熔融挤出设备制备的透明挤出物是否可以认为是制得了无定型固体分散体，且可以增溶出?

熔融挤出是结合了热能和机械能共同作用下提供能量使API突破晶格能达到无定型态且辅料熔融，并通过互相啮合的功能段进行分散和分布的一种工艺。首先，完全依靠热能而转速较低情况下挤出的物质，是无法完全保证得到的无定型固体，很有可能是晶型分散、无定型分散和极少量的固体溶液共存状态，此时的工艺对于放大无任何价值。其次，当工艺已经结合了热能和通过转速提供的机械能时，挤出的透明物质可能是大量固体溶液与少量无定型固体分散体共存状态，其增容效果已经达到。但是如果喂料与螺杆转速不匹配会导致分散和分布不佳而影响溶出曲线。

Q：有了一台熔融挤出机，是否代表就可以进行无定型固体分散体的生产？赛默飞除了挤出设备外，还可以提供哪些技术支持？

熔融挤出并非是一台设备，首先，生产线需要由完整的上游喂料设备、工艺配套的熔融挤出机和合理的下游处理设备共同组成。其次，由于熔融挤出是多学科高度交叉工艺，需要具有一定材料学、流变学和化工热力学知识，且通过各类表征手段加速了解工艺和标准挤出物。

赛默飞已具有完善的无定型固体分散体综合解决方案：借助与各大辅料公司长期的合作和赛默飞流变学体系，辅料与共混配方的加工特性可通过赛默飞旋转流变仪直接进行预判。借助强大的拉曼光谱和扫描电镜，通过微观和相貌学在无损的情况下判断样品的晶型转变和分散状态。分子光谱中的近红外光谱既可作为PAT加速认识工艺变量对分散情况的影响，同时也是生产过程中至关重要的在线质控环节。制备的无定型固体分散体药物则可再通过拉曼光谱无损进行成品晶型、分散和杂质评判。服务客户从前期原料和配方研究，工艺开发到生产质控。

如果您想观看分子光谱云课堂8场网络研讨会的回放，请您参与问卷调查，我们会diyi时间将回放链接发送至您的邮箱！

问卷地址：http://thermofisher.mikecrm.com/FqlaBc1

如有疑问请联系：

lulu.shen@thermofisher.com

上周，赛默飞分子光谱系列云课堂之分子光谱在电子产品污染和缺陷分析中的应用、分子光谱在锂电池行业的Z新应用进展&FTIR/Raman/XRF在环境监测和固废处理中的应用相继圆满落幕，感谢众多听众的线上积极参与及提问，赛默飞分子光谱系列云课堂精彩讲座还在火热进行，请您持续关注！

那么，或许您会问

这么的线上讲座

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干货提炼+精彩回放看这里！

在线讲座干货及答疑汇总

分子光谱在电子产品污染和缺陷分析中的应用

第三场

赛默飞红外应用工程师--佘英哲

Q：介绍下软件向导功能，特别是颗粒物分析向导？

向导功能是我们内置于软件内部的专用功能之一，对于经常遇到的显微红外样品按样品类别进行流程化的分析。即使没有经验的用户，也只需要按照软件提示进行相应的操作，便可得到测试结果，大大提高仪器的使用的便利性和系统性，也在一定程度上减少测试的人为误差。目前内置的向导功能包括：颗粒物分析向导、混合物分析向导、多层材料分析向导及包埋物分析向导。颗粒物分析向导，主要是当样品为小颗粒状且数量较多时，如常见微塑料分析，可采用此向导功能。软件通过可见光图像对颗粒物进行分析和评估，自动调节光阑对样品进行测试。Z终报告除体现常规的红外定性结果，还可以对颗粒物的尺寸大小，占比面积、成分类别等进行统计，多维度获取样品信息。

Q：Continuum与iN10系列的区别是什么，为什么说其是研究级的显微红外光谱仪？

iN10傅立叶显微红外光谱仪采用独立一体化光学设计，是整体高集成化显微红外光学系统，无需与主机进行联接就可以进行工作，而Continuum则需要与主机搭载一起使用，iN10与Continuum都可以算是研究级显微红外光谱仪。相对来说Continuum研究扩展性更强大，一方面是其硬件的可扩展性，用户可根据实际需求选配不同的镜头、样品平台及检测器。另一个更重要的方面是在内部光路的设计上，采用无限校正的光学系统及Reflex自动光阑控制系统ZL技术，以及结合多种显微观察增强对比技术，可以更jing准找到样品区域获得样品的谱图信息，帮助判定样品成分。

Q：在异物分析方面，拉曼光谱技术如何有效对红外光谱进行补充？

大部分异物分析都能够通过红外光谱进行有效的化学结构分析。但进行红外光谱测试时，要求异物可以从产品中取出或是暴露出来，一些包埋在产品内部的异物可能需要进行一些复杂的前处理。拉曼光谱技术是无接触无损的分析手段，对于这类样品可以通过显微镜定位到产品内部的异物进行原位测试，而无需前处理或是破坏样品。另外，很多碳或者无机物的红外活性低甚至没有红外活性，而与红外光谱互补的拉曼光谱可以很好的补充这些不足。除此之外，显微拉曼光谱的空间分辨率可以达到几百纳米，对于只有10微米左右空间分辨率的普通红外光谱也是很好的补充，一些纳米级异物或者痕量异物均可以进行化学结构分析。只有将两种分子光谱技术相互结合应用，才能实现完整的异物失效分析。

分子光谱在锂电池行业的Z新应用进展

第四场

赛默飞拉曼应用工程师--王冬梅

Q：拉曼光谱表征锂电正负极材料时，为什么要严格控制激光功率？

锂电池正负极材料大部分是金属氧化物、碳材料等，过高的激光功率不但无法获得准确的拉曼光谱，还会破坏材料。高功率激光照射会使得大部分金属氧化物发生相变而无法通过拉曼光谱获得本来的结构信息。对于碳基负极材料，高功率激光照射会破坏其晶格结构，使其发生峰位移甚至变成无定形碳。因此，只有通过严格控制激光功率才能获得锂电正负极材料正确的拉曼光谱信息。赛默飞拉曼光谱仪ZL精细激光调节技术可以实现Z小0.1mW的调节幅度，并且软件显示真是样品表面激光功率，在不破坏材料结构的同时获取正确的拉曼信号。

Q：除了商业化的原位电化学池外，纽扣电池或者其他的自制电化学池如何进行原位电化学拉曼测试？

进行原位电化学拉曼测试一般需要提供光路进入进出的窗口，然后将光路引入。比如纽扣电池，可以在正或者负极的任意一端打个小孔，并装上光学窗片就可以通过这个窗口进行拉曼光谱原位测试。其他自制的电化学池也是如此，如果池子无法放在操作平台上，还可以通过侧向显微光路和光纤探头将光路直接引入电化学池中进行原位拉曼测试。

Q：红外光谱在原位电化学研究中的应用情况及附件的选择？

电化学原位红外光谱分析是电化学分析一个重要的方向，目前研究集中在两个方面：

①电化学机理，对电极表面吸附物种及其取向和成建情况的研究。

②结合时间分辨光谱技术，实现对短寿命中间体跟踪，在分子水平上揭示电极过程反应动力学规律。不管进行哪方面的研究都会涉及电化学池的使用。电化学池主要分为内反射模式电化学池及外反射式的电化学池。内反射的电化学池一般是以硅作为基底，并在上面镀一层纳米金来充当工作电极，并且起到增强信号的作用。外反射的电化学池可选用Ge,ZnSe,CaF₂等作为衰减全反射的晶体，工作电极距离衰减全反射晶体的距离可以调节，一般测试时工作电极要紧贴在晶体上形成薄层溶液。

FTIR/Raman/XRF在环境监测和固废处理中的应用

第五场

赛默飞XRF应用工程师--吕勇

赛默飞红外应用工程师--林华

Q：Nicolet TGA/IR联用技术特点？

Nicolet TGA/IR联用分析技术是分析热失重过程中不同温度下逸出气体成分的一种有效手段，根据热失重分解机理的不同，TGA/IR分析技术可用于材料分解机理的研究，复杂材料主成分定性定量测试。Nicolet TGA/IR联用分析特有的Mercury TGA混合物逸出气体分析功能，快速实现整个热失重过程中逸出气体的多组分分析，给出任意单组分逸出气体在整个热失重时间上的变化趋势情况，还可以实现热失重时间轴上每一时间点逸出气体的多组分混合气体分析。为复杂逸出气体的分析提供快捷的指导，大大提高数据分析效率。

Q：Nicolet GC/IR联用技术特点？

Nicolet GC/IR联用分析技术能够辅助分析气相色谱难以实现有效分离的样品，如同分异构体样品等，赛默飞变色龙软件实现GC/IR联机测试的自动进样，同步触发数据采集；Nicolet iS50红外光谱仪以其高稳定，高快速扫描速度，高灵敏度为GC/IR联用分析提供高质量的红外谱图。特有的Mercury GC数据分析功能，对整个气红数据按照GC保留时间进行分析，快速实现整个保留时间上系列气体连续分析，并给出检索结果及匹配度。此外还可以根据需要选取有效保留时间段进行数据分析。

Q：iS50 FT-Raman模块的特点？

iS50 FT-Raman模块实现样品仓内便捷安装，不占用额外空间，对针定位设计，一键式操作灵活方便；内置USB摄像头，实现所见及所得；置散焦和聚焦设置，实现不同大小样品的测试。多孔板，瓶板，滑板等辅助测试板的配置为客户的连续多个样品的测试提供方便，OMNIC Atlus 和Microview软件控制的XYZ自动采样平台，图像拼接功能，线，面扫描测试功能满足的客户的成像测试需求。

Q：与其他化学分析方法相比，XRF的特点是什么？

相比较而言，XRF分析的样品基体不受限制，可以是固体，粉末和液体。同时样品前处理过程也较为简单，对于固体样品可直接进样，粉末样品需要考虑压制成饼状或者倒入专用样品杯，液体样品或者固液混合物也可以直接倒入专用样品杯完成分析。另外XRF可以分析的元素范围从Be到U，诸如F、Cl、Br等卤族元素也都是可以直接分析给出测定结果。Z后是XRF的浓度响应范围从亚ppm 到，即检出下限可以做到亚ppm级别的同时也可以直接测定含量较高的主量元素甚至是含量。

Q：在分析固废样品时，既然XRF分为波长色散型（WDX）和能量色散型（EDX），如何进行仪器选型？

WDX分辨率要远远优于EDX，这就意味着WDX在分析一些基体较为复杂的样品时，或者在面临同样组分的样品时，干扰会少很多。大多数WDX具有较高的功率，拥有较高的精密度和准确度，可以用于精确定量分析，而EDX功率较低，一般用于对样品的粗筛。另外在分析第三周期元素时，特别像F、Na、Mg等元素，WDX的检测能力也远远优于EDX。综合比较来看，对于像F、Na、Mg等元素有比较高的分析要求，我们推荐WDXRF，而如果关注的ZD是在重元素的检测，那么EDXRF也是可以满足分析要求的。

Q：赛默飞的X射线荧光光谱仪在分析固废样品时，都有那些优势？

赛默飞的X射线荧光光谱仪提供了一款功能强大的行业lingxian的无标样定量分析软件——UniQuant。在分析完全未知的固废样品时，UniQuant的特点在于它是基于仪器的内在灵敏度这一概念，不需要准备各种标准物质进行匹配计算，内置强大的XRF专家分析系统使得软件操作较为简单，分析人员可以轻松掌握软件操作而无需了解深奥的XRF相关知识。所以UniQuant的出现很好的解决了对于完全未知样品的分析需求，单个样品在5分钟内即可完成定量测试并直接给出分析结果。

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上周，赛默飞分子光谱系列云课堂之分子光谱在催化领域的Z新应用进展&红外光谱联机应用及特殊科研应用解决方案圆满落幕，感谢众多听众的线上积极参与及提问，赛默飞分子光谱系列云课堂精彩讲座还在火热进行，请您持续关注！

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01 分子光谱在催化领域的Z新应用进展

赛默飞红外应用工程师--王娜

赛默飞拉曼应用工程师--马书荣

Q：iS50红外光谱仪的分束器如何切换？

Nicolet iS50红外光谱仪是一款高端研究级红外分析平台，一体化集成光学系统，可配置分束器自动切换系统（ABX）利用光谱仪上一键式按钮实现光路一键式自动切换，无需手工取出和放入分束器。

Q：实时双光束原位红外光谱系统的优势意义？

目前在测试催化剂反应过程中主要是在同一台红外光谱仪上进行原位催化反应表征，需要预先采集催化剂样品本底信息作为背景光谱来扣除仪器和样品的影响。然而，在真实的气固相多相催化反应过程中，催化剂本底的信息会随着反应时间的延长而发生变化。同时，实时状态下的气体分子振动光谱和加热条件下产生的高温发射光谱会也影响测试结果。使其不能实时获得催化剂在真实反应状态下的表面信息。

双光束系统采用两台红外光谱仪和双光束红外反应池，计算机同步控制两台红外光谱仪，实时、同步采集样品光束和背景光束谱图来得到催化剂表面物种随反应时间变化的真实信息，排除实时状态下的气体分子振动光谱干扰和加热条件下产生的发射光谱干扰，使表征结果变得更加精确可靠。（大连理工大学ZL方法）

Q：傅里叶拉曼光谱技术和激光共聚焦拉曼光谱技术的优势？

傅里叶拉曼光谱的激发光源波长更长，可以更大程度上避免样品的强荧光效应，特别是一些生物大分子样品，从而获得样品的有效拉曼信息；同时由于迈克尔逊干涉仪系统，傅里叶拉曼光谱仪的光谱分辨率要高。激光共聚焦拉曼光谱激发光源波长短激发效率高，物质的拉曼信号更强，同时由于共聚焦原理激光共聚焦拉曼光谱的空间分辨率高。

Q：利用外反射方式时如何安放调节工作电极？

电催化中利用外反射方式测试时，由于红外光是透过窗片和电解液膜再照射到工作电极表面，所以除了控制附件调节红外光入射角度，还要调节工作电极与透射窗片之间的距离，尽可能的降低电解液的信号影响，可以通过电极上方的带有刻度的调节系统的微调功能显示两者之间的距离。同时赛默飞红外光谱仪操作软件具有实时谱图预览功能，帮助不断调节以获得高质量的有效红外信号。

Q：漫反射附件中三孔高压反应池的窗片材质主要是什么？

内容中Harrick的高温高压池上方是三窗口的圆顶，左右两个窗口是红外光路出入口，窗片通常是硒化锌材料，亦有其他材质可供选择，另外一个是观察口，主要是石英材料，可用于观察或光催化光源的引入。

Q：红外光谱仪如何进行实时快速扫描？

Nicolet iS50红外光谱集成一体化设计，性能优异，光谱分辨率高，灵敏度高，可以实现至少130张/秒快速扫描，可升级实现纳秒级的快速反应过程，对于催化反应过程中催化剂表面、寿命短浓度低的反应中间体具有非常高的检出灵敏度。同时OMNIC软件中Series功能可以根据需要设置并进行自动快速扫描不同反应时间下的红外信号。

Q：内置式ATR附件与常规ATR附件不同点？

Nicolet iS50内置式一体化ATR具有独立的光路系统和检测器，并可以通过一键式自动切换，主要目的是把红外光谱仪主样品仓释放出来，无需反复拆装附件，比如无需取下样品仓催化反应池系统，可以直接切换到内置式ATR附件进行其他样品的采集，方便快速。而且该ATR附件可以获得样品的中远红外光谱范围。

Q：在拉曼测试过程，哪些类型的样品容易受到激光功率的影响（如被灼烧、发生相变等）？

在拉曼测试过程，到样品测试点的激光功率是影响获取光谱的一个非常重要的参数。激光功率过低，无法测到信号或信噪比非常低；激光功率过高，破坏样品，或引起原结构的变化，或信号饱和。而较容易受到激光功率影响的样品类型，如生物样品、碳材料、一些金属氧化物、纳米材料、刑侦领域中的文件检验、朱墨时序等。

Q：赛默飞拉曼光谱仪的激光功率是怎么控制的？

赛默飞DXR3系列（包括之前DXR系列和DXR2系列）拉曼光谱仪通过ZL激光功率调节器实现到样品测试点的激光功率调节，软件显示到样品测试点的实际功率并软件操作实现功率值的改变，精细调节程度非常高，能够确保易灼烧样品在不被激光破坏的情况下，实现Z优激光功率下的光谱和成像测试。

Q：赛默飞拉曼光谱仪是共焦拉曼吗？

赛默飞DXR3系列（包括之前DXR系列和DXR2系列）拉曼光谱仪是针孔式真共焦拉曼，在拉曼光谱仪中既有针孔又有狭缝，既可以实现真共焦式测试、获得高空间分辨结果，又可以实现高通量测试，满足常规光谱采集分析。

Q：赛默飞的拉曼光谱仪如何将激光引出实现样品台和小暗室之外的样品测试？信号是否会衰减，在测试时怎么补偿因衰减引起的光谱信号减弱？

因待测样品太大或一些原位反应系统无法放置在光谱仪测试平台上直接测试，需要将激光引出。赛默飞DXR3系列（包括之前DXR系列和DXR2系列）系列拉曼光谱仪可以采用两种方法引出激光：1采用侧向显微光路+物镜，实现大样品的显微分析；2通过光纤引出，利用光纤探头聚焦和收集信号。从理论上来讲，与直接采用光谱仪中显微镜物镜实现测试相比，引出激光，光路变长，信号会有一定的衰减，光路越长，衰减越明显。与侧向显微光路相比，光纤的信号衰减相对大一些。针对信号衰减，可以通过提高激光功率、延长曝光时间、增大光阑等进行补偿。

Q：拉曼光谱仪的光路维护是如何实现的？

赛默飞拉曼光谱仪具有ZL自动准直/校标和自动X轴校标功能。通过内置标准物的ZL自动准直/校标工具盒实现仪器光路的定期维护；采用光谱仪内置的标准工具实现X轴的自动校准，确保长期测试过程中峰位的准确。操作简单快速，无需复杂的专业技能即可实现光谱仪的维护。

02 红外光谱联机应用及特殊科研应用解决方案

赛默飞红外应用工程师--邓洁

Q：能详细介绍一下红外热重联用的Mercury TGA软件么？

热红联用的技术难度在于如何对获得的实验数据进行分析。TGA出来的气体多为混合气体，直接检索谱图来识别成分的难度非常大。传统方法对于混合气体进行分析需要专业人员多次差谱、多次检索，才能得到相关数据结果，耗时且效率低。因此我们推出了Mercury TGA热红数据专用分析功能。这种分析技术可以自动分析TGA中的逸出气体谱图，使用PCA算法进行多达8种组分的多组检索。不到1分钟，即可获得分析结果，各时间点气体组分的组成，并显示实验中内各气体组分随时间的变化趋势，大大提高整个热红数据分析工作效率。

Q：TGA-IR-GCMS三联机分析技术的优势？

热分析仪器不仅可以和红外进行联用还可以和GCMS进行联用，两种联用方法各有优劣。TGA与红外联用其技术优点在于分子具有特征的固定吸收频率，据此进行定性分析结果准确性高，缺点在于测试的灵敏度相对GCMS略低。TGA与GCMS联用的技术优点在于灵敏度高，通常可以检测到亚纳克级的信息，缺点在于不能分辨具有相同质子数/电荷数的比值的离子，同时会存在同位素干扰或者碎片离子出现重排等问题。因此采用三联机进行分析就可以汲取两种联机方法的优势，结果之间相互印证，获得更全面、准确的样品信息。

Q：赛默飞的气红联用方案的优势在哪里？

首先是气红模块的设计方面。赛默飞的气红接口采用了许多先进技术来保证测试结果的准确度，比如模块接口采用了将毛细柱末端直接插入光管的入口设计，从而有效消除了组分分解及组分峰在传输线中变宽的现象。同时长光程、小内径的镀金光管使接口在分析微量组分时也具有良好的红外信号响应。另外模块可配置信号分流器，实现FID和红外同步采集。

软件方面，全新Mercury GC数据分析功能可支持自动按照保留时间分析对应的气体成分信息。同时支持“变色龙”软件，支持自动进样器，这些都使得分析更GX。在主机方面，气红联用监测的是流动气相色谱，因此对光谱仪主机的分辨率及扫描速度及稳定度有非常高的要求。赛默飞iS50提供了稳定的光谱平台，Z高扫描速度和光谱分辨率，所以其气红分析效果要远远优于以前的气红联机。

Q：赛默飞的流变仪红外联用方案的优势在哪里？同时应用点有哪些？

作为独 家提供的联用方案，将赛默飞HAAKE流变仪和Nicolet红外进行联用，就可以在线来检测外力作用下（比如变形/ 剪切力/ 热诱导/ 紫外光固化等）样品形变数据以及形变过程中分子的结构、构象、取向等光谱信息。这种联用技术的优势在于把流变学数据与化学红外光谱信息直接关联起来，所有的实验在相同条件下进行。同时大大缩减了测试时间，特别对于监测长时间的反应过程是非常有帮助的。红外流变联用的应用领域很多，包括研究化学反应、分子间和分子内的相互作用，比如稳定性测试，以及研究聚合物熔体和溶液中的链取向等。

Q：快速扫描时间分辨光谱的时间分辨能力是指什么？步进扫描时间分辨光谱和快速扫描时间分辨光谱的区别？

对于红外光谱，动镜按照设定的光程运动一次获得一张干涉图，所以Z短的相邻两张干涉图的时间间隔就是Z快的时间分辨率。时间的分辨率主要受到干涉仪动镜的快速运动能力和数据快速记录能力的限制，所以对于快速扫描实验，比如液相扩散、气相反应机制、燃烧反应、荧光现象等，采用的红外主机要求拥有快速扫描的能力。赛默飞的iS50研究级傅里叶红外光谱仪具有连续快速扫描和步进扫描时间分辨功能。在连续扫描时间分辨模式下可以Z高实现130张/秒的快速扫描功能。同时通过远程触发附件可以让光谱仪与反应设备同步进行，可以向实验设备提供精确的时间对准信号。 步进扫描与快速扫描是完全不同工作模式，步进扫描中动镜按指定距离移动后静止，开始采集光谱信号。随后动镜再移动至下一个静止位置，开始记录新一轮数据。重复上述步骤直至动镜移动完成，Z后再按照时间依次把光谱数据排列，即可得到步进扫描时间分辨光谱。步进扫描对于光谱仪的要求较高，时间分辨能力依赖于检测器的响应时间和采样速率。赛默飞的iS50采用了Vectra-Plus步进扫描技术，动镜位置准确度优于0.2nm，可以实现纳秒级时间分辨。

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我们的世界物种多种多样，而与我们人类生存关系最密切的就是植物。随着时间的推移与科技的进步，人类在逐步揭示自身基因真相的同时，也在不断探寻植物基因的种种功能。其中，蛋白质是植物生命活动的主要承担者。因此，在植物学相关研究中，蛋白质之间的相互作用是研究的重要基础和手段。

目前，研究蛋白质-蛋白质相互作用常用方法主要包括：酵母双杂交技术 (Yeast Two-hybrid, Y2H)、双分子荧光互补技术(Bimolecular Fluorescence Complementation, BiFC)、免疫共沉淀技术(Co-Immunoprecipitation, CoIP)及荧光共振能量转移技术(Fluorescence Resonance Energy  Transfer, FRET)等，以及近几年来逐步应用到的萤火虫荧光素酶互补技术(Firefly luciferase complementation imaging assay, LCI)。

面对众多的技术，您是否也苦恼过，到底哪种技术更加适合我的实验呢？要选择哪些技术相互搭配才更加高效呢？面对这一连串的疑问，不要惊慌，今天小编准备了一篇技术简报，一起了解一下各类蛋白互作技术。

酵母双杂交技术(Y2H)

酵母双杂交技术是将待研究的两种蛋白质分别克隆（融合）到酵母表达质粒的转录激活因子的DNA结合结构域（DNA-BD）和转录激活域（AD）上，通过2 个结构域的结合，从而调控目的基因的转录过程。这两个结构域分开时仍分别具有功能，但不能激活转录，只有当被分开的两者通过适当的途径在空间上较为接近时，才能重新呈现完整的转录因子活性，并可激活上游激活序列（upstream activating sequence，UAS）的下游启动子，使启动子下游基因得到转录。

优点：

① 操作简单，方便快捷，实验成本较低；

② 可快速、大量筛选蛋白互作组；

③ 灵敏度高，可检测存在于微弱或暂时蛋白相互作用。

缺点：

① 自身转录蛋白往往会造成假阳性的结果；

② 蛋白过量表达时对酵母产生毒性，使得酵母无法正常生长；

③ 无法检测细胞核外的蛋白互作。

双分子荧光互补技术(BiFC)

双分子荧光互补技术本质上是一种蛋白质片段互补技术，是指将荧光蛋白多肽链切开并形成不发荧光的 N-和 C-末端2个多肽片段。当目标蛋白质相互作用时，2个片段重新构建成完整的具有活性的荧光蛋白分子，即可产生荧光。

优点：

① 灵敏度高，直观可视；

② 可以对在动物、植物和细菌等不同的宿主细胞中蛋白进行定位和互作强度分析；

③ YFP,RFP等荧光标记选择多样。

缺点：

① 对温度条件要求较高，温度越低，越有利于片段之间的互补；

② 有时2个不发光的荧光片段会发生自发融合的情况，出现假阳性的结果。

免疫共沉淀技术(CoIP)

借助抗体和抗原之间的专一性，确定两种蛋白质在完整细胞内生理性的相互作用。当用预先固化在argarose beads上的蛋白质A的抗体免疫沉淀A蛋白，那么与A蛋白在体内结合的蛋白质B也能一起沉淀下来。再通过蛋白变性分离，对B蛋白进行检测，进而证明两者间的相互作用。

优点：

① 常被用于鉴定特定蛋白复合物中未知的蛋白组分；

② 可分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。

缺点：

① 可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白互作；

② 两种蛋白质的结合可能不是直接结合，而可能有第三者在中间起桥梁作用，也可能出现假阳性的结果；

③ 对抗体选择和实验者操作技术要求较高。

荧光共振能量转移技术(FRET)

基于两个荧光基团间能量通过偶极-偶极耦合作用以非辐射方式从供体传递给受体的现象,可用于测定分子间的距离。在两个不同的荧光基团中，如果一个荧光基团（供体 Donor）的发射光谱与另一个基团（受体 Acceptor）的吸收光谱有一定的重叠，当这两个荧光基团间的距离合适时（一般小于100Å），就可观察到荧光能量由供体向受体转移的现象，即以前一种基团的激发波长激发时，可观察到后一个基团发射的荧光。

优点：

① 适用于活细胞和固定细胞的各类分子，

② 灵敏度更高，成像更清晰，最直观地提供蛋白质相互作用的定位和定量信息。

缺点：

① 能量供体与能量受体的光谱、排列方式、量子产率、消光系数、水溶性、抗干扰能力等方面要求较高。

② 需要更加精密的仪器，技术难度更高，操作更复杂。

荧光素酶互补法(LCI)

最初开发用于检测哺乳动物活细胞中的蛋白质-蛋白质相互作用，但后来被用于植物的研究中。借助于烟草的瞬时表达系统，将含有融合蛋白的表达载体转化农杆菌后注射烟草叶片，培养2-3天后，在注射部位均匀涂抹反应底物。通过植物活体成像系统和高灵敏度发光检测仪检测生物发光的强度，从而对蛋白之间的相互作用进行定性和定量分析。此方法已被广泛应用于动植物相关领域的蛋白质互作研究。

原理：将荧光素酶蛋白分为N端和C端2个功能片段, 即NLuc和CLuc。待测的2个目的蛋白分别与NLuc和CLuc融合。当2个目标蛋白相互作用将NLuc和CLuc紧密结合，恢复荧光素酶的催化活性，促使荧光素酶底物氧化而发光。

优点：

① 高度定量，允许在几个数量级的范围内对发光信号进行线性测量。

② 与FRET和BiFC相比，此法可对整个组织或细胞群进行采样，避免了来自单个细胞的偏差。

③ 在黑暗中测量发光，不受叶绿素和细胞壁产生的自荧光的影响。

④ 可用于在组织水平上研究蛋白质-蛋白质相互作用，该技术对于研究组织特异性蛋白质-蛋白质相互作用非常有用。

⑤ 无需显微镜，通过使用植物活体成像系统和板式发光检测仪可以在1-2分钟内收集数据，进行定性和定量分析，同时检测大量的蛋白质组。

⑥ 需要最少的样品处理和实验室培训，操作简便，实验高效。

⑦ LCI作为植物蛋白质相互作用研究的简单工具的可用性将有助于验证从酵母双杂交分析中收集的蛋白质相互作用组数据。

⑧ 实验周期更短，实验从零开始，只需1-2个月便可得到稳定的实验结果。

   实验方法   

① 分别将待测蛋白质的基因克隆到含有CLuc和NLuc编码序列的质粒中，然后将所得质粒转入农杆菌中。

② 将含有这两种质粒的农杆菌细菌浸入本氏烟草中，以便重组DNA可以被传递到植物细胞中并稳定表达。

③ 收集表达测试蛋白质的叶组织，通过植物活体成像系统和高灵敏度发光检测仪检测生物发光的强度，从而对蛋白之间的相互作用进行定性和定量分析。

技术总结

上述5种技术中应用最广泛的是Y2H，它可以大规模筛选相互作用的蛋白对，然而，其检测有一定的假阳性率和局限性。CoIP则需要特定抗体，受如蛋白质提取、结合和洗涤方案等实验操作影响较大，使得每个实验室的结果往往是不同的。FRET分析技术都需要精密的显微镜和计算，在植物上的应用依旧困难重重。与FRET相比，BiFC相对简单，已用于许多植物蛋白质-蛋白质相互作用研究，但由于细胞壁、叶绿体和其他细胞结构产生的自荧光，FRET和BiFC分析在植物中的应用与检测方法变得十分复杂。此外，由外部光源激发荧光引发的干扰，也使其在植物中的应用受限。

因此，采用荧光素酶互补法就具有重要意义。萤火虫荧光素酶的氨基末端和羧基末端只有在融合到两个相互作用的蛋白质上时才能重建活性荧光素酶，可使用植物活体成像系统来进行观测。其技术简便、可靠、灵敏度高、定量，并已获得很多文献的支持，可用于相互作用蛋白的瞬时表达或稳定的转基因表达。

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