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　　ELISA实验原理：ELISA的原理、类型及操作步骤

　　ELISA的原理

　　ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。

　　ELISA方法类型和操作步骤

　　elisa可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体，②酶标记的抗原或抗体，③酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法。

　　(一)双抗体夹心法

　　双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下：

　　(1)将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质。

　　(2)加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。

　　(3)加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。

　　(4)加底物：夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。

　　根据同样原理，将大分子抗原分别制备固相抗原和酶标抗原结合物，即可用双抗原夹心法测定标本中的抗体。

　　(二)双位点一步法

　　在双抗体夹心法测定抗原时，如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体，则在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步。这种双位点一步不但简化了操作，缩短了反应时间，如应用高亲和力的单克隆抗体，测定的敏感性和特异性也显著提高。单克隆抗体的应用使测定抗原的ELISA提高到新水平。

　　在一步法测定中，应注意钩状效应(hookeffect)，类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象。当标本中待测抗原浓度相当高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成夹心复合物，所得结果将低于实际含量。钩状效应严重时甚至可出现假阴性结果。

　　(三)间接法测抗体

　　间接法是检测抗体最常用的方法，其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。操作步骤如下：

　　(1)将特异性抗原与固相载体连接，形成固相抗原：洗涤除去未结合的抗原及杂质。

　　(2)加稀释的受检血清：其中的特异抗体与抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体。其他免疫球蛋白及血清中的杂质由于不能与固相抗原结合，在洗涤过程中被洗去。

　　(3)加酶标抗抗体：与固相复合物中的抗体结合，从而使该抗体间接dibiao记上酶。洗涤后，固相载体上的酶量就代表特异性抗体的量。例如欲测人对某种疾病的抗体，可用酶标羊抗人IgG抗体。

　　(4)加底物显色：颜色深度代表标本中受检抗体的量。

　　本法只要更换不同的固相抗原，可以用一种酶标抗抗体检测各种与抗原相应的抗体。

　　(四)竞争法

　　竞争法可用于测定抗原，也可用于测定抗体。以测定抗原为例，受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合，因此结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量呈反比。操作步骤如下：

　　(1)将特异抗体与固相载体连接，形成固相抗体。洗涤。

　　(2)待测管中加受检标本和一定量酶标抗原的混合溶液，使之与固相抗体反应。如受检标本中无抗原，则酶标抗原能顺利地与固相抗体结合。如受检标本中含有抗原，则与酶标抗原以同样的机会与固相抗体结合，竞争性地占去了酶标抗原与固相载体结合的机会，使酶标抗原与固相载体的结合量减少。参考管中只加酶标抗原，保温后，酶标抗原与固相抗体的结合可达最充分的量。洗涤。

　　(3)加底物显色：参考管中由于结合的酶标抗原最多，故颜色最深。参考管颜色深度与待测管颜色深度之差，代表受检标本抗原的量。待测管颜色越淡，表示标本中抗原含量越多。

　　(五)捕获法测IgM抗体

　　血清中针对某些抗原的特异性IgM常和特异性IgG同时存在，后者会干扰IgM抗体的测定。因此测定IgM抗本多用捕获法，先将所有血清IgM(包括异性IgM和非特异性IgM)固定在固相上，在去除IgG后再测定特异性IgM。操作步骤如下：

　　(1)将抗人IgM抗体连接在固相载体上，形成固相抗人IgM。洗涤。

　　(2)加入稀释的血清标本：保温反应后血清中的IgM抗体被固相抗体捕获。洗涤除去其他免疫球蛋白和血清中的杂质成分。

　　(3)加入特异性抗原试剂：它只与固相上的特异性IgM结合。洗涤。

　　(4)加入针对特异性的酶标抗体：使之与结合在固相上的抗原反应结合。洗涤。

　　(5)加底物显色：如有颜色显示，则表示血清标本中的特异性IgM抗体存在，是为阳性反应。

　　(六)应用亲和素和生物素的ELISA

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蛋白质是生物体的基本组成部分，参与各种生物过程。为了更好地理解和操控这些过程，科学家们开发了多种技术来分离和纯化蛋白质。其中，标签蛋白沉淀技术是一种非常有效的方法，它通过将特定的标签连接到目标蛋白上，利用标签的特性将其与其他蛋白分离开来。这项技术的优点在于其高特异性和高纯度，使得研究人员能够获得高质量的蛋白质样品，以进行进一步的分析和研究。在生物科学领域，标签蛋白沉淀技术已成为一项关键技术，它有助于我们更好地理解生命的基本过程以及开发新的治-疗方法。标签蛋白沉淀技术步骤：

①这一技术的核心在于对目标蛋白进行巧妙的改造。我们通过在蛋白编码序列中嵌入特定的标签或标记（例如谷胱甘肽S-转移酶，His标签，FLAG标签等），使目标蛋白在表达时能与标签紧密结合。

②我们将携带标签蛋白编码序列的表达载体导入适合的宿主细胞。在适当的培养条件下，宿主细胞高效地表达出目标蛋白。随后，通过细胞破碎技术释放出蛋白质。

③核心环节——沉淀。利用标签与亲和配体间的特异性结合力，我们使用具有亲和性的树脂、磁珠或柱子将目标蛋白从混合物中分离出来。不同标签有其独特的亲和性，确保了蛋白的高纯度分离。

④在成功沉淀目标蛋白后，我们通过洗涤步骤去除其他杂质和未结合的蛋白。最-后，只需特定的洗脱条件，目标蛋白便能从亲和树脂上完全洗脱下来。

⑤经过这一系列步骤，我们获得的蛋白纯净度极高，可进行各种后续分析，如SDS-PAGE、质谱等。而这些高纯度蛋白在科学实验、药物研发、生物工程等领域具有广泛的应用前景。

值得注意的是，选择合适的标签和亲和树脂是这项技术的关键。同时，标签的引入可能会对蛋白的结构和功能产生影响，因此在实验设计时必须慎重考虑。

总的来说，标签蛋白沉淀技术以其精-准、高效的特性，为蛋白质研究领域带来了革命性的突破。随着科学技术的不断进步，我们有理由相信这一技术将继续为生命科学领域带来更多突破性的发现。

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快蒸发有两个方法：加强它周围的空气流动和它的温度。氮气还是一种不活泼的气体全自动氮吹仪，也能起到隔绝氧气的作用，防止氧化。氮吹仪就是通过这些原理达到了浓缩的目的。它将氮气快速、连续、可控地吹到加热样品表面，实现大量样品的快速浓缩。

全自动氮吹仪以下方式进行清洗维护

1、加热介质：使用蒸馏水和去离子水，这将防止在水浴壁上产生水垢。注意不要使用有机溶剂作加热介质。

2、除藻剂：不加热时，在水浴的水中加以除藻剂，可防止生物污染。不应使用酸性除藻剂，并应确保所用除藻剂不会影响所要处理的样品。

3、换水：水浴中的水建议一周一换，zui长不超过一月。

4、酸性环境：当接触或暴露于酸性材料、蒸汽或样品后，应当立刻清洗，用适度的碳酸氢钠溶液或其它相似溶液中和，再用清水冲洗。长时间接触酸性物质，将会损坏仪器全自动氮吹仪。如必须长时间接触酸性物质，则应采取保护措施。

5、针头：每次使用完针后都应清洗，尽量减少针的污染。可使用有机溶剂冲洗、高压消du和索氏提取等技术。

6、浸没：浴底耐水但不防水。绝不能将水浴浸泡在任何液体中，或放置在可能发生浸泡的地方。

　　实验室组织类样品在进行研磨前处理时，往往要将样品分成少量多批次，这样可以尽可能地满足实验检测要求，提高实验效率。为达到这样的效果，我们需要用到多样品组织研磨机。

　　多样品组织研磨机是高通量组织研磨仪搭配研磨适配器组成的，原本搭载的两个球磨罐，替换成了可装载多个离心管的研磨适配器，以实现少量多批次研磨的目标。

　　多样品组织研磨机操作步骤：

　　1、将简单处理的组织样品和适量研磨球放入离心管中，然后将装好样品的离心管放入研磨适配器中。

　　2、如果样品需要低温研磨，可先将装有样品的适配器放入液氮罐中冷冻降温，几分钟后取出。

　　3、将冷冻后的研磨适配器放在夹具中间，调整位置后利用自动中心定位的紧固装置和安全锁紧装置进行固定。

　　4、盖上设备仓盖，通过液晶触摸屏设置振动频率、振动时间。

　　5、启动设备，开始对样品进行破碎研磨，可从观察窗观察研磨平台运行情况。

　　6、等待研磨完成，打开仓盖，取出样品，关闭设备。

　　多样品组织研磨机工作原理：

　　多样品组织研磨机本质上是二维振动球磨机，其工作区域有两个摇臂，运行时会做高频次的“∞”形横向水平摆动，高速运动的摇臂会带动研磨罐及罐内研磨球，赋予其动能，研磨球对样品进行撞击、挤压和摩擦，实现样品的精细研磨。

　　相比于常规型号的设备，多样品组织研磨机用研磨适配器替换了研磨罐，从而可以装填更多样品。研磨适配器是类似于离心管架的容器，内部可以放置多个离心管，离心管内部可以放置样品及研磨球。设备运行时，离心管内的研磨球对样品进行撞击、摩擦和挤压，完成样品的精细研磨。

　　以上就是对多样品组织研磨机的工作原理和操作使用步骤的介绍，多样品组织研磨机对于动物、植物组织样品研磨、生物细胞破壁、DNA/RNA提取都有良好的处理效果，应用领域涵盖农业、食品、生物、环境等多个行业。

　　细胞培养的步骤及注意事项

　　一、 复苏

　　1. 把冻存管从液氮中取出来，立即投入37℃水浴锅中，轻微摇动。液体都融化后(大概1-1.5分钟)，拿出来喷点酒精放到超净工作台里。

　　2. 把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中(用培养基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来)，1000转离心5分钟。

　　3. 把上清液倒掉，加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动，使培养皿中的细胞均匀分布。

　　4. 标好细胞种类和日期、培养人名字等，放到CO2培养箱中培养，细胞贴壁后换培养基。

　　5. 3天换一次培养基。

　　二、 传代

　　1. 培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。

　　2. 把原有培养基吸掉。

　　3. 加适当的胰蛋白酶(能覆盖细胞就行)，消化1-2分钟。

　　4. 细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培养基终止消化。

　　5. 用移液枪吹打细胞，把细胞都悬浮起来。

　　6. 把细胞吸到15ml的离心管中，1000转离心5分钟。

　　7. 倒掉上清液，加1-2ml培养基，把细胞都吹起来。

　　8. 根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中。一般，癌细胞分5个，正常细胞传3个。继续培养。

　　三、 冻存把细胞消化下来并离心(同上)。用配好的冻存液把细胞悬浮起来，分装到灭菌的冻存管中，静止几分钟，写明细胞种类，冻存日期。4℃ 30min，-20℃ 30min，-80℃过夜，然后放到液氮灌中保存。 冻存液的配制： 70%的完全培养基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加，边滴边摇。

　　细胞培养的步骤及注意事项,先和大家介绍到这，如果想要了解更多离心管的信息，可以关注天津本生生物，业给生物医药客户提供生物实验室检测耗材，欢迎广大客户来询。

　　实验室组织类样品在进行研磨前处理时，往往要将样品分成少量多批次，这样可以尽可能地满足实验检测要求，提高实验效率。为达到这样的效果，我们需要用到组织研磨机。

　　组织研磨机是高通量组织研磨仪搭配研磨适配器组成的，原本搭载的两个球磨罐，替换成了可装载多个离心管的研磨适配器，以实现少量多批次研磨的目标。下面上海净信就来详细介绍下组织研磨机的工作原理及操作使用步骤。

　　组织研磨机工作原理

　　组织研磨机本质上是二维振动球磨机，其工作区域有两个摇臂，运行时会做高频次的“∞”形横向水平摆动，高速运动的摇臂会带动研磨罐及罐内研磨球，赋予其动能，研磨球对样品进行撞击、挤压和摩擦，实现样品的精细研磨。

　　相比于常规型号的设备，组织研磨机用研磨适配器替换了研磨罐，从而可以装填更多样品。研磨适配器是类似于离心管架的容器，内部可以放置多个离心管，离心管内部可以放置样品及研磨球。设备运行时，离心管内的研磨球对样品进行撞击、摩擦和挤压，完成样品的精细研磨。

　　组织研磨机操作使用步骤

　　1、将简单处理的组织样品和适量研磨球放入离心管中，然后将装好样品的离心管放入研磨适配器中。

　　2、如果样品需要低温研磨，可先将装有样品的适配器放入液氮罐中冷冻降温，几分钟后取出。

　　3、将冷冻后的研磨适配器放在夹具中间，调整位置后利用自动中心定位的紧固装置和安全锁紧装置进行固定。

　　4、盖上设备仓盖，通过液晶触摸屏设置振动频率、振动时间。

　　5、启动设备，开始对样品进行破碎研磨，可从观察窗观察研磨平台运行情况。

　　6、等待研磨完成，打开仓盖，取出样品，关闭设备。

　　组织研磨机实验效果案例：

　　组织研磨对肺组织研磨效果图

　　组织研磨对柑橘研磨效果图

　　组织研磨对PCT材料研磨效果图

　　组织研磨对多孔材料研磨效果图

　　组织研磨对水凝胶研磨效果图

　　组织研磨对老鼠肝组织研磨效果图

　　以上就是对组织研磨机的工作原理和操作使用步骤的介绍，多样品组织研磨机对于动物、植物组织样品研磨、生物细胞破壁、DNA/RNA提取都有良好的处理效果，应用领域涵盖农业、食品、生物、环境等多个行业。