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　　ELISA实验原理：ELISA的原理、类型及操作步骤

　　ELISA的原理

　　ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。

　　ELISA方法类型和操作步骤

　　elisa可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体，②酶标记的抗原或抗体，③酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法。

　　(一)双抗体夹心法

　　双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下：

　　(1)将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质。

　　(2)加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。

　　(3)加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。

　　(4)加底物：夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。

　　根据同样原理，将大分子抗原分别制备固相抗原和酶标抗原结合物，即可用双抗原夹心法测定标本中的抗体。

　　(二)双位点一步法

　　在双抗体夹心法测定抗原时，如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体，则在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步。这种双位点一步不但简化了操作，缩短了反应时间，如应用高亲和力的单克隆抗体，测定的敏感性和特异性也显著提高。单克隆抗体的应用使测定抗原的ELISA提高到新水平。

　　在一步法测定中，应注意钩状效应(hookeffect)，类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象。当标本中待测抗原浓度相当高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成夹心复合物，所得结果将低于实际含量。钩状效应严重时甚至可出现假阴性结果。

　　(三)间接法测抗体

　　间接法是检测抗体最常用的方法，其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。操作步骤如下：

　　(1)将特异性抗原与固相载体连接，形成固相抗原：洗涤除去未结合的抗原及杂质。

　　(2)加稀释的受检血清：其中的特异抗体与抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体。其他免疫球蛋白及血清中的杂质由于不能与固相抗原结合，在洗涤过程中被洗去。

　　(3)加酶标抗抗体：与固相复合物中的抗体结合，从而使该抗体间接dibiao记上酶。洗涤后，固相载体上的酶量就代表特异性抗体的量。例如欲测人对某种疾病的抗体，可用酶标羊抗人IgG抗体。

　　(4)加底物显色：颜色深度代表标本中受检抗体的量。

　　本法只要更换不同的固相抗原，可以用一种酶标抗抗体检测各种与抗原相应的抗体。

　　(四)竞争法

　　竞争法可用于测定抗原，也可用于测定抗体。以测定抗原为例，受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合，因此结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量呈反比。操作步骤如下：

　　(1)将特异抗体与固相载体连接，形成固相抗体。洗涤。

　　(2)待测管中加受检标本和一定量酶标抗原的混合溶液，使之与固相抗体反应。如受检标本中无抗原，则酶标抗原能顺利地与固相抗体结合。如受检标本中含有抗原，则与酶标抗原以同样的机会与固相抗体结合，竞争性地占去了酶标抗原与固相载体结合的机会，使酶标抗原与固相载体的结合量减少。参考管中只加酶标抗原，保温后，酶标抗原与固相抗体的结合可达最充分的量。洗涤。

　　(3)加底物显色：参考管中由于结合的酶标抗原最多，故颜色最深。参考管颜色深度与待测管颜色深度之差，代表受检标本抗原的量。待测管颜色越淡，表示标本中抗原含量越多。

　　(五)捕获法测IgM抗体

　　血清中针对某些抗原的特异性IgM常和特异性IgG同时存在，后者会干扰IgM抗体的测定。因此测定IgM抗本多用捕获法，先将所有血清IgM(包括异性IgM和非特异性IgM)固定在固相上，在去除IgG后再测定特异性IgM。操作步骤如下：

　　(1)将抗人IgM抗体连接在固相载体上，形成固相抗人IgM。洗涤。

　　(2)加入稀释的血清标本：保温反应后血清中的IgM抗体被固相抗体捕获。洗涤除去其他免疫球蛋白和血清中的杂质成分。

　　(3)加入特异性抗原试剂：它只与固相上的特异性IgM结合。洗涤。

　　(4)加入针对特异性的酶标抗体：使之与结合在固相上的抗原反应结合。洗涤。

　　(5)加底物显色：如有颜色显示，则表示血清标本中的特异性IgM抗体存在，是为阳性反应。

　　(六)应用亲和素和生物素的ELISA

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　　实验室组织类样品在进行研磨前处理时，往往要将样品分成少量多批次，这样可以尽可能地满足实验检测要求，提高实验效率。为达到这样的效果，我们需要用到多样品组织研磨机。

　　多样品组织研磨机是高通量组织研磨仪搭配研磨适配器组成的，原本搭载的两个球磨罐，替换成了可装载多个离心管的研磨适配器，以实现少量多批次研磨的目标。

　　多样品组织研磨机操作步骤：

　　1、将简单处理的组织样品和适量研磨球放入离心管中，然后将装好样品的离心管放入研磨适配器中。

　　2、如果样品需要低温研磨，可先将装有样品的适配器放入液氮罐中冷冻降温，几分钟后取出。

　　3、将冷冻后的研磨适配器放在夹具中间，调整位置后利用自动中心定位的紧固装置和安全锁紧装置进行固定。

　　4、盖上设备仓盖，通过液晶触摸屏设置振动频率、振动时间。

　　5、启动设备，开始对样品进行破碎研磨，可从观察窗观察研磨平台运行情况。

　　6、等待研磨完成，打开仓盖，取出样品，关闭设备。

　　多样品组织研磨机工作原理：

　　多样品组织研磨机本质上是二维振动球磨机，其工作区域有两个摇臂，运行时会做高频次的“∞”形横向水平摆动，高速运动的摇臂会带动研磨罐及罐内研磨球，赋予其动能，研磨球对样品进行撞击、挤压和摩擦，实现样品的精细研磨。

　　相比于常规型号的设备，多样品组织研磨机用研磨适配器替换了研磨罐，从而可以装填更多样品。研磨适配器是类似于离心管架的容器，内部可以放置多个离心管，离心管内部可以放置样品及研磨球。设备运行时，离心管内的研磨球对样品进行撞击、摩擦和挤压，完成样品的精细研磨。

　　以上就是对多样品组织研磨机的工作原理和操作使用步骤的介绍，多样品组织研磨机对于动物、植物组织样品研磨、生物细胞破壁、DNA/RNA提取都有良好的处理效果，应用领域涵盖农业、食品、生物、环境等多个行业。

　　实验室组织类样品在进行研磨前处理时，往往要将样品分成少量多批次，这样可以尽可能地满足实验检测要求，提高实验效率。为达到这样的效果，我们需要用到组织研磨机。

　　组织研磨机是高通量组织研磨仪搭配研磨适配器组成的，原本搭载的两个球磨罐，替换成了可装载多个离心管的研磨适配器，以实现少量多批次研磨的目标。下面上海净信就来详细介绍下组织研磨机的工作原理及操作使用步骤。

　　组织研磨机工作原理

　　组织研磨机本质上是二维振动球磨机，其工作区域有两个摇臂，运行时会做高频次的“∞”形横向水平摆动，高速运动的摇臂会带动研磨罐及罐内研磨球，赋予其动能，研磨球对样品进行撞击、挤压和摩擦，实现样品的精细研磨。

　　相比于常规型号的设备，组织研磨机用研磨适配器替换了研磨罐，从而可以装填更多样品。研磨适配器是类似于离心管架的容器，内部可以放置多个离心管，离心管内部可以放置样品及研磨球。设备运行时，离心管内的研磨球对样品进行撞击、摩擦和挤压，完成样品的精细研磨。

　　组织研磨机操作使用步骤

　　1、将简单处理的组织样品和适量研磨球放入离心管中，然后将装好样品的离心管放入研磨适配器中。

　　2、如果样品需要低温研磨，可先将装有样品的适配器放入液氮罐中冷冻降温，几分钟后取出。

　　3、将冷冻后的研磨适配器放在夹具中间，调整位置后利用自动中心定位的紧固装置和安全锁紧装置进行固定。

　　4、盖上设备仓盖，通过液晶触摸屏设置振动频率、振动时间。

　　5、启动设备，开始对样品进行破碎研磨，可从观察窗观察研磨平台运行情况。

　　6、等待研磨完成，打开仓盖，取出样品，关闭设备。

　　组织研磨机实验效果案例：

　　组织研磨对肺组织研磨效果图

　　组织研磨对柑橘研磨效果图

　　组织研磨对PCT材料研磨效果图

　　组织研磨对多孔材料研磨效果图

　　组织研磨对水凝胶研磨效果图

　　组织研磨对老鼠肝组织研磨效果图

　　以上就是对组织研磨机的工作原理和操作使用步骤的介绍，多样品组织研磨机对于动物、植物组织样品研磨、生物细胞破壁、DNA/RNA提取都有良好的处理效果，应用领域涵盖农业、食品、生物、环境等多个行业。

紫外老化试验箱是一种用于模拟自然环境中的紫外线、湿度和温度对材料老化影响的设备。它被广泛用于研究材料的耐久性、性能和可靠性，是产品质量控制和研发过程中不可或缺的实验设备。

紫外老化试验箱通常由箱体、紫外灯、控温系统、湿度控制系统和样品旋转系统等组成。箱体用于容纳样品，紫外灯用于模拟太阳光中的紫外线，控温系统用于控制试验温度，湿度控制系统用于控制试验湿度，样品旋转系统用于使样品均匀受到紫外线的照射。

操作紫外老化试验箱的步骤如下：

1. 准备样品：将需要测试的材料制作成标准样件，并清洗干净。

2. 设置试验参数：根据测试需求，设置试验温度、试验湿度和紫外灯的照射时间等参数。

3. 将样品放入试验箱：将准备好的样品放入试验箱中，确保样品均匀受到紫外线的照射。

4. 开启试验箱：开启试验箱的电源，启动试验。

5. 定期观察样品的的变化：在试验过程中，需要定期观察样品的颜色变化、性能变化等，记录实验数据。

6. 结束试验：达到设定的试验时间后，关闭试验箱的电源，结束试验。

使用紫外老化试验箱时需要注意以下事项：

1. 注意安全：试验过程中，需要避免手伸入试验箱中，以防烫伤或者紫外线过度照射伤害皮肤。

2. 保养设备：定期清洗试验箱内部，更换滤网，保持设备的良好运行状态。

3. 正确使用设备：根据设备操作手册进行操作，避免误操作导致设备损坏或者样品测试结果不准确。

在使用紫外老化试验箱的过程中，可能会遇到一些问题，例如紫外灯不亮、控温系统失灵等。对于这些问题，可以参考设备操作手册或者联系设备生产商进行解决。

紫外老化试验箱具有模拟自然环境老化的作用，可以有效地检测材料的耐久性、性能和可靠性。但是，由于设备的价格较高，维护成本也较高，因此需要在购买和维护设备时进行综合考虑。

总之，紫外老化试验箱是一种重要的材料老化测试设备，可以有效地帮助研究人员了解材料的性能和可靠性。在使用设备时，需要注意安全和设备的保养，同时正确使用设备，避免误操作对设备造成损坏或者影响测试结果的准确性。

1、基本原理 

气相色谱（GC）是一种分离技术。实际工作中要分析的样品往往是复杂基体中的多组分混合物，对含有未知组分的样品，首先必须将其分离，然后才能对有关组分进行进一步的分析。混合物的分离是基于组分的物理化学性质的差异，GC主要是利用物质的沸点、极性及吸附性质的差异来实现混合物的分离。待分析样品在汽化室汽化后被惰性气体（即载气，一般是N2、He等）带入色谱柱，柱内含有液体或固体固定相，由于样品中各组分的沸点、极性或吸附性能不同，每种组分都倾向于在流动相和固定相之间形成分配或吸附平衡。但由于载气是流动的，这种平衡实际上很难建立起来，也正是由于载气的流动，使样品组分在运动中进行反复多次的分配或吸附/解附，结果在载气中分配浓度大的组分先流出色谱柱，而在固定相中分配浓度大的组分后流出。当组分流出色谱柱后，立即进入检测器，检测器能够将样品组分的存在与否转变为电信号，而电信号的大小与被测组分的量或浓度成比例，当将这些信号放大并记录下来时，就是如图2所示的色谱图（假设样品分离出三个组分），它包含了色谱的全部原始信息。在没有组分流出时，色谱图的记录是检测器的本底信号，即色谱图的基线。 

2、气相色谱结构及维护 

2.1进样隔垫 

进样隔垫一般为硅橡胶材料制成，一般可分普通型、优质型和高温型三种，普通型为米黄色，不耐高温，一般在200℃以下使用；优质型可耐温到300℃；高温型为绿色，使用温度可高于350℃，至色谱柱Z多使用温度的400℃。正因为进样隔垫多为硅橡胶材料制成，其中不可避免地含有一些残留溶剂和/或低分子齐聚物，另外由于汽化室高温的影响，硅橡胶会发生部分降解，这些残留的溶剂和降解产物如果进入色谱柱，就可能出现“鬼峰”（即不是样品本身的峰），从而影响分析。解决的办法有：一是进行“隔垫吹扫”，二是更换进样隔垫。 

一般更换进样隔垫的周期以下面三个条件为准：（1）出现“鬼峰”；（2）保留时间和峰面积重现性差；（3）手动进样次数70次，或自动进样次数50次以后。 

2.2 玻璃衬管

气相色谱的衬管多为玻璃或石英材料制成，主要分成分流衬管、不分流衬管、填充柱玻璃衬管三种类型。衬管能起到保护色谱柱的作用，在分流/不分流进样时，不挥发的样品组分会滞留在衬管中而不进入色谱柱。如果这些污染物在衬管内积存一定量后，就会对分析产生直接影响。比如，它会吸附极性样品组分而造成峰拖尾，甚至峰分裂，还会出现“鬼峰”，因此一定要保持衬管干净，注意及时清洗和更换。

玻璃衬管清洗的原则和方法

当以下现象：（1）出现“鬼峰”；（2）保留时间和峰面积重现性差出现时，应考虑对衬管进行清洗。清洗的方法和步骤如下：（1）拆下玻璃衬管；（2）取出石英玻璃棉；（3）用浸过溶剂（比如丙酮）的纱布清洗衬管内壁。 玻璃衬管更换时要注意玻璃棉的装填：装填量3～6mg，高度5～10mm。要求填充均匀、平整。 

2.3 气体过滤器 

变色硅胶可根据颜色变化来判断其性能，但分子筛等吸附有机物的过滤器就不能用肉眼判断了，所以必须定期更换，一般3个月更换或再生一次。 

由于分流气路中的分子筛过滤器饱和或受污严重，就会出现基线漂移大的现象，这个时候就必须更换或再生过滤器了。再生的方法是：（1）卸下过滤器，反方向连接于原色谱柱位置。（2）再生条件：载气流速40～50ml/min，温度340℃，时间5h。

2.4 检测器 

如果说色谱柱是色谱分离的心脏，那么，检测器就是色谱仪的眼睛。无论色谱分离的效果多么好，若没有好的检测器就会“看”不出分离效果。因此，高灵敏度、高选择性的检测器一直是色谱仪发展的关键技术。目前，GC所使用的检测器有多种，其中常用的检测器主要有火焰离子化检测器（FID）、火焰热离子检测器（FTD）、火焰光度检测器（FPD）、热导检测器（TCD）、电子俘获检测器（ECD）等。下面对检测器的日常维护作简单讨论： 

2.4.1火焰离子化检测器（FID） 

（1） FID虽然是准通用型检测器，但有些物质在检测器上的响应值很小或无响应，这些物质包括yongjiu气体、卤代硅烷、H2O、NH3、CO、CO2、CS2、CCl4，等等。所以检测这些物质时不应使用FID。 

（2）FID的灵敏度与氢气、空气、氮气的比例有直接关系，因此要注意优化，一般三者的比例应接近或等于1∶10∶1。 

（3）FID是用氢气在空气燃烧所产生的火焰使被测物质离子化的，故应注意安全问题。在未接上色谱柱时，不要打开氢气阀门，以免氢气进入柱箱。测定流量时，一定不能让氢气和空气混合，即测氢气时，要关闭空气，反之亦然。无论什么原因导致火焰熄灭时，应尽量关闭氢气阀门，直到排除了故障重新点火时，再打开氢气阀门。 

（4）为防止检测器被污染，检测器温度设置不应低于色谱柱实际工作的Z强温度。检测器被污染的影响轻则灵敏度明显下降或噪音增大，重则点不着火。消除污染的办法是对喷嘴和气路管道的清洗。具体方法是：断开色谱柱，拔出信号收集极；用一细钢丝插入喷嘴进行疏通，并用丙酮、乙醇等溶剂浸泡。

2.4.2 火焰热离子检测器（FTD） 

FTD使用注意事项： 

（1） 铷珠：避免样品中带水，使用寿命大约600～700h； 

（2） 载气：N2或He，要求纯度99.999%。一般He的灵敏度高； 

（3） 空气：建议是选钢瓶空气，无油； 

（4） 氢气：要求纯度99.999%。 

另外需要注意的是使用FTD时，不能使用含氰基固定液的色谱柱，比如OV-1701。 

2.4.3火焰光度检测器（FPD） 

FPD使用注意事项： 

（1） FPD也是使用氢火焰，故安全问题与FID相同； 

（2） 顶部温度开关常开（250℃）； 

（3） FPD的氢气、空气和尾吹气流量与FID不同，一般氢气为60～80ml/min，空气为 100～120ml/min，而尾吹气和柱流量之和为20～25ml/min。分析强吸附性样品如农药等，中部温度应高于底部温度约20℃； 

（4） 更换滤光片或点火时，应先关闭光电倍增管电源； 

（5） 火焰检测器，包括FID、FPD，必须在温度升高后再点火；关闭时，应先熄火再降温。 

2.4.4热导检测器（TCD）

TCD使用注意事项： 

（1）确保热丝不被烧断。在检测器通电之前，一定要确保载气已经通过了检测器，否则，热丝就可能被烧断，致使检测器报废；关机时一定要先关检测器电源，然后关载气。任何时候进行有可能切断通过TCD的载气流量的操作，都要关闭检测器电源； 

（2）载气中含有氧气时，热丝寿命会缩短，所以载气中必须彻底除氧； 

（3）用氢气作载气时，气体排至室外； 

（4）基线漂移大时，要考虑以下几个问题：双柱是否相同，双柱气体流速是否相同；是否漏气； 更换色谱柱至检测器的石墨垫圈。 池体污染； 清洗措施：正己烷浸泡冲洗。

 2.4.5 电子俘获检测器（ECD） 

ECD使用注意事项： 

（1） 气路安装气体过滤器和氧气捕集器； 氧气捕集器再生： 

（2） 使用填充柱时也需供给尾吹气（2～3ml/min）； 

（3） 操作温度为250～350℃。无论色谱柱温度多么低，ECD的温度均不应低于250℃， 否则检测器很难平衡。

（4） 关闭载气和尾吹气后，用堵头封住ECD出口，避免空气进入。

3、基本操作

3.1 加热 

由于气相色谱仪的生产厂家和质量的不同．测定温度的方式也不相同 对于用微机设数法或拨轮选择法给定温度．一般是直接设数或选择合适给定温度值加以升温．而如果是采用旋钮定位法．则有技巧可言

3.1.1过温定位法

将温控旋钮调至低于操作温度约30℃处 给气相色谱仪升温 当过温至约为操作温度时．配台温度指示和加热指示灯．再逐渐将温控旋钮调至台适位置

3.1.2 分步递进定位法

将温控旋钮朝升温方向转动一个角度．升温开始．指示灯亮：当温度基本稳定时 再同向转动温控旋钮．开始继续升温：如此递进调节、直至恒温在工作温度上.

3.2 调池平衡 

调池平衡 实际是调热导电桥平衡．使之有较为台适的输出 讲调节技巧．其实是对具有池平衡、调零和记录调零等

第1步．用池平衡或调零旋钮将记录仪指针调至台适位置；

第二步．自衰减至l6倍左右．观察记录仪指针移动情况；

原文地址：http://www.easylabplus.com/index-news-describe-html-973.html