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　　ELISA实验原理：ELISA的原理、类型及操作步骤

　　ELISA的原理

　　ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。

　　ELISA方法类型和操作步骤

　　elisa可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体，②酶标记的抗原或抗体，③酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法。

　　(一)双抗体夹心法

　　双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下：

　　(1)将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质。

　　(2)加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。

　　(3)加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。

　　(4)加底物：夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。

　　根据同样原理，将大分子抗原分别制备固相抗原和酶标抗原结合物，即可用双抗原夹心法测定标本中的抗体。

　　(二)双位点一步法

　　在双抗体夹心法测定抗原时，如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体，则在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步。这种双位点一步不但简化了操作，缩短了反应时间，如应用高亲和力的单克隆抗体，测定的敏感性和特异性也显著提高。单克隆抗体的应用使测定抗原的ELISA提高到新水平。

　　在一步法测定中，应注意钩状效应(hookeffect)，类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象。当标本中待测抗原浓度相当高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成夹心复合物，所得结果将低于实际含量。钩状效应严重时甚至可出现假阴性结果。

　　(三)间接法测抗体

　　间接法是检测抗体最常用的方法，其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。操作步骤如下：

　　(1)将特异性抗原与固相载体连接，形成固相抗原：洗涤除去未结合的抗原及杂质。

　　(2)加稀释的受检血清：其中的特异抗体与抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体。其他免疫球蛋白及血清中的杂质由于不能与固相抗原结合，在洗涤过程中被洗去。

　　(3)加酶标抗抗体：与固相复合物中的抗体结合，从而使该抗体间接dibiao记上酶。洗涤后，固相载体上的酶量就代表特异性抗体的量。例如欲测人对某种疾病的抗体，可用酶标羊抗人IgG抗体。

　　(4)加底物显色：颜色深度代表标本中受检抗体的量。

　　本法只要更换不同的固相抗原，可以用一种酶标抗抗体检测各种与抗原相应的抗体。

　　(四)竞争法

　　竞争法可用于测定抗原，也可用于测定抗体。以测定抗原为例，受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合，因此结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量呈反比。操作步骤如下：

　　(1)将特异抗体与固相载体连接，形成固相抗体。洗涤。

　　(2)待测管中加受检标本和一定量酶标抗原的混合溶液，使之与固相抗体反应。如受检标本中无抗原，则酶标抗原能顺利地与固相抗体结合。如受检标本中含有抗原，则与酶标抗原以同样的机会与固相抗体结合，竞争性地占去了酶标抗原与固相载体结合的机会，使酶标抗原与固相载体的结合量减少。参考管中只加酶标抗原，保温后，酶标抗原与固相抗体的结合可达最充分的量。洗涤。

　　(3)加底物显色：参考管中由于结合的酶标抗原最多，故颜色最深。参考管颜色深度与待测管颜色深度之差，代表受检标本抗原的量。待测管颜色越淡，表示标本中抗原含量越多。

　　(五)捕获法测IgM抗体

　　血清中针对某些抗原的特异性IgM常和特异性IgG同时存在，后者会干扰IgM抗体的测定。因此测定IgM抗本多用捕获法，先将所有血清IgM(包括异性IgM和非特异性IgM)固定在固相上，在去除IgG后再测定特异性IgM。操作步骤如下：

　　(1)将抗人IgM抗体连接在固相载体上，形成固相抗人IgM。洗涤。

　　(2)加入稀释的血清标本：保温反应后血清中的IgM抗体被固相抗体捕获。洗涤除去其他免疫球蛋白和血清中的杂质成分。

　　(3)加入特异性抗原试剂：它只与固相上的特异性IgM结合。洗涤。

　　(4)加入针对特异性的酶标抗体：使之与结合在固相上的抗原反应结合。洗涤。

　　(5)加底物显色：如有颜色显示，则表示血清标本中的特异性IgM抗体存在，是为阳性反应。

　　(六)应用亲和素和生物素的ELISA

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　　实验室组织类样品在进行研磨前处理时，往往要将样品分成少量多批次，这样可以尽可能地满足实验检测要求，提高实验效率。为达到这样的效果，我们需要用到组织研磨机。

　　组织研磨机是高通量组织研磨仪搭配研磨适配器组成的，原本搭载的两个球磨罐，替换成了可装载多个离心管的研磨适配器，以实现少量多批次研磨的目标。下面上海净信就来详细介绍下组织研磨机的工作原理及操作使用步骤。

　　组织研磨机工作原理

　　组织研磨机本质上是二维振动球磨机，其工作区域有两个摇臂，运行时会做高频次的“∞”形横向水平摆动，高速运动的摇臂会带动研磨罐及罐内研磨球，赋予其动能，研磨球对样品进行撞击、挤压和摩擦，实现样品的精细研磨。

　　相比于常规型号的设备，组织研磨机用研磨适配器替换了研磨罐，从而可以装填更多样品。研磨适配器是类似于离心管架的容器，内部可以放置多个离心管，离心管内部可以放置样品及研磨球。设备运行时，离心管内的研磨球对样品进行撞击、摩擦和挤压，完成样品的精细研磨。

　　组织研磨机操作使用步骤

　　1、将简单处理的组织样品和适量研磨球放入离心管中，然后将装好样品的离心管放入研磨适配器中。

　　2、如果样品需要低温研磨，可先将装有样品的适配器放入液氮罐中冷冻降温，几分钟后取出。

　　3、将冷冻后的研磨适配器放在夹具中间，调整位置后利用自动中心定位的紧固装置和安全锁紧装置进行固定。

　　4、盖上设备仓盖，通过液晶触摸屏设置振动频率、振动时间。

　　5、启动设备，开始对样品进行破碎研磨，可从观察窗观察研磨平台运行情况。

　　6、等待研磨完成，打开仓盖，取出样品，关闭设备。

　　组织研磨机实验效果案例：

　　组织研磨对肺组织研磨效果图

　　组织研磨对柑橘研磨效果图

　　组织研磨对PCT材料研磨效果图

　　组织研磨对多孔材料研磨效果图

　　组织研磨对水凝胶研磨效果图

　　组织研磨对老鼠肝组织研磨效果图

　　以上就是对组织研磨机的工作原理和操作使用步骤的介绍，多样品组织研磨机对于动物、植物组织样品研磨、生物细胞破壁、DNA/RNA提取都有良好的处理效果，应用领域涵盖农业、食品、生物、环境等多个行业。

　　样品的低温冷冻研磨粉碎在实验室中的已成为普遍性的应用，特别是某些对于动物的研究课题实验，往往需要先将动物组织进行研磨前处理，而手动研磨不容易达到预期的效果，不能获取到合格的检测样品，就需要研磨仪来操作了。

　　试样在实验研磨前需做的准备工作：
　　
　　在实验操作开始前，需将缓冲液先进行低温预冷操作，然后再准备若干的冰块以备用，之后再使用浓度较高的乙醇对镊子、剪子等研磨工具进行消毒处理，如果的运行过程中需要对样品进行RNA等成分的提取，还需再次使用酒精对镊子和剪刀等物品进行再次的消毒杀菌，以尽可能的消毒RNA酶。
　　
　　再准备好2ml的离心管置于冰块上做低温预处理，并在其加入适量的PBS缓冲液，再将待研磨的组织样本从零下80℃的冰箱内取出，置于冰上，使用灭菌后的镊子和剪刀，将其样本切成小块，然后再将其放入加好相应液体的离心管中备用。
　　
　　后续便可开展对试样的研磨工作了，对动物组织研磨提取DNA等的工作，我们可以借助低温冷冻研磨仪来进行操作，使用简单研磨GX。

　　准备好冷冻研磨设备，将其离心管放到研磨设备的适配器内，设置对样品的研磨参数，开启设备的运转，待设备停止运转后便可取出研磨的试样，以备后续的实验应用。
　　
　　冷冻研磨仪对样品处理的三大关键要素：GX率研磨一批处理多达192个样品；低温研磨温度可自定义调节；低温保护样品成分不破坏样品成分。

　　实验室组织类样品在进行研磨前处理时，往往要将样品分成少量多批次，这样可以尽可能地满足实验检测要求，提高实验效率。为达到这样的效果，我们需要用到多样品组织研磨机。

　　多样品组织研磨机是高通量组织研磨仪搭配研磨适配器组成的，原本搭载的两个球磨罐，替换成了可装载多个离心管的研磨适配器，以实现少量多批次研磨的目标。

　　多样品组织研磨机操作步骤：

　　1、将简单处理的组织样品和适量研磨球放入离心管中，然后将装好样品的离心管放入研磨适配器中。

　　2、如果样品需要低温研磨，可先将装有样品的适配器放入液氮罐中冷冻降温，几分钟后取出。

　　3、将冷冻后的研磨适配器放在夹具中间，调整位置后利用自动中心定位的紧固装置和安全锁紧装置进行固定。

　　4、盖上设备仓盖，通过液晶触摸屏设置振动频率、振动时间。

　　5、启动设备，开始对样品进行破碎研磨，可从观察窗观察研磨平台运行情况。

　　6、等待研磨完成，打开仓盖，取出样品，关闭设备。

　　多样品组织研磨机工作原理：

　　多样品组织研磨机本质上是二维振动球磨机，其工作区域有两个摇臂，运行时会做高频次的“∞”形横向水平摆动，高速运动的摇臂会带动研磨罐及罐内研磨球，赋予其动能，研磨球对样品进行撞击、挤压和摩擦，实现样品的精细研磨。

　　相比于常规型号的设备，多样品组织研磨机用研磨适配器替换了研磨罐，从而可以装填更多样品。研磨适配器是类似于离心管架的容器，内部可以放置多个离心管，离心管内部可以放置样品及研磨球。设备运行时，离心管内的研磨球对样品进行撞击、摩擦和挤压，完成样品的精细研磨。

　　以上就是对多样品组织研磨机的工作原理和操作使用步骤的介绍，多样品组织研磨机对于动物、植物组织样品研磨、生物细胞破壁、DNA/RNA提取都有良好的处理效果，应用领域涵盖农业、食品、生物、环境等多个行业。

紫外老化试验箱是一种用于模拟自然环境中的紫外线、湿度和温度对材料老化影响的设备。它被广泛用于研究材料的耐久性、性能和可靠性，是产品质量控制和研发过程中不可或缺的实验设备。

紫外老化试验箱通常由箱体、紫外灯、控温系统、湿度控制系统和样品旋转系统等组成。箱体用于容纳样品，紫外灯用于模拟太阳光中的紫外线，控温系统用于控制试验温度，湿度控制系统用于控制试验湿度，样品旋转系统用于使样品均匀受到紫外线的照射。

操作紫外老化试验箱的步骤如下：

1. 准备样品：将需要测试的材料制作成标准样件，并清洗干净。

2. 设置试验参数：根据测试需求，设置试验温度、试验湿度和紫外灯的照射时间等参数。

3. 将样品放入试验箱：将准备好的样品放入试验箱中，确保样品均匀受到紫外线的照射。

4. 开启试验箱：开启试验箱的电源，启动试验。

5. 定期观察样品的的变化：在试验过程中，需要定期观察样品的颜色变化、性能变化等，记录实验数据。

6. 结束试验：达到设定的试验时间后，关闭试验箱的电源，结束试验。

使用紫外老化试验箱时需要注意以下事项：

1. 注意安全：试验过程中，需要避免手伸入试验箱中，以防烫伤或者紫外线过度照射伤害皮肤。

2. 保养设备：定期清洗试验箱内部，更换滤网，保持设备的良好运行状态。

3. 正确使用设备：根据设备操作手册进行操作，避免误操作导致设备损坏或者样品测试结果不准确。

在使用紫外老化试验箱的过程中，可能会遇到一些问题，例如紫外灯不亮、控温系统失灵等。对于这些问题，可以参考设备操作手册或者联系设备生产商进行解决。

紫外老化试验箱具有模拟自然环境老化的作用，可以有效地检测材料的耐久性、性能和可靠性。但是，由于设备的价格较高，维护成本也较高，因此需要在购买和维护设备时进行综合考虑。

总之，紫外老化试验箱是一种重要的材料老化测试设备，可以有效地帮助研究人员了解材料的性能和可靠性。在使用设备时，需要注意安全和设备的保养，同时正确使用设备，避免误操作对设备造成损坏或者影响测试结果的准确性。