全部评论(1条)
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- 敏姐是个好人0 2016-06-17 00:00:00
- 一般贴壁细胞有两种方法洗脱下来，一种是直接用刮具刮下来，一种是使用酶消化把它弄下来
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在本应用示例中，我们展示了如何从μ-Slide VI 0.4通道载玻片中洗脱培养后的贴壁细胞。该方法适用于不同规格的通道载玻片。
1.根据实验说明将您的细胞培养到所需的汇合度。
装有细胞和培养基的μ-Slide VI 0.4
2.从μ-Slide VI 0.4通道载玻片的通道口中取出培养基，不要吸干整个通道。
3.用PBS或任何其他适当的缓冲液清洗两次，然后从另一端吸出。每个通道使用体积为100μl。我们建议同时使用细胞培养吸引器和移液器。如图所示，使用吸引器的尖端和移液器。
µ-Slide VI 0.4的一个通道的横截面显示了PBS洗涤步骤
4.使用细胞培养吸液器从通道中吸出全部PBS
在这个步骤中，缓冲液从容器口和通道中完全去除
5.立即用30μl分离溶液（例如胰蛋白酶/EDTA或Accutase）重新填充通道。如图所示，将移液器吸头直接放在通道的入口上。
将30µl分离溶液填充到空通道中
6.再将您的细胞放入培养箱中。由于生长面积和体积的纵横比不同，分离过程可能需要比平时更长的时间（2-3分钟）。用相差显微镜观察细胞脱离。如果没有发生分离，请增加分离溶液的浓度或使用更长的孵育时间。
细胞会在几分钟后分离
7.细胞成圆形并分离后，用100μl新鲜培养基或终止溶液冲洗每个通道
分离的细胞被100µl新鲜培养基冲出通道
8.从通道的另一端取出细胞悬液。如果还剩一些细胞，请重复冲洗步骤。
9.收集悬浮细胞并去除或稀释分离溶液
在细胞悬浮后，可以通过从通道中吸出溶液来收集
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