贴壁细胞怎样进行传代？

baobeiyaoyao88 2013-08-22 14:30:37 302 浏览

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丶风流先森 2013-08-23 00:00:00

你说的是动物细胞培养吗，如果是就要用胰蛋白酶处理，把细胞分散，然后把分散的细胞分成几个培养基中培养

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ayue33333 2013-08-23 00:00:00

贴壁细胞细胞在培养瓶长成致密单层后，继续生长的空间不足，培养基中的营养成份也消耗较多，同时代谢废物也有较多堆积，需要分瓶培养，对细胞进行传代扩增。对于贴壁不太紧的细胞如293，可以直接吹散后分瓶。而对于贴壁较紧的细胞如CHO，则需要以胰酶消化后再吹散分瓶，一般过程为（以下操作均按无菌操作的要求进行）：将长成致密单层细胞的细胞瓶中原来的培养液弃去；加入0.25％胰酶溶液，视细胞瓶的大小加入体积为0.5ml或更多，以使充分浸润；一般消化时间约为1至3分钟，肉眼观察瓶壁半透明的细胞层，当见到出现细针孔空隙时，弃去胰酶溶液，并加入适量的细胞培养液终止消化；视实验要求分入多瓶继续培养，一般为一传二到一传四的比例。生物帮上面有这方面的介绍， http://www.bio1000.com/industry/shibie/ 生物识别技术动态，生命科学产业动态。

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～缕清风 2017-09-01 05:44:54

贴壁细胞细胞在培养瓶长成致密单层后，继续生长的空间不足，培养基中的营养成份也消耗较多，同时代谢废物也有较多堆积，需要分瓶培养，对细胞进行传代扩增。贴壁细胞传代标准步骤：一、准备工作 1. 废液缸 2. 吸管 3. 新鲜培养基 4. 消化液 5. 细胞洗涤液 6. 离心管 7. 油性记号笔/普通签字笔 8. 实验记录本二、实验步骤 1. 打开层流，打开层流间和超净台的紫外线灯，离心管、废液缸和吸管需同时照射； 2. 把水浴锅调整到37℃ 并使其稳定； 3. 将消化液和新鲜培养基放置到水浴锅中，注意防止水面高于瓶肩，10ml液体保持3分钟，（100ml液体保持10分钟， 200ml液体保持15分钟，500ml液体保持20分钟），间或摇动； 4. 着无菌服装，帽子，口罩和手套 5. 用75%乙醇消毒培养基瓶外壁，放置到超净台上； 6. 将细胞培养瓶取出，用75%乙醇棉球消毒瓶底； 7. 用吸管吸弃旧培养基，更换吸管，于非细胞培养面加入等量细胞洗涤液，轻轻摇晃使其覆盖整个瓶底，吸弃细胞洗涤液，更换吸管，重复洗涤一次； 8. 加入少量细胞消化液，37℃镜下观察消化； 9. 当细胞明显回缩后，加入少量新鲜细胞培养基终止消化，轻柔吹打底面2~3次后收集所有液体入新离心管中； 10. 1200转/分钟离心8分钟，弃上清，细胞沉淀用适量新鲜培养基悬浮； 11. 加入到新培养瓶中，标记瓶号与细胞批次 12. 记录实验过程和细胞培养瓶号。

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