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植物高尔基体提取试剂盒（酶法）

植物高尔基体提取试剂盒

试剂盒储存条件：

【注】：2-8℃ 保存。

试剂瓶开盖后各组份按要求条件保存。

拆封后请尽快使用完!

试剂盒组成：

产品组成 组份编号 有效期：

规格 50T 100T

试剂

A：高尔基体提取液A 50ml 100ml 36042A

试剂

B：高尔基体提取液B 25ml 50ml 36042B

试剂

C：试剂WT 1ml 1ml 36042C

试剂

D：高尔基体保存液D 10ml 20ml 36042D

使用说明书一年。

植物高尔基体提取试剂盒-非酶法

【注】：

有效期为试剂盒未拆封前按要求条件保存的有效期。

试剂拆封后请尽快使用完!

注意事项：

1.正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得实验效果。

2.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。

3.禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。

4.样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。

5.使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并清除残留清洁剂。

6.实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

产品简介：

试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：

植物高尔基体提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种新鲜植物组织样本中提取高尔基体。

本试剂盒提取的高尔基体具有完整的活性和功能，可以用于各种下游应用。

除了高尔基体提取试剂盒，还有细胞核提取、线粒体提取等各种亚细胞结构的提取试剂盒以及相关的蛋白质提取试剂盒。

试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：

植物高尔基体提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种新鲜植物组织样本中提取高尔基

体。

本试剂盒提取的高尔基体具有完整的活性和功能，可以用于各种下游应用。

除了高尔基体提取试剂盒，还有细胞核提取、线粒体提取等各种亚细胞结构的提取试剂

盒以及相关的蛋白质提取试剂盒。

仪器：

离心机

振荡器

涡旋混匀器

Dounce匀浆器

移液器

冰箱

冰盒

试剂：PBS (pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液(1X)) (phosphate buffer saline/Dulbecco’s PBS：约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mMNaCl和3mM KCl)

耗材：

离心管 

吸头

手套

植物高尔基体提取试剂盒（酶法）

使用方法：

使用注意事项：

旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

使用  Dounce 匀浆器匀浆，如果没有 Dounce 匀浆器，用普通玻璃匀浆器匀浆也可，但是高 尔基体回收率会下降。   离心机转速有相对离心力(RCF，×g)和每分钟转速(RPM，r/min)两种表示方式，有些离心机 设置有RPM 和×g   显示切换，但部分离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算： g=r×1.118×10-5×rpm2 (r   为有效离心半径，即从离心机轴心到离心收集管底部ZX位置的长度，单 位为厘米) 例如: 转速为 3000rpm，有效离心半径为 10   cm，则相对离心力(RCF，×g)为 =10×1.118×10-5×30002=1006.2(×g)。

1. 取 200-500 mg 新鲜植物叶片组织样本，用 PBS 洗涤干净。

2. 用剪刀尽可能剪碎，用冷 PBS 洗涤两次。

植物高尔基体提取试剂盒-酶法

【注】：

也可用刀片将叶片样本切成小块。

3. 加入 500μl 冷的试剂 A，置冰上 10 分钟。

4. 用 Dounce 匀浆器充分匀浆 30-40 次。

【注】：

每上下一个来回为一次。

也可以用电动匀浆机充分匀浆。

5. 将匀浆液在 4℃，1000g 力条件下离心 10 分钟。弃沉淀，收集上清。

6. 将上清在 4℃，3000g 力条件下离心 10 分钟。弃沉淀，收集上清。

7. 将上清在 4℃，6000g 力条件下离心 10 分钟。弃沉淀，收集上清。

8. 在上清中加入 10ul 试剂WT，在 4℃，50000g 力条件下离心 20 分钟。

【注】：

没有 50000g 离心条件，可以降低离心力。

至少要 20000g 以上离心力。

降低离心力后高尔基体回收率会下降。

9. 弃上清，在沉淀中加入 500μl 冷的试剂 B，混匀。

10. 在 4℃，50000g 力条件下离心 30 分钟。弃上清，收集沉淀。

【注】：

没有 50000g 离心条件，可以降低离心力。

至少要20000g 以上离心力。

降低离心力后高尔基体回收率会下降。

11. 沉淀用高尔基体保存液重悬保存或直接用于下游实验应用。

【注】：

可以不用试剂盒中提供的保存液。

根据实验需要用自己的其他缓冲液保存或直接用于下游实验