大鼠视神经少突胶质细胞培养实验

来源：内容来源于网络浏览量：666次

【导读】实验方法原理采用视神经，DMEM/F12条件培养基培养，观察细胞形态及生长，并进行免疫组织化学鉴定。实验材料Wistar大鼠试剂、试剂盒腐胺转铁蛋白胰岛素甲状腺素谷氨酰胺小牛血清兔...

实验方法原理

采用视神经，DMEM/F12条件培养基培养，观察细胞形态及生长，并进行免疫组织化学鉴定。

实验材料

Wistar大鼠

试剂、试剂盒

腐胺转铁蛋白胰岛素甲状腺素谷氨酰胺小牛血清兔抗鼠GC抗体

仪器、耗材

眼科剪滴管离心机培养皿CO2培养箱

实验步骤

一、实验步骤

1.取新生2d的Wistar大鼠10只，无菌条件下取出双侧视神经。

2.接种至24孔培养板内经多聚赖氨酸处理的盖玻片上。

3.加入含30gL-1小牛血清的DMEM/F12培养基，37°C，50mL/LCO2，1**%湿度连续培养3d。

4.3d后弃废液，改为含5gL-1小牛血清DMEM/F12条件培养液继续培养。

5.每周换液2次。在获得足够的细胞数量后，改用无血清条件培养液继续培养，每2d换液一次。

二、形态学观察

每天在倒置显微镜，观察培养细胞的生长过程和形态学变化并拍照。

三、免疫细胞化学鉴定

1.将含细胞盖玻片取出，0.01molL-1PBS冲洗3次×5min。

2.冷丙酮固定10min。

3.PBS冲洗(3次×5min)。

4.30gL-1过氧化氢室温孵育15min。

5.PBS冲洗3次×5min。

6.滴加正常山羊血清，室温孵育20min。

7.滴加1:100GC抗体，阴性对照以PBS代替一抗，37°C孵育60min。

8.PBS冲洗3次×5min。

9.滴加生物素标记羊抗兔IgG，37°C，20min。

10.PBS冲洗3次×5min。

11.滴加辣根酶标记链酶卵白素工作液。

12.DAB工作液显色，自来水终止反应。

13.脱水，透明，DPX封片保存。

四、结果

1.形态学观察结果

组织块24h开始贴壁，48～72h可见神经组织边缘游出少量细胞，主要为圆形或梭形(图1)。8～9d左右，细胞基本铺满培养孔。此时改用无血清条件培养基培养进行纯化。培养过程中，部分细胞死亡。12d左右获得的细胞胞体基本为呈圆形或多角型，直径约6～10m。细胞核较大，胞质少(图2)。

2.免疫组织化学染色结果

培养的视神经少突胶质细胞的免疫组织化学染色GC蛋白阳性，未加一抗的呈阴性。染色结果显示成熟的少突胶质细胞突起丰富，互相形成蜘蛛网状(图3)。苏木素复染，异质细胞较少，90%以上为阳性细胞(图4)。

Figure1Cellsmigratedfromopticnervetissueatthethirdday(10×10)

图1.培养第3天，细胞自视神经迁出(10×10)

Figure2Purifiedoligodendrocytesofopticnerveatthefifteenthday(10×40)

图2.培养第15天，纯化的视神经少突胶质细胞(10×40)

Figure3PositiveexpressionofGCinoligodendrocytesattheseventhday(10×20)

图3.培养第7天，少突胶质细胞GC阳性表达(10×20)

Figure4PositiveexpressionofGCinpurifiedoligodendrocytesatthefifteenthday(hematoxylinstaining)(10×20)

图4.培养第15天，纯化的少突胶质细胞GC阳性表达(苏木素复染)(10×20)

仪器网-专业分析仪器服务平台,实验室仪器设备交易网,仪器行业专业网络宣传媒体。

2004-09-11 09:23:05

标签：

收藏(0) 赞(0) 踩(0)

随时了解更多仪器资讯，求购、招标、中标信息实时更新，厂商招商信息随时看。大量、齐全、专业的仪器信息尽在仪器网（yiqi.com）。扫一扫关注仪器网官方微信，随时随地查看仪器用户采购、招标需求！

您可能感兴趣

神经胶质细胞培养实验2004-09-11 09:23:06

实验方法原理神经细胞（神经元）不易培养，只有在适宜情况下，如接种在胶原底层上，或加入神经生长因子和胶质细胞因
细胞培养实验中需要的材料2004-07-25 09:29:07

1.种类1.1.细胞培养实验用品均为无菌，除了玻璃容器与pasteurpipet外，其它均为塑料无
一个标准的细胞培养实验室应该是这样的……2004-07-29 09:50:25

导语你所在的细胞培养实验室是功能完善的细胞培养实验室吗，不但要布局合理，还要操作安全、方便，并能避免污染，既
一个标准的细胞培养实验室应该是这样的……2004-07-29 09:50:25

导语你所在的细胞培养实验室是功能完善的细胞培养实验室吗，不但要布局合理，还要操作安全、方便，并能避免污染，既
细胞培养实验室常用的基本设备2004-09-07 09:23:11

有哪些，信帆生物为您解答！常用的基本设备（1）仪器a）显微镜：倒置显微镜是组织细胞培养室所必需的日常工作常规
信帆生物为您分享：细胞培养实验关于实验室设计的几个小心得2004-09-07 09:23:11

！细胞培养实验室应能进行六方面的工作：无菌操作、孵育、制备、清洗、消毒灭菌处理、储藏。1．无菌操作区（1）无
兔膀胱平滑肌细胞培养实验2004-09-11 09:23:06

兔膀胱平滑肌细胞培养可以：（1）分离得到高纯度兔膀胱平滑肌细胞；（2）进行细胞学鉴定研究；（3）用于细胞学其
人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的细胞培养实验2004-09-18 09:23:03

1.细胞培养实验中将15-20cm长的新生儿脐带放入无菌的PBS溶液中储存。（注：4℃下最多贮存24小时，室
讲述细胞培养实验室无菌操作环境的构建2004-11-06 09:23:11

1、细胞培养箱之细胞培养实验室，必须要在无菌的环境下操作，无菌操作室无菌操作区只限于细胞培养及其他无菌操作的
细胞培养实验室的设备配置及各设备用途2004-11-06 09:23:12

对细胞培养所需的实验室设备的种类和使用建议，也有一定的标准和规范：细胞培养主要重点在于保持无菌操作，避免微生

版权与免责声明

①本文由仪器网入驻的作者或注册的会员撰写并发布，观点仅代表作者本人，不代表仪器网立场。若内容侵犯到您的合法权益，请及时告诉,我们立即通知作者，并马上删除。

②凡本网注明"来源：仪器网"的所有作品，版权均属于仪器网，转载时须经本网同意，并请注明仪器网(www.yiqi.com)。

③本网转载并注明来源的作品，目的在于传递更多信息，并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性，不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时，必须保留本网注明的作品来源，并自负版权等法律责任。

④若本站内容侵犯到您的合法权益，请及时告诉,我们马上修改或删除。邮箱：hezou_yiqi