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- 【导读】实验方法原理当初代培养成功,细胞生长增殖形成单层细胞后,进而扩展汇合,占满一切空间,此时需要进行分离培养。这一操作称传代或再培养。如拖延传代,细胞会因增殖过度,培养基营养枯竭和代谢...
实验方法原理当初代培养成功,细胞生长增殖形成单层细胞后,进而扩展汇合,占满一切空间,此时需要进行分离培养。这一操作称传代或再培养。如拖延传代,细胞会因增殖过度,培养基营养枯竭和代谢产物积累而发生中毒。80%汇合或刚汇合细胞是理想传代阶段。实验材料
细胞
试剂、试剂盒Hanks胰蛋白酶EDTA培养液
仪器、耗材吸管培养瓶
实验步骤1.吸除培养瓶内旧培养液;
2.向瓶内加入胰蛋白酶和EDTA混合液少许,以能覆满瓶底为限;
3.置温箱中2~5分钟(或在室温中,把培养瓶放在倒立显微镜台上镜下观察),当发现细胞胞质回缩,细胞间隙增大后,立即终止消化;
4.吸除消化液,向瓶内注入Hanks液数毫升,轻轻转动培养瓶,把残余消化液冲掉;注意加Hanks液冲洗细胞时,动作要轻,以免把已松动的细胞冲掉流失;如用胰蛋白酶液单独消化,吸除胰蛋白酶液后,可不用Hanks液冲洗,直接加入培养液;
5.用吸管吸取营养液轻轻反复吹打瓶壁细胞,使之从瓶壁脱离形成细胞悬液;吹打勿用力过猛,以免伤害细胞;
收起注意事项
6.计数板计数后(如非实验用,不计数亦可),把细胞悬液分成等份分装入数个培养瓶中,置温箱中培养。1.把握发了传代时机,已如前述,在80%~90%汇合阶段Z好,过早传代细胞产量少,过晚细胞健康状态不佳。
2.消化时间要适度,过短细胞不易从瓶壁脱落,过长细胞可脱落流失。
3.消化液浓度要适宜,过浓时消化作用强烈,细胞反应快,所需消化时间短,掌握不好,细胞易流失。
4.各种细胞对消化反应不同,有的敏感,有的迟钝,因此应根据所用细胞特点制定适宜消化措施。有的细胞附着瓶壁不牢,用吸管可从瓶壁直接吹下来,但这样容易伤害细胞,细胞大片脱落掉,不易计数,应尽可能采用消化法分散细胞为妥。
5.消化传代良好时,细胞受损害少,细胞悬液均匀,各分装样品中数量误差小,细胞生长增殖速度一致,实验结果可靠性大。仪器网-专业分析仪器服务平台,实验室仪器设备交易网,仪器行业专业网络宣传媒体。
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